Estudio de infliximab de berilio: ensayo clínico de intervención (BISCIT)

Hipótesis:

La hipótesis central de este estudio es que infliximab demostrará ser eficaz en el tratamiento de la enfermedad crónica por berilio (CBD), y que lo hará al inhibir la proliferación de células T específicas de berilio y la producción de citoquinas.

Objetivos específicos:

Objetivo Específico 1: Determinar la eficacia clínica de infliximab en la enfermedad crónica por berilio. La eficacia de infliximab se medirá mediante la mejora en el intercambio de gases arteriales o el gradiente de oxígeno alveolar arterial (A-ad02) al final del ejercicio en sujetos con CBD que continúan sintomáticos y con insuficiencia pulmonar a pesar del tratamiento actual con prednisona y/o metotrexato. Las medidas de resultado secundarias incluirán cambios en el flujo de aire, volumen pulmonar, capacidad de difusión (DLCO), profusión de pequeñas opacidades en la radiografía de tórax, puntaje de disnea y cuestionarios de calidad de vida.

Objetivo Específico 2: Determinar el efecto de infliximab sobre marcadores intermedios de función biológica en CBD. Los estudios in vitro examinarán el efecto de infliximab en células sanguíneas y pulmonares en cultivo, medido por una disminución en la proliferación de linfocitos estimulada por berilio (Be); una disminución en la producción de citocinas estimuladas por Be, incluidos TNF-a, IFN-g e IL-2; alteración de la apoptosis estimulada por Be de macrófagos o linfocitos.

Diseño y métodos de investigación: dado que no hay información disponible sobre la farmacocinética de infliximab en pacientes con CBD, la información farmacocinética disponible del uso de infliximab en otras afecciones inflamatorias similares formó la base para seleccionar el régimen de dosis para este protocolo. En particular, se utilizará una dosis de 5 mg/kg para este estudio, según la selección de dosis utilizada en el protocolo de sarcoidosis C0168T48 actualmente en curso en un ensayo multicéntrico (NJC IRB HS-1771).

Este es un estudio controlado con placebo, doble ciego, aleatorizado, de 40 semanas, iniciado por un investigador para evaluar la eficacia de infliximab en dosis de 5 mg/kg, en comparación con placebo, en personas con CBD sintomático con afectación pulmonar a pesar del tratamiento con prednisona y/o metotrexato. Se infundirá infliximab o placebo en las semanas 0, 2, 6, 12, 18 y 24, incluida la espirometría, los volúmenes pulmonares y la DLCO. Aproximadamente 20 participantes se inscribirán en el estudio en el Centro Médico y de Investigación Nacional Judío en una proporción de fármaco: placebo de 3:1.

El criterio principal de valoración de este estudio será un cambio de la prueba inicial a la prueba de la semana 28 en el A-adO2 al final del ejercicio en una caminata de 6 minutos. En la evaluación inicial, los sujetos se someterán a pruebas completas de función pulmonar, extracción de sangre para la prueba de proliferación de linfocitos de berilio (BeLPT), caminata de 6 minutos, radiografía de tórax y cuestionarios de calidad de vida y disnea. Seguimiento de prueba de función pulmonar completa, descanso y ejercicio final A-ad02, oximetría de pulso con distancia total (carga de trabajo) lograda en una caminata de 6 minutos y radiografía de tórax se medirá en la semana 12. Mediciones de resultados finales (igual que las pruebas de referencia) , incluida la broncoscopia con BAL, se repetirá en la semana 28. Se programará una cita de seguimiento en la semana 40 para evaluar el estado de salud general de los pacientes, así como medir el A-ad02 en reposo y al final del ejercicio y la oximetría de pulso con caminata de 6 minutos, prueba de función pulmonar, puntuación de QOL/disnea y radiografía de tórax intersticial. puntuación de profusión de opacidad pulmonar.

Los efectos de infliximab sobre la respuesta inmunitaria estimulada por Be se evaluarán comparando los siguientes marcadores antes y después de la terapia con infliximab: 1. BeLPT de células sanguíneas y de lavado (BAL); 2. Producción de citoquinas estimulada por Be de células BAL, incluidos TNF-a, IFN-γ e IL-2; 3. Apoptosis específica de células. El ensayo incluirá un control no estimulado, BeSO4 100 mM, control de sal metálica de Al2(SO4)3 100 mM, PHA - control de proliferación de linfocitos, control de infliximab, infliximab + BeSO4, infliximab + Al2(SO4)3. En los días 4, 5 y 6 después de la exposición a Be, los pozos se pulsan con el precursor específico de ADN, 3H-TdR, se incuban durante cuatro horas, se recolectan en filtros de fibra de vidrio y se usan métodos de centelleo líquido para el conteo. Los resultados se informan como un índice de estimulación, que es una relación entre los recuentos por minuto del grupo de tratamiento y los recuentos por minuto del grupo no estimulado. Para determinar el efecto de infliximab en la producción de citocinas, se estimularán CBD BAL y CBD PBMC con Be durante 24 horas. Se utilizará ELISA para determinar los niveles de sobrenadante de TNF-α, IFN-γ e IL-2. Después de 24 horas de exposición al berilio, recolectaremos los sobrenadantes y realizaremos pruebas ELISA para TNF-α, IFN-γ e IL-2. Para determinar si infliximab provoca un aumento de la apoptosis de linfocitos o macrófagos, se cultivarán células CBD BAL durante 24 horas con Be. Las células se teñirán dos veces para macrófagos CD4+ (Th1) y CD71+ frente a caspasa-3, caspasa-8 y caspasa-9 activadas intracelularmente. Estos estudios in vitro se utilizarán para evaluar la posible función biológica de infliximab en enfermedades inmunomediadas utilizando un modelo de enfermedad con antígeno conocido, CBD.