Validation d'une méthode de recherche de maladie résiduelle dans les tissus ovariens auto-cryopréservés (VMRDO)

La cryoconservation du tissu ovarien est proposée aux jeunes filles et femmes de moins de 35 ans devant subir un traitement gonadotoxique stérilisant, dans le but de préserver leur fertilité. La partie principale de l'ovaire est préservée, car les follicules primordiaux et primaires résistent aux protocoles de congélation/décongélation. En l'absence d'autres techniques (maturation in vivo, injection de follicules ovariens isolés, etc.), l'autogreffe de ce tissu cryoconservé est actuellement la seule technique permettant de restaurer la fertilité. L'autogreffe n'est possible que si l'indication de la cryoconservation ovarienne est une pathologie non néoplasique ou une pathologie maligne à faible risque de métastase ovarienne. Dans d'autres cas de pathologies néoplasiques, notamment en cas de leucémie aiguë, les tissus ne peuvent pas encore être réutilisés faute de technique codifiée d'évaluation de la maladie résiduelle (MRM). L'équipe développe et valide depuis deux ans une technique de recherche de maladie résiduelle dans des fragments de cortex ovarien en cas de leucémie aiguë. Cette technique repose sur un protocole original de dissociation du tissu ovarien pour obtenir une population de cellules ovariennes isolées analysables par cytométrie en flux multicolore. La spécificité et la sensibilité de la technique ont été démontrées dans un modèle expérimental. Ce modèle consiste à rechercher par cytométrie en flux 8 couleurs des cellules leucémiques caractérisables ajoutées à différentes dilutions à une population de cellules ovariennes isolées prélevées sur le cortex ovarien modèle et jusqu'à une dilution de 10-5. Lorsque les marqueurs moléculaires étaient présents au moment du diagnostic, ils ont été trouvés par réaction en chaîne par polymérase quantitative en temps réel (RQ-PCR) avec les mêmes dilutions. Le tissu modèle provenait d'un forage ovarien laparoscopique chez des patientes atteintes du syndrome des ovaires polykystiques. L'objectif principal de ce projet est de valider des techniques préalablement codifiées avec différentes populations de cellules leucémiques susceptibles d'être caractérisées. Les chercheurs visent ensuite à adapter et valider cette technique pour rechercher la MRD en utilisant la cytométrie en flux à 8 couleurs sur des fragments cryoconservés de cortex ovarien de patientes leucémiques à risque de métastases. Les objectifs secondaires seront de mettre en place des procédures de qualification oncologique des greffons en cas de pathologie maligne et de réfléchir aux recommandations d'utilisation de ce tissu ovarien cryoconservé par la technique de l'autogreffe pour ces indications.