硝酸塩 INFORMER 野菜の研究

研究デザイン

介入間に 1 週​​間の休薬期間を設けたクロスオーバー研究デザインが使用されます。 参加者の介入前日と当日の食事は次のように標準化されます（訪問 1 での食事の選択は訪問 2 でも一致します）。

研究訪問の前日に:

朝食：白パントースト、卵、チーズ、ピーナッツバターまたはジャム。 昼食はかぼちゃのスープと白パンを提供します。 夕食：硝酸塩の少ないベジタリアンの食事。 お水は全てご用意させていただきます。 参加者は、研究訪問の24時間前に、コーヒーやカフェインを含む飲料、アルコール飲料の摂取、および運動を控えるよう求められます。

研究訪問当日は以下のとおりです。

参加者は絶食状態で研究ユニットに到着します。 介入には朝食と昼食が含まれます。 参加者には標準化された夕食、すなわち低硝酸塩ベジタリアン食事が提供されます。

お水は全てご用意させていただきます。 参加者は、研究訪問の24時間前に、コーヒーやカフェインを含む飲料、アルコール飲料の摂取、および運動を控えるよう求められます。

介入

• 高硝酸塩野菜（ほうれん草 100 g、FW 硝酸塩 1000 mg/kg 未満）を白パンのサンドイッチに挟んだベジタブルバーガーを朝食と昼食に提供します。
• 対照：白パンのサンドイッチに低硝酸塩野菜（エンドウ豆 200 g、スイートコーン、FW 硝酸塩濃度 30 mg/kg 未満）を含む野菜バーガーを朝食と昼食に提供します。

シーケンスの生成。 介入割り当てのシーケンスは、コンピューターが生成した乱数を使用したブロックのランダム化によって生成されます。 ランダムなブロック サイズ 2 と 4 が使用されます。

隠蔽メカニズム。 各研究参加者に対してランダムに生成された50の介入シーケンスは、介入、データ収集、またはデータ分析の実行に関与していない研究研究者によって、別々の紙に印刷され、1から50までの番号が付けられた不透明な封筒に封入されます。 。

実装。 参加者が適格であると判断され、研究に登録されると、研究コーディネーターは、ランダム化と介入の割り当てを担当する研究責任者に連絡し、次に利用可能なエンベロープとランダムに生成された介入シーケンスを取得します。

目がくらむ。 介入の性質を考慮すると、参加者と介入の実施を担当する研究者は、試験全体を通じて盲検化されません。 ただし、実験室分析とデータ分析を実行するすべての研究者は、データ分析が実行されるまで、参加者が受けた介入について知らされません。

参加者のタイムライン。 最初のクリニック訪問の前に、各参加者は背景の習慣的な食事を評価するために食事頻度アンケート (FFQ) に記入します。

各診療所を訪れるたびに、N-ニトロソアミンの測定のためにベースラインの尿と便のサンプルが収集されます。 介入の前に、参加者は膀胱からベースラインの尿収集容器に排出するように指示されます。 最初の介入後、N-ニトロソアミン、硝酸塩、亜硝酸塩の測定のために、その後 24 時間のすべての尿が収集されます。 N-ニトロソアミン、硝酸塩、亜硝酸塩の測定のために便が採取されます。

評価

尿と便の採取。 尿サンプルはベースライン時と介入後から介入後 24 時間まで収集されます。 ベースラインサンプルの場合、参加者には滅菌済みの容器と、その日の最初の尿サンプルを廃棄し、診療所に持ち込まれる介入まですべての尿を採取するよう指示が提供されます。 参加者は起床時に250mlの水を飲むように指示されます。 24 時間の尿サンプルの場合、参加者には滅菌容器が提供され、介入後 24 時間まですべての尿を採取するように指示されます。 尿のアリコートは分析まで-80℃で凍結されます。 便サンプルは、ベースライン時および最初の介入後の 24 時間にわたって収集されます。 参加者には説明書と便サンプル収集パック (収集バッグ、ケーブルタイ、大型ジップロックバッグ、冷凍アイスブロック、および輸送用の指定クーラーバッグ) が提供されます。 採取した便サンプルの重量を量り、分析まで-80℃で冷凍します。

N-ニトロソアミン。 介入、尿および便サンプル中のニトロソアミンは、ガスクロマトグラフィー質量分析法 (GCMS) によって測定されます。 揮発性ニトロソアミンはジクロロメタンで抽出され、ガスクロマトグラフィーで十分に分離されます。 識別は、5 つの一般的なニトロソアミンのそれぞれの保持時間と固有の分子イオンによって行われます。 定量は、重水素で標識された内部標準である N-ニトロソジメチルアミン-D6 を使用して行われます。 N-ニトロソジエチルアミン D10; N-ニトロソモルホリン D8 (Cambridge Isotopes) および N-ニトロソピペリジン D10 (Toronto Research Chemicals)。 最も一般的に検出されるニトロソアミンは、NDMA と N-ニトロソピペリジン (NPIP) です。 揮発性ニトロソアミンの浸出をテストするために、サンプルの収集および保管に使用したものと同じ容器に水を保管した対照実験が実施されます。

サンプルサイズと検出力

サンプルサイズは、クロスオーバー設計と、N-ニトロソアミン、特に尿中の N-ニトロソジメチルアミン (NDMA) の主要結果に基づいています。 α=0.05、被験者あたり 2 つの測定 (ベースラインと後)、および測定間の相関 ρ=0.6 では、25 人の参加者は 80% の検出力で NDMA 濃度の 0.6 SD 増加を検出します。 10％の離脱率を考慮して、研究に25人の参加者を募集する予定です。 サンプルサイズに達するまで参加者のローリング募集が行われます。

統計的手法

統計分析は、IBM SPSS Statistics for Windows バージョン 25 (IBM) および STATA/IC 17.0 (StataCorp LLC) を使用して実行されます。 正規分布する連続変数の記述統計量は平均値 (±標準偏差、SD)、非正規分布する連続変数は中央値 (四分位範囲、IQR)、カテゴリ変数は数値 (割合、%) として表されます。 データは分析前に外れ値と正規性について評価されます。 非正規分布データは、必要に応じて対数変換されます。 転帰に対する治療効果は、固定効果としてベースライン測定、治療順序、期間、および時間（カテゴリ変数として）を含む線形混合モデルを使用して取得されます。 また、治療期間間の相互作用の可能性を評価するために治療 X 期間の交互作用項も含め、以前の治療を示すダミー変数を使用してキャリーオーバー効果を個別に評価します。 単一の介入後測定による転帰に対する治療効果は、ベースライン測定、治療順序、予測変数としての期間を含む線形混合モデルを使用して取得されます。 被験者 ID 番号は、各モデルにランダムな切片として含まれます。 P<0.05 の全体的な両側タイプ 1 誤り率を使用して、すべての仮説検定の統計的有意性を評価します。