Valeur diagnostique de la tryptase de la moelle osseuse dans la mastocytose systémique (EvaTryMS)

Les mastocytoses sont un groupe de troubles caractérisés par une accumulation clonale de mastocytes dans divers organes. Le diagnostic de la mastocytose est difficile et les patients restent non diagnostiqués pendant des années. En utilisant les critères de diagnostic définis par l'Organisation mondiale de la santé (OMS), la mastocytose peut être divisée entre la mastocytose cutanée (CM) et la mastocytose systémique (SM).

Une étude a suggéré que la mesure de la tryptase dans le plasma à partir d'un aspirat de moelle osseuse (de BMA) pourrait être utile pour le diagnostic de SM. Les résultats d'une étude préliminaire au CHU de Toulouse ont suggéré qu'un taux de tryptase dans la moelle osseuse (TM) de 50 µg/L ou plus pourrait être un critère diagnostique plus sensible (sensibilité de 94,7 %) que le résultat histologique de la BMB (le principal critère diagnostique pour le SM avec une sensibilité de 68 à 80 % dans les centres experts) pour le diagnostic du SM chez les patients atteints de mastocytose cutanée.

Cette étude préliminaire ayant été réalisée sur un nombre limité de patients et dans un seul centre, la valeur diagnostique de la MT pour le diagnostic de SM, doit être confirmée sur une population plus large et plus représentative.

De plus, les enquêteurs proposent d'évaluer :

• La précision diagnostique de MT pour le diagnostic de SM chez les patients sans mastocytose cutanée ;
• La précision diagnostique de la MT absolue et corrigée pour le diagnostic de SM avec et sans mastocytose cutanée ;
• La précision diagnostique du rapport MT/ST pour le diagnostic de SM avec et sans mastocytose cutanée ;
• La précision diagnostique de la cytométrie en flux réalisée sur des cellules collectées par BMA et maintenues dans une solution de conservation pour le diagnostic de SM avec et sans mastocytose cutanée ;
• La précision diagnostique de la quantification de la fraction de cellules positives pour la mutation KIT dans le sang périphérique pour le diagnostic de SM avec et sans mastocytose dans la peau ;
• Corrélation des résultats de la quantification de la fraction de cellules positives à la mutation KIT dans le sang périphérique avec les résultats du niveau de MT, les résultats du rapport MT/ST et les résultats de la MT absolue et corrigée ;
• Corréler les résultats du CF réalisé à la fois sur tubes EDTA/TransFix® et sur tubes héparine sodique et valider les conditions de transport (20-25°C en 24 à 96H) pour le CF ; ces analyses seront réalisées sur les 50 premiers échantillons de BMA.

Les prélèvements pour ces tests de diagnostic seront effectués le jour de l'inscription. Pour chaque patient inscrit, un échantillon de 5 mL de sang périphérique (EDTA) et 1 mL d'aspirat de BM (0,5 mL dans un tube EDTA/TransFix® et 0,5 mL dans un tube héparinate de sodium) seront prélevés de la même manière jour, et expédié en moins de 24 à 96H (+20-25°C) vers un laboratoire central.

Pour chaque patient, l'ADN génomique des leucocytes totaux sera purifié à partir des échantillons de sang périphérique EDTA, et utilisé ultérieurement pour la quantification des mutations du kit par qPCR en temps réel. Le niveau de tryptase plasmatique sera mesuré à partir de l'échantillon de sang périphérique EDTA après qu'une aliquote a été prélevée pour l'extraction de l'ADN. L'échantillon d'aspiration de moelle osseuse sera d'abord utilisé pour l'immunophénotypage des mastocytes BM par cytométrie en flux (FC), puis, après centrifugation, pour la mesure du niveau de tryptase BM. Le degré de dilution de l'aspiration BM par le sang périphérique sera estimé en comparant le pourcentage de granulocytes CD16bright vs CD16low dans les échantillons BM, et utilisé pour ajuster la tryptase BM. Les mesures de tryptase seront effectuées à partir de plasma EDTA ou Na, héparinate, à l'aide d'un immunodosage enzymatique fluoré standardisé sur un analyseur automatisé. L'immunophénotypage des mastocytes BM sera effectué sur aspiration BM stabilisée par TransFix® (un réactif de stabilisation d'antigène cellulaire) (et pour les premiers 50 échantillons sur aspiration BM dans Na, héparinate) en utilisant un mélange prédéfini d'anti-CD45/CD117/CD34/ Anticorps CD2/CD25/CD16, couplés aux fluorochromes appropriés. L'ADN génomique des leucocytes BM sera extrait de 300 à 500 µL de sang périphérique (tous deux anticoagulés avec de l'EDTA) à l'aide d'un extracteur automatisé d'ADN Promega, puis stocké à +4 °C. La PCR quantitative sera effectuée à l'aide d'un test qPCR pré-validé (Life Technologies, Foster City, CA) avec un système de PCR rapide en temps réel 7900HT (Life Technologies).

La visite de fin d'étude est effectuée le jour même où le patient est vu pour être informé des résultats des investigations cliniques et de laboratoire effectuées. C'est aussi le jour où l'on discute de la prise en charge médicale planifiée de la mastocytose.