补充维生素 D3 的急性作用

背景 研究人员之前已经完成了一项临床试验，在健康人体内长期补充维生素 D3，该试验在 UVB 血清 25-羟基维生素 D (25(OH)D) 增加可忽略不计的季节进行。 在这项研究（已提交，未发表）中，在前三周内发现了暂时的增加。 就个人而言，19 名参与者中有 14 人发现了这种暂时性增加。 这种现象在文献的其他地方没有描述过。 由于采样频率较低，这可能是可能的。

研究假设 研究人员假设这种现象是真实的，而不是人为的。 由于并非所有参与者都存在这种现象，研究人员还假设有影响力的参数可能包括性别、年龄、体重、身高、体重指数 (BMI)、每周食用脂肪鱼的次数、25(OH)D 起始水平和遗传参数（30 种色素单核苷酸多态性 (SNP)）。

研究设计 这是一项单中心、开放和非盲的临床试验。

干预参与者将收到包含足够维生素 D3 片剂（Cholecalciferol、Apovit、Takeda Pharma A/S、Roskilde、丹麦）的包裹，以支付对应于一周的消耗量。 他们将被指示每天服用一粒维生素 D3 片剂，相当于 85 微克 (ug)（3400 国际单位 (IU)）。

方法论方面

事先服用维生素 D 补充剂 参与者将被告知至少在研究开始前三周和研究期间不要使用维生素 D 补充剂或参加阳光假期。

每周将对依从性药片进行计数，参与者将在下周获得补充剂以控制依从性和登记的不良事件。 将指示参与者在每个血样期间以每天 ± ½ 片纠正研究药物摄入量的偏差。 未能遵守每周超过三片的研究药物将导致排除。

血液分析 血清 25(OH)D 将在液相色谱串联质谱仪 (LC-MS/MS) 上进行分析，这是目前最准确的分析方法。 该方法已与另一家临床实验室进行交叉检查，证明是可靠的。 血清 25(OH)D 也将由内部实验室进行分析以进行比较。

分析变异性 为尽量减少分析差异，至少将对 25(OH)D 分析进行三重分析（技术重复）。 来自同一受试者的所有 25(OH)D 样品将在一批中进行分析。 每次运行都将使用含 25(OH)D 的内标溶液。

总相对标准偏差 (SD) 在 20 nmol/l 的 4.9% 和 222 nmol/l 的 14.1% 之间变化，反映了实验变异性。

生物变异性 通过为每个参与者包括 7 个血清 25(OH)D 测量时间点，个体内变异性将降低。 已知血清 25(OH)D 随季节和阳光照射而变化。 因此，这项研究是在冬季半年进行的，此时环境 UVB 辐射和暴露在阳光下的身体区域在一年中的这个时候可以忽略不计 (17)。

遗传参数 SNP 基因分型。 将研究总共 30 个色素 SNP。 这些 SNP 的一个亚组先前已被证明会影响维生素 D3 补充剂诱导的 25(OH)D 增加（提交的论文，未发表）。

如前所述，使用 iPLEX1 Gold 试剂盒（Agena Bioscience Inc.，德国）对所有 SNP 进行基因分型。 具有少于五个受试者的基因型亚组的 SNP 与其他等位基因共享亚组（例如 基因型 AA 与 AG 而不是与 GG）。 少于 5 名受试者的杂合子亚组与等位基因共享亚组合并，显示对 25(OH)D 增长率的影响不显着 (P > 0.05)。 排除对 25(OH)D 没有等位基因剂量效应或显性等位基因效应的 SNP。 对于具有显性等位基因效应的 SNP，根据等位基因共享合并对 25(OH)D 增加率影响无显着差异的亚组。

参与者的选择：资格标准 所有参与者必须居住在丹麦。

统计考虑

随机化 将不使用随机化，因为本研究的目的是重现生物现象。 因此不会使用盲法。

研究规模 根据之前的维生素 D3 补充研究（已提交，未发表），从研究开始到研究结束的 25(OH)D 差异为 48 nmol l-1，SD 为 29 nmol l-1 . 在目前这项补充维生素 D3 的较短研究中，25(OH)D 的可检测差异预计是其一半，即 24 nmol l-1。 给定 5% 的显着性水平和 80% 的功效，需要 13 名参与者。 研究人员的目标是包括 19 名参与者，允许 6 人退出。

使用网站上在线提供的程序功率和样本大小计算版本 3.1.2.2014 执行样本大小计算：http://biostat.mc.vanderbilt.edu/wiki/Main/PowerSampleSize

数据收集 所有参与者将在研究开始前分配一个唯一的研究编号。 人口统计数据（性别、年龄、体重和身高）将在研究开始前收集/测量和登记。 每天消耗脂肪鱼粉的数量记录在问卷中。 所有表格都将标有参与者唯一的研究编号。 25(OH)D 样本将在研究结束后进行分析。 与参与者联系方式相关联的参与者研究编号保存在单独的表格中，安全保存并符合丹麦数据保护局的规定。

干预期间的背景饮食和饮食变化 在研究期间，在调查问卷中记录了每日消耗的脂肪鱼粉的数量，因为该参数可能会影响主要结果测量值，即 25(OH)D 随着时间的推移而增加。 调查问卷将被检查是否有错误以确保合规。

背景健康状况和生活方式，以及干预期间健康状况和生活方式的变化在整个研究过程中，每周监测参与者的健康状况和新药物的开始。

不良事件 轻微的暂时性副作用不会导致停用研究药物。 参与者将通过测量离子钙和碱性磷酸酶的血液样本进行监测。 高钙血症或肾结石等不良事件将导致被排除在研究之外。

统计分析 将使用 Kolmogorov-Smirnov 检验对单个数据进行检验，以评估数据是否呈正态分布。 正态分布的数据将通过学生 t 检验进行检验。 将使用 Wilcoxon 符号秩检验进行不同时间点的离子钙 (Ca2+) 水平的成对比较。

将分别研究以下模型：线性、逆、二次、三次、幂、S 型和指数。 最合适的模型（功率模型）的确定将基于 R2 值以及 25(OH)D 随时间增加的个体调查和小组调查之间的一致性。

最初，将单独检查参数对 25(OH)D 斜率的影响。 单独的重要参数的影响不是独立的，因此随后通过根据 P 值逐步向前选择部署在组合一般线性模型 (GLM) 中的单独重要参数来研究。 25 参数对临时峰值出现的影响还将研究血清 25(OH)D 随时间的变化。

将使用 SPSS 24.0 for Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, U.S.A.) 对数据进行统计分析。 P < 0.05 将被认为是显着的。 不会进行中期分析。

讨论和解释 研究结果的讨论和解释将包括对构成偏倚的重要研究局限性的考虑，以及对结果推广局限性的讨论。

结论 结论部分将直接与最初的假设陈述相关，并由随附的数据加以证明。

研究团队的角色和职责 作者的职责将规定如下： 1) 设计研究； 2) 进行研究； 3) 分析和解释数据； 4）准备文稿； 5) 对最终内容负主要责任，以及 6) 阅读并批准最终手稿。 将要求所有作者报告与本研究相关的利益冲突。