Sincronización y desincronización entre ritmos circadianos en pacientes con síndrome de fase de sueño retrasada (DSPS)

Método:

Asignaturas:

Un total de 20 sujetos, 10 diagnosticados como pacientes con DSPS y 10 controles sanos emparejados con un ciclo de sueño-vigilia normal comprobado.

Los criterios de exclusión para el reclutamiento serían índice de masa corporal (IMC) superior a 28 o inferior a 22, turnos de trabajo o enfermedad crónica y uso crónico de medicamentos.

Procedimiento:

Experimento 1: una comparación entre 10 sujetos con ritmo normal y 10 sujetos con DSPS bajo un horario restringido de sueño y vigilia

Etapa 1: monitoreo actigráfico de 10 días bajo un horario de sueño restringido (usando relojes despertadores): los pacientes con DSPS se despertarán a las 7:00 a. m. y los sujetos de control se despertarán a las 3:00 a. m.

Etapa 2: Un seguimiento de 36 horas de las siguientes medidas: temperatura corporal, melatonina, cortisol, grelina, sensación de hambre subjetiva y conducta alimentaria. A los sujetos se les proporcionará comida ad libitum y se les indicará que coman lo que quieran, siempre que sientan hambre.

Experimento 2: una comparación entre 10 sujetos con ritmo normal y 10 sujetos con DSPS en condiciones de sueño ad libitum

Etapa 1: Monitoreo actigráfico de 10 días bajo horario de sueño ad libitum. Se indicará a los pacientes que se vayan a dormir cada vez que se sientan cansados ​​y que eviten despertarse de forma no natural.

Etapa 2: similar al experimento 1.

Experimento 3- Examen de pacientes con DSPS bajo administración de melatonina y sueño ad libitum, después de 12 semanas de tratamiento

Etapa 1: Monitoreo actigráfico de 10 días bajo horario de sueño ad libitum. Se indicará a los pacientes que se vayan a dormir cada vez que se sientan cansados ​​y que eviten despertarse de forma no natural. La melatonina se tomará según indicación médica (normalmente a las 22:00 horas).

Etapa 2: similar al experimento 1.

Mediciones:

La sensación de hambre subjetiva se medirá con las calificaciones de la escala analógica visual para evaluar el apetito (Flint et al. 2000; Oh et al. 2002; Parker et al. 2004).

El tiempo de las comidas y el comportamiento alimentario serán registrados por el experimentador durante el seguimiento de 36 horas.

El ritmo de sueño-vigilia (normal o DSPS) se determinará utilizando el sistema de monitoreo de actividad de muñeca Actiwatch (Actiwatch, Cambridge Neurotechnology LTD.)

Niveles plasmáticos de grelina: se tomarán muestras cada 2 horas durante 36 horas. Se colocará un catéter intravenoso en el brazo del sujeto 30 minutos antes de la primera muestra de sangre. Las muestras de sangre se recogerán con tubos Vacutainer EDTA refrigerados y se centrifugarán inmediatamente. La grelina plasmática se medirá utilizando un radioinmunoensayo comercial (RIA-Phoenix Pharmaceuticals).

Niveles salivales de melatonina y cortisol: la saliva se recolectará colocando un hisopo de lana de Salivettes simples (Sarstedt, desechables, productos, Regency Park, Adelaide) en la boca de los sujetos con masticación durante 5 minutos. Se tomarán muestras de saliva en un total de 18 puntos de tiempo durante un período de 36 h para cada sujeto. Las muestras se mantendrán en tubos Salivette en el frigorífico a ±4 ºC hasta el final de cada periodo de 24 h. Los tubos de Salivette se centrifugarán durante 15 min a 3000 ´gy las muestras se congelarán a -20 ºC hasta su ensayo.

Tratamiento con melatonina: Los sujetos con DSPS en el grupo de tratamiento serán tratados con melatonina según un protocolo estándar durante 3 meses antes del experimento.

Temperatura oral: se medirá con un termómetro de mercurio médico estándar, colocado debajo de la lengua durante 3 minutos en un total de 18 puntos de tiempo durante un período de 36 h justo después de la recolección de la muestra de saliva.

Análisis Ensayos de melatonina y cortisol: La melatonina en saliva se midió mediante un radioinmunoensayo directo (RIA). El kit está fabricado por LDN GmbH & Co, KG, Nordhorn Alemania (Cat-No: DSL-BA-1200) y está especialmente diseñado para la determinación cuantitativa de melatonina en saliva. La reactividad cruzada del ensayo para N-acetilserotonina, 5-metoxitriptol y 5-metoxitriptamina es 0,80 %, 0,70 % y 0,08 %. La serotonina, el ácido 5-metoxiindol-3-acético es <0,01 %, respectivamente. La sensibilidad del ensayo es de 1 ng/L. Las intra e intervariaciones son del 11,3% y 12%, respectivamente. Las concentraciones de cortisol en saliva se midieron con un radioinmunoensayo competitivo en etapa sólida [Coat-A-Count, Diagnostic Products Corp (DPC)]. El protocolo siguió las instrucciones del kit Coat-Count Free Cortisol in Saliva de DPC.

Ensayo de grelina: los niveles de grelina inmunorreactiva en plasma se medirán por duplicado utilizando un radioinmunoensayo comercial (RIA) que utiliza grelina bioactiva marcada con 125I como marcador y un anticuerpo policlonal de conejo producido contra la grelina humana octanoilada de longitud completa (Phoenix Pharmaceuticals, Belmont, CA) .

Ajuste:

Los experimentos se llevarán a cabo en el Instituto de Medicina del Sueño y la Fatiga, Centro Médico Chaim Sheba, Tel Hashomer.