Metabolické odpovědi metforminu a genetické polymorfismy genu SLC22A1 u PCOS

Cíle studie Obecný cíl Stanovení asociace metabolických odpovědí na metformin s polymorfismy genu SLC22A1 (rs628031 a rs2282143) u žen s PCOS Specifické cíle

• Vidět změny metabolického profilu (index tělesné hmotnosti, obvod pasu, krevní tlak, glykemický stav, inzulinová rezistence, c-peptid a lipid) za 24 týdnů léčby metforminem u žen s PCOS
• Stanovení frekvence polymorfismů genu SLC22A1 (rs628031 a rs2282143) u žen s PCOS
• Kategorizace pacientů s PCOS podle polymorfismů genu SLC22A1 (rs628031 a rs2282143) do divokých a variantních skupin
• Srovnání metabolických změn 24týdenní léčby metforminem mezi divokou vs. variantní skupinou polymorfismů genu SLC22A1 (rs628031 a rs2282143) u žen s PCOS

ostatní:

• Stanovení krátkodobých vedlejších účinků metforminu u žen s PCOS
• Srovnání vedlejších účinků metforminu u žen s PCOS s nebo bez polymorfismu genu SLC22A1 (rs628031 a rs2282143)

Materiály a metody:

Typ studia:

Prospektivní klinická studie

Místo studia:

Endokrinologická klinika BSMMU

Období studia:

října 2022 do září 2024

Studijní populace:

Ženy v reprodukčním věku (18 - 35 let) s PCOS

Metoda odběru vzorků:

Následné účelové/pohodlné vzorkování

Velikost vzorku:

Velikost vzorku se vypočítá podle následujícího vzorce:

n= {(Zα + Zβ)^2 × (σ1^2 + σ2^2)} ÷ (μ1 - μ2)^2 Z předchozí podobné studie, 2hodinový OGTT poměr glukózy/inzulinu (GIR) před a po 24 týdny léčby metforminem byly 2,3±2,5 a 3,2±3,2 ve variantním genotypu a 2,0±1,9 a 3,9±2,9 respektive v divokém genotypu SLC22A1 rs628031. Průměrné rozdíly ve variantním a divokém genotypu byly 0,9±0,7 a 1,9±1,0 respektive.

Zde Zα= 1,96 při 95% hladině spolehlivosti, Zβ= 1,28 při 90% síle, μ1= průměrné změny GIR po metforminu ve variantním genotypu rs628031 (AG/GG) = 0,9, μ2 = průměr GIR po metforminu u divokého genotypu z rs628031(AA) = 1,9, Za předpokladu standardní odchylky (SD)= 1,5 (σ1=σ2) v obou skupinách

Minimální počet vzorků ke studiu v každé skupině, n= {(1,96 + 1,28)^2 × (1,52 + 1,52)} ÷ (0,9 - 1,9)^2

• {(3,24)^2 × (2,25 + 2,25)} ÷ (1,0)^2
• {10,50 × 4,50} ÷ 1 = 47,25 ÷ 1 = 47,25 Pro tuto studii je zapotřebí alespoň 94 pacientů s PCOS. Nicméně s ohledem na předčasné ukončení studie bude do studie přijato alespoň 100 pacientů s PCOS. Velikost vzorku může být v případě potřeby zvětšena.

Postup studie Nově diagnostikovaných minimálně 100 žen v reprodukčním věku (18 - 35 let) pacientek s PCOS bude postupně rekrutováno z endokrinologického oddělení BSMMU. Pacientům bude odebrán informovaný písemný souhlas a požádáni, aby přišli na lačno v konkrétní den, čas a místo dvakrát týdně. Bude odebrána související anamnéza (reprodukční, osobní a rodinná anamnéza) a provede se fyzické vyšetření (výška, váha, obvod pasu, obvod boků, akné, hirsutismus, acanthosis nigricans) a všechna data budou zdokumentována v předem otestovaném polostrukturovaném dotazníku .

Odběr vzorků krve na začátku:

Každému účastníkovi bude odebráno asi 10 ml žilní krve s 8 - 12 hodinovým hladověním. Poté bude proveden 75g orální glukózový toleranční test (OGTT) a po dvou hodinách bude odebráno dalších 5 ml krve. Asi dva ml krve odebrané nalačno a dvě hodiny po OGTT budou uchovávány ve fluorované zkumavce pro měření glykémie ve stejný den odběru. Další dva ml plné krve budou uchovány při -70 °C na endokrinologickém oddělení pro polymorfismus délky fragmentů restrikční polymerázové řetězové reakce (PCR-RFLP) po dokončení všech biochemických analýz, aby se zabránilo zkreslení. Zbývajících 6 ml krve odebrané během hladovění a 3 ml krve odebrané po OGTT bude ponecháno stát po dobu 15 minut, aby se umožnilo srážení. Po odstředění bude sérum odděleno a uloženo do Eppendorfu. Po řádném označení budou uchovány v chladničce -700C. Biochemická analýza (profil glukózy a lipidů) séra bude provedena ve stejný den a inzulín a c-peptid do sedmi dnů od odběru.

Intervence Úpravy životního stylu Pacienti budou v době diagnózy informováni a bude jim poskytnut písemný dokument.

Strava

• Bude poskytnuta individuální dietní tabulka připravená dietologem
• Nadváha/obezita: Energetický deficit 500 kcal/den diety z udržovací diety
• Ostatní: Dieta na udržení hmotnosti Fyzická aktivita
• Minimálně 150 minut/týden středně intenzivní fyzické aktivity (rychlá chůze rychlostí 6 km/h) s posilováním svalů ve 2 dny/týden, které po sobě nejdou
• aktivitu provádět v alespoň 10minutových úsecích nebo přibližně 1000 krocích s cílem dosáhnout alespoň 30 minut denně alespoň 5 dní v týdnu

Předpis metforminu Složení každé tablety metforminu Každá tableta metforminu obsahuje metformin 500 mg HCl, BP spolu s neaktivními složkami povidonu, mikrokrystalické celulózy, sodné soli kroskarmelózy a stearanu hořečnatého. Kromě toho potah pro tablety obsahuje polyethylenglykol, polyvinylalkohol, oxid titaničitý, mastek, akáciovou gumu, maltodextrin, propylenglykol a přírodní příchutě.

Inventář Všechny tablety metforminu bude výzkumník pravidelně vydávat účastníkům studie na začátku a při 1. návštěvě (po týdnu 1) a 2. následné návštěvě po 12 týdnech udržovací léčby metforminem (1500 mg/den). Tablety metforminu budou konzervovány podle pokynů výrobce. Datum expirace a kvalita léků budou pravidelně kontrolovány.

Zaváděcí fáze Metformin bude předepisován v dávce 500 mg jednou denně po večeři a bude zvýšen na 1500 mg/den ve třech dílčích dávkách po hlavních jídlech do dvou týdnů od zahájení. Pacienti budou požádáni, aby jeden týden po zahájení léčby metforminem v dávce 1 500 mg/den přišli s přehledem dodržování léku a vedlejších účinků. Pacienti, kteří nebudou schopni tolerovat dávku 1500 mg/den, budou vyloučeni ze studie pro analýzu metabolických odpovědí.

Udržovací dávka: 1500 mg/den rozdělená do tří dávek po dobu 24 týdnů Sledování: Pacienti budou požádáni, aby se dostavili na tři kontrolní návštěvy po 1, 12 a 24 týdnech udržovací léčby metforminem s obdobím dvou týdnů v obou směrech. Během 1. kontrolní návštěvy (po 1 týdnu) bude monitorována kompliance pacientů s lékem a vedlejší účinky; klinický stav spolu s životním stylem a dodržováním léku a nežádoucí účinky budou dokumentovány po 12 týdnech (2. kontrolní návštěva). Po 24 týdnech (3. návštěva) budou také provedeny biochemické metabolické profily pacienta s výše uvedenými klinickými informacemi.

Odběr krevního vzorku po 24 týdnech Po 24 týdnech léčby metforminem bude odebráno přibližně 8 ml žilní krve s 8–12 hodinovým hladověním, aby se změřil FBG, HbA1C, inzulín, c-peptid a lipidový profil a 75 g OGTT s následným pěti Pro měření glukózy a inzulinu bude odebráno ml krve.

Soulad s léky:

První dva týdny a poté při každé návštěvě výzkumníka bude monitorován po telefonu. Pacienti budou požádáni, aby přišli s prázdnými blistry metforminu. Za účelem řádného sledování dodržování bude vedena kniha záznamů. Pacienti s lékovou kompliancí < 95 % v kteroukoli dobu studie budou vyloučeni z analýzy metabolických odpovědí.

Sledování nežádoucích účinků:

Při každé návštěvě bude pacientům poskytnut deník nežádoucích příhod (AE) pro zaznamenávání předem specifikovaných gastrointestinálních (GI) příhod. Budou také požádáni o jakékoli závažné nežádoucí účinky (SAE) nebo jiné nežádoucí účinky kromě GI příhody. Všechny AE a SAE budou zaznamenány v dané formě AE a budou zachovány v souborech pacientů. Pacientkám bude doporučeno přísně používat bariérovou antikoncepci. Sérová ALT a kreatinin budou měřeny také po 24 týdnech léčby metforminem.