Azotan INFORMER Badanie warzyw

Projekt badania

Zastosowany zostanie projekt badania krzyżowego z 1-tygodniowym okresem wymywania między interwencjami. Dieta uczestników na dzień poprzedzający i dzień interwencji zostanie ustandaryzowana (wybory żywności na wizycie 1 zostaną dopasowane do wizyty 2) w następujący sposób:

Na dzień przed wizytą studyjną:

Śniadanie: tosty z białego chleba z jajkiem, serem, masłem orzechowym lub dżemem. Zapewniony zostanie lunch składający się z zupy dyniowej i białego chleba. Kolacja: wegetariański posiłek o niskiej zawartości azotanów. Cała woda zostanie dostarczona. Uczestnicy zostaną poproszeni o powstrzymanie się od picia kawy lub napojów zawierających kofeinę oraz wszelkich napojów alkoholowych i wszelkich ćwiczeń fizycznych na 24 godziny przed wizytą studyjną.

Na dzień wizyty studyjnej:

Uczestnicy przybędą do jednostki badawczej na czczo. Śniadanie i obiad będą obejmować interwencję. Uczestnicy otrzymają standardową kolację: wegetariański posiłek o niskiej zawartości azotanów.

Cała woda zostanie dostarczona. Uczestnicy zostaną poproszeni o powstrzymanie się od picia kawy lub napojów zawierających kofeinę oraz wszelkich napojów alkoholowych i wszelkich ćwiczeń fizycznych na 24 godziny przed wizytą studyjną.

Interwencje

• Burger warzywny zawierający warzywa o wysokiej zawartości azotanów (100 g szpinaku, ~1000 mg/kg azotanów FW) na kanapce z białego chleba, podawany na śniadanie i obiad.
• Kontrola: Burger warzywny zawierający warzywa o niskiej zawartości azotanów (200 g groszku, kukurydza cukrowa, < 30 mg/kg azotanów FW) na kanapce z białego chleba, podawany na śniadanie i obiad.

Generowanie sekwencji. Kolejność przydzielania interwencji będzie generowana poprzez losowanie blokowe z wykorzystaniem liczb losowych generowanych komputerowo. Zostaną użyte losowe rozmiary bloków 2 i 4.

Mechanizm ukrywania. Pięćdziesiąt losowo wygenerowanych sekwencji interwencji dla każdego z uczestników badania zostanie wydrukowanych na osobnych kartkach papieru i zapieczętowanych w nieprzejrzystych kopertach, ponumerowanych od 1 do 50, przez badacza niezaangażowanego w przeprowadzanie interwencji, gromadzenie danych lub analizę danych .

Realizacja. Gdy uczestnik zostanie uznany za kwalifikującego się i włączony do badania, koordynator badania skontaktuje się z badaczem odpowiedzialnym za randomizację i przydział interwencji w celu uzyskania następnej dostępnej koperty i losowo wygenerowanej sekwencji interwencji.

Oślepiający. Biorąc pod uwagę charakter interwencji, uczestnicy i badacze odpowiedzialni za przeprowadzenie interwencji zostaną ujawnieni podczas całego procesu. Jednak wszyscy badacze przeprowadzający analizy laboratoryjne i analizy danych będą ślepi na interwencje, które otrzymali uczestnicy, aż do momentu przeprowadzenia analizy danych.

Oś czasu uczestnika. Przed pierwszą wizytą w klinice każdy uczestnik wypełni kwestionariusz dotyczący częstotliwości spożywania posiłków (FFQ) w celu oceny zwyczajowej diety.

Podczas każdej wizyty w klinice zostanie pobrana wyjściowa próbka moczu i kału w celu oznaczenia N-nitrozoamin. Przed interwencją uczestnicy zostaną poinstruowani, aby opróżnić pęcherz do podstawowego pojemnika na mocz. Po pierwszej interwencji zostanie pobrany cały mocz z kolejnych 24 godzin w celu oznaczenia N-nitrozoamin, azotanów i azotynów. Kał zostanie pobrany do pomiaru N-nitrozoamin, azotanów i azotynów.

Oceny

Pobieranie moczu i kału. Próbka moczu zostanie pobrana na początku badania i od interwencji do 24 godzin po interwencji. W przypadku próbki wyjściowej uczestnicy otrzymają wysterylizowany pojemnik i instrukcje, aby wyrzucić pierwszą próbkę moczu danego dnia, a następnie zebrać cały mocz do czasu interwencji, który zostanie przywieziony do kliniki. Uczestnicy zostaną poinstruowani, aby po przebudzeniu wypić 250 ml wody. W przypadku 24-godzinnych próbek moczu uczestnicy otrzymają wysterylizowane pojemniki i instrukcje dotyczące zbierania całego moczu do 24 godzin po interwencji. Próbki moczu zostaną zamrożone w temperaturze -80°C do czasu analizy. Próbka kału zostanie pobrana na początku badania i przez okres 24 godzin po pierwszej interwencji. Uczestnicy otrzymają instrukcje i pakiet do pobierania próbek kału (woreczki do pobierania próbek, opaski do kabli, duże torby z zamkiem błyskawicznym, bloki lodu do zamrażania i wyznaczona torba chłodząca do transportu). Pobrane próbki kału zostaną zważone i zamrożone w temperaturze -80°C do czasu analizy.

N-nitrozoaminy. Nitrozoaminy w interwencjach, próbkach moczu i kału będą mierzone metodą spektrometrii masowej z chromatografią gazową (GCMS). Lotne nitrozoaminy zostaną wyekstrahowane dichlorometanem i dobrze rozdzielone za pomocą chromatografii gazowej. Identyfikacja zostanie przeprowadzona na podstawie czasu retencji i unikalnych jonów molekularnych dla każdej z pięciu powszechnych nitrozoamin. Oznaczenie ilościowe zostanie przeprowadzone przy użyciu wzorców wewnętrznych znakowanych deuterem, N-nitrozodimetyloaminy-D6; N-nitrozodietyloamina D10; N-nitrozomorfolina D8 (Cambridge Isotopes) i N-nitrozopiperydyna D10 (Toronto Research Chemicals). Najczęściej wykrywanymi nitrozoaminami są NDMA i N-nitrozopiperydyna (NPIP). Eksperymenty kontrolne, w których woda przechowywana jest w tych samych pojemnikach, co te używane do pobierania i przechowywania próbek, zostaną przeprowadzone w celu zbadania ewentualnego wypłukiwania lotnych nitrozoamin.

Wielkość próbki i moc

Wielkość próbki opiera się na schemacie krzyżowym i głównym wyniku N-nitrozoamin, w szczególności N-nitrozodimetyloaminy (NDMA) w moczu. Przy α=0,05, 2 pomiarach na pacjenta (poziom wyjściowy i po) oraz korelacji ρ=0,6 między pomiarami, 25 uczestników dostarczy 80% mocy do wykrycia wzrostu stężenia NDMA o 0,6 odchylenia standardowego. Aby umożliwić 10% stopę wycofania, planujemy zrekrutować 25 uczestników do badania. Rekrutacja krocząca uczestników będzie prowadzona do momentu osiągnięcia liczebności próby.

metody statystyczne

Analizy statystyczne zostaną przeprowadzone przy użyciu IBM SPSS Statistics dla Windows, wersja 25 (IBM) i STATA/IC 17.0 (StataCorp LLC). Statystyki opisowe zmiennych ciągłych o rozkładzie normalnym zostaną wyrażone jako średnia (± odchylenie standardowe, SD), zmiennych ciągłych o rozkładzie innym niż normalny jako mediana (rozstęp międzykwartylowy, IQR), a zmienne kategoryczne jako liczba (proporcja, %). Dane zostaną ocenione pod kątem wartości odstających i normalności przed analizą. Dane o rozkładzie innym niż normalny zostaną w razie potrzeby przekształcone w dziennik. Efekty leczenia dla wyników zostaną uzyskane przy użyciu liniowych modeli mieszanych, w tym pomiarów wyjściowych, kolejności leczenia, okresu i czasu (jako zmienna kategoryczna) jako efektów stałych. Uwzględnimy również termin interakcji okresu leczenia X, aby ocenić możliwe interakcje okresu leczenia i osobno ocenimy efekty przeniesienia ze zmiennymi fikcyjnymi, aby wskazać poprzednie leczenie. Efekty leczenia dla wyników z pojedynczym pomiarem po interwencji zostaną uzyskane przy użyciu liniowych modeli mieszanych, w tym pomiarów wyjściowych, kolejności leczenia i okresu jako predyktorów. Numer identyfikacyjny podmiotu zostanie uwzględniony jako losowy punkt przecięcia w każdym modelu. Ogólny dwustronny poziom błędu typu 1 wynoszący P <0,05 zostanie wykorzystany do oceny istotności statystycznej dla wszystkich testów hipotez.