Capacidad de colonización y persistencia de un probiótico multicepa en la alergia alimentaria pediátrica a la leche o al huevo.

Este estudio evalúa la capacidad de colonización de tres probióticos (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve y Bifidobacterium infantis) en niños alérgicos a la leche y/o al huevo.

Se espera el reclutamiento de unos 20 pacientes alérgicos al huevo y/o leche con edades comprendidas entre los 10 y los 14 meses confirmados con prueba de tolerancia oral doble ciego frente a placebo (Grupo 1).

Además, se reclutarán unos 10 pacientes sensibles a la leche o al huevo pero no confirmados con prueba de tolerancia oral doble ciego frente a placebo (Grupo 2) y unos 10 individuos sanos (Grupo 3).

Para los 40 pacientes:

1. Se evaluará la presencia basal de Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V y Bifidobacterium infantis M-63;

   Solo para los niños del Grupo 1 se evaluará también:

2. La presencia de las mismas cepas durante los 30 días de administración de probióticos multicepa que contenían 3,5 x 109 UFC de Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V y Bifidobacterium infantis M-63 y luego de 60 días desde la suspensión de la administración.

Cuantificación de B. breve, B. longum subsp. longum y B. longum subsp. infantis en muestras fecales se llevó a cabo mediante qRT-PCR utilizando la plataforma Light Cycler 480 (Roche Diagnostics, Mannheim, Alemania). Los ensayos se realizaron con una mezcla de amplificación de PCR de 20 µl que contenía: 10 µl de LightCycler 480 Probe Master mix (Roche Diagnostics), 2 µl de cebadores y sondas (concentraciones optimizadas, 0,5 µM y 0,1 µM, respectivamente), 3 µl de H2O de grado molecular y Plantilla de ADN de 5 µl. Cada muestra se analizó por duplicado para garantizar la reproducibilidad de los datos. El perfil de temperatura de la RT-PCR consistió en una desnaturalización inicial a 95 °C durante 10 min, 45 ciclos de amplificación a 95 °C durante 10 s, 60 °C durante 30 s y 72 °C durante 1 s seguido de un paso final de enfriamiento a 40°C durante 30 seg. La cuantificación absoluta se realizó utilizando el "método del máximo de la segunda derivada"

Análisis estadísticos: se utilizó la prueba de rango con signo de Wilcoxon para comparar las concentraciones de especies de probióticos durante el transcurso del tiempo.