A féreghajtó szerek hatékonyságának monitorozása a talajban terjedő helminták kezelésében P2 (ConWorm)

Az elsődleges célkítűzés:

A tájékozott beleegyezés megszerzése után a célcsoportba tartozó iskolásokat felveszik, és felkérik, hogy adjanak friss székletmintát (4 óránál rövidebb időközönként), amelyet feldolgoznak a széklet tojásszámának (FEC) meghatározásához minden egyes átvitt talaj esetében. Helminths (STH) jelen van. A kezdeti mintavételnél a cél az, hogy legalább 250 fertőzött gyermeket regisztráljanak a talaj által terjesztett helminták (STH) legalább egyikére. Ezt a mintanagyságot a vizsgálati teljesítmény statisztikai elemzése alapján választották ki, véletlenszerű szimulációkkal korrelált, túldiszperz fekális tojásszám adatokkal, amelyek tükrözik a variancia-kovariancia struktúrát a kiválasztott valós széklet tojásszám (FEC) adatkészletében. Ez az elemzés azt sugallta, hogy akár 200 egyedből álló mintaméretre (α = 0,05, teljesítmény = 80%) volt szükség ahhoz, hogy 10 százalékpontos csökkenést észleljünk a nulla ~ 80%-os (egyedenkénti átlagos FEC ∆ százalékos) hatékonyságról széles körben. fertőzési forgatókönyvek skálája. Az arányokra vonatkozó szabványos teljesítményelemzések azt is jelezték, hogy a nulla gyógyulási aránytól való ~10 százalékpontos csökkenés kimutatásához 200-ig terjedő mintaméretre volt szükség (a legnagyobb mintákra az 50% körüli nulla hatékonyságtól való eltérés kimutatásához volt szükség). Tekintettel a 25%-os várható meg nem felelési arányra, ezért minden vizsgálati helyen 250 fertőzött alanyból álló mintát tartottak szükségesnek.

Minden székletmintát szolgáltató gyermeket 500 mg-os mebendazol (MBZ) egyszeri adaggal kezelnek felügyelet mellett (rágás + víz). A mebendazolt (MBZ) a koordináló csoport biztosítja (ingyenes). Hét-tizennégy nappal (maximális időközönként) a kezelés után egy második székletmintát vesznek a gyermekektől a FEC ismételt meghatározására. Azokat az alanyokat, akik nem tudnak székletmintát adni az utánkövetés során, vagy akik súlyos egyidejű egészségügyi állapotot tapasztalnak, vagy az első mintavétel időpontjában hasmenésük van, kizárják a vizsgálatból.

Másodlagos célok:

Öt vizsgálati helyen 100 fertőzött alany bélsármintáját kell megőrizni a mebendazollal (MBZ) végzett kezelés előtt egy csőben (1 gramm 10 ml 70%-os etanolban). Ugyanazon gyermekek mintáit a kezelés után ismét egy csőben kell tárolni (1 gramm 10 ml 70%-os etanolban). A mintákat a Genti Egyetem Parazitológiai Laboratóriumába küldték.

A kezelés előtt és után gyűjtött mintákat ezt követően molekuláris vizsgálatokkal megvizsgáljuk, a Necator americanus/Ancylostoma duodenal előfordulását és a rezisztenciával kapcsolatos β-tubulin mutációk előfordulását.

A kezelés előtt gyűjtött mintákat ezt követően molekuláris vizsgálatokkal megvizsgálják, hogy felmérjék az állatok szerepét a humán talajon átvitt helminták (STH) rezervoárjaként.

Parazitológiai technikák, talajon átvitt helminták (STH) széklet tojásszámának meghatározása. Minden székletmintát McMaster tojásszámláló technikával dolgoztunk fel az A. lumbricoides, T. trichiura és horogférgek fertőzéseinek kimutatására és számbavételére. Minden vizsgálati helyszín ismeri a technikát, és korábban McMaster tárgylemezeket biztosítottak.

Molekuláris vizsgálatok (Ghenti Egyetem Parazitológiai Laboratóriuma) és dezoxiribonukleinsav (DNS) extrakció.

A talaj által átvitt helminták (STH) DNS-ét a 70%-os etanolban tartósított mintákból a Qiagen mini székletkészlet segítségével vonják ki.

A talaj által átvitt helminták (STH) molekuláris azonosítása. A talajon átvitt helminták fajok: Ascaris (n=2), Trichuris (n=2) és horgosférgek (n=4) jelenlétét különböző molekuláris vizsgálatok segítségével értékeljük. A Trichuris fajok differenciálására fajspecifikus polimeráz láncreakciót (PCR) alkalmaznak. Az Ascaris és a kutya horogférgek megkülönböztetésére PCR-restrikciós fragmens hosszpolimorfizmust (PCR-RFLP) használnak. Az emberi horogférgek esetében kvantitatív PCR-t kell alkalmazni.

A mebendazol (MBZ) rezisztenciával kapcsolatos mutációk jelenléte a β-tubulinban Ezt a konkrét célkitűzést a McGill Egyetemmel (Kanada) együttműködésben valósítják meg.

Statisztikai analízis. Mind a gyógyulási arányt (CR), mind a széklet tojásszám csökkentését (FECR) figyelembe veszik a mebendazol (MBZ) talajon átterjedt helmintákkal szembeni hatékonyságának monitorozására. A statisztikai elemzés értékelése Vercruysse és munkatársai (2011) szerint történik.