Synchronisation und Desynchronisation zwischen zirkadianen Rhythmen bei Patienten mit verzögertem Schlafphasensyndrom (DSPS)

Methode:

Themen:

Insgesamt 20 Probanden, 10 als DSPS-Patienten diagnostiziert und 10 passende gesunde Kontrollen mit einem nachgewiesenen normalen Schlaf-Wach-Zyklus.

Ausschlusskriterien für die Einstellung wären ein Body-Mass-Index (BMI) über 28 oder unter 22, Schichtarbeit oder chronische Erkrankungen und chronische Medikamenteneinnahme.

Verfahren:

Experiment 1 – Ein Vergleich zwischen 10 Probanden mit normalem Rhythmus und 10 DSPS-Probanden mit eingeschränktem Schlaf-Wach-Rhythmus

Stufe 1: 10-tägige aktigraphische Überwachung unter eingeschränktem Schlafplan (unter Verwendung von Weckern): DSPS-Patienten werden um 7:00 Uhr geweckt, und Kontrollpersonen werden um 3:00 Uhr geweckt.

Stufe 2: Eine 36-stündige Überwachung der folgenden Maßnahmen: Körpertemperatur, Melatonin, Cortisol, Ghrelin, subjektives Hungergefühl und Essverhalten. Die Probanden werden mit Nahrung nach Belieben versorgt und angewiesen, zu essen, was sie wollen, wann immer sie Hunger verspüren.

Experiment 2 – Ein Vergleich zwischen 10 Personen mit normalem Rhythmus und 10 DSPS-Personen unter Ad-libitum-Schlafbedingungen

Stufe 1: Eine 10-tägige aktigraphische Überwachung unter Ad-libitum-Schlafplan. Die Patienten werden angewiesen, ins Bett zu gehen, wenn sie sich müde fühlen, und jedes unnatürliche Erwachen zu vermeiden.

Stufe 2: ähnlich wie Experiment 1.

Experiment 3 – Untersuchung von DSPS-Patienten unter Melatonin-Verabreichung und ad libitum-Schlaf nach 12 Wochen Behandlung

Stufe 1: Eine 10-tägige aktigraphische Überwachung unter Ad-libitum-Schlafplan. Die Patienten werden angewiesen, ins Bett zu gehen, wenn sie sich müde fühlen, und jedes unnatürliche Erwachen zu vermeiden. Melatonin wird nach ärztlicher Anweisung (in der Regel um 22:00 Uhr) eingenommen.

Stufe 2: ähnlich wie Experiment 1.

Messungen:

Das subjektive Hungergefühl wird mit Bewertungen der visuellen Analogskala zur Appetitbeurteilung gemessen (Flint et al. 2000; Oh et al. 2002; Parker et al. 2004).

Der Zeitpunkt der Mahlzeiten und das Essverhalten werden vom Experimentator während der 36-stündigen Überwachung aufgezeichnet.

Der Schlaf-Wach-Rhythmus (normal oder DSPS) wird mit dem Actiwatch Wrist Activity Monitoring System (Actiwatch, Cambridge Neurotechnology LTD.) bestimmt.

Plasmaspiegel von Ghrelin: werden 36 Stunden lang alle 2 Stunden entnommen. 30 Minuten vor der ersten Blutentnahme wird ein intravenöser Katheter am Arm des Probanden platziert. Blutproben werden mit gekühlten Vacutainer-EDTA-Röhrchen entnommen und sofort zentrifugiert. Plasma-Ghrelin wird mit einem kommerziellen Radioimmunoassay (RIA-Phoenix Pharmaceuticals) gemessen.

Speichelspiegel von Melatonin und Cortisol: Speichel wird gesammelt, indem ein Wolltupfer von einfachen Salivetten (Sarstedt, Einwegprodukte, Regency Park, Adelaide) in den Mund der Probanden gelegt und 5 Minuten lang gekaut wird. Speichelproben werden zu insgesamt 18 Zeitpunkten über einen Zeitraum von 36 Stunden für jeden Probanden entnommen. Die Proben werden bis zum Ende jedes 24-Stunden-Zeitraums in Salivette-Röhrchen im Kühlschrank bei ±4 ºC aufbewahrt. Die Salivette-Röhrchen werden 15 Minuten lang bei 3000 g zentrifugiert und die Proben bis zur Analyse bei -20 °C eingefroren.

Melatoninbehandlung: Subjekte mit DSPS in der Behandlungsgruppe werden mit Melatonin gemäß einem Standardprotokoll für 3 Monate vor dem Experiment behandelt.

Orale Temperatur: wird mit einem standardmäßigen medizinischen Quecksilberthermometer gemessen, das für 3 Minuten zu insgesamt 18 Zeitpunkten über einen Zeitraum von 36 Stunden direkt nach der Speichelprobenentnahme unter die Zunge gelegt wird.

Analyseassays von Melatonin und Cortisol: Melatonin im Speichel wurde durch einen direkten Radioimmunoassay (RIA) gemessen. Das Kit wird von LDN GmbH & Co, KG, Nordhorn Deutschland (Kat-Nr: DSL-BA-1200) hergestellt und ist speziell für die quantitative Bestimmung von Melatonin im Speichel konzipiert. Die Kreuzreaktivität des Assays für N-Acetylserotonin, 5-Methoxytryptophol und 5-Methoxytryptamin beträgt 0,80 %, 0,70 % und 0,08 %. Serotonin, 5-Methoxyindol-3-Essigsäure ist jeweils < 0,01 %. Die Sensitivität des Assays beträgt 1 ng/L. Die Intra- und Intervariationen betragen 11,3 % bzw. 12 %. Cortisolkonzentrationen im Speichel wurden mit einem kompetitiven Festphasen-Radioimmunoassay [Coat-A-Count, Diagnostic Products Corp (DPC)] gemessen. Das Protokoll folgte den Anweisungen des Kits „Coat-Count Free Cortisol in Speichel“ von DPC.

Ghrelin-Assay: Die immunreaktiven Ghrelin-Konzentrationen im Plasma werden in doppelter Ausführung mit einem kommerziellen Radioimmunoassay (RIA) gemessen, der 125I-markiertes bioaktives Ghrelin als Tracer und einen polyklonalen Kaninchen-Antikörper verwendet, der gegen octanoyliertes menschliches Ghrelin in voller Länge gezüchtet wurde (Phoenix Pharmaceuticals, Belmont, CA). .

Einstellung:

Die Experimente werden am Institut für Schlaf- und Müdigkeitsmedizin, dem Chaim Sheba Medical Center, Tel Hashomer, durchgeführt.