COVID-19에 대한 생 rNDV 기반 백신 연구

COVID-19에 대한 매우 효과적인 치료법의 부족과 현재 팬데믹이 공중 보건에 가한 사회적 및 경제적 영향은 안전성과 보호 반응을 유도하는 능력 외에도 논리적으로 적합한 백신 개발의 중요성을 강조합니다. 다양한 국가 및 환경에 걸친 대규모 관리를 위해.

이것은 조류 백신 설계에 성공한 독특한 재조합 바이러스 벡터 기술을 기반으로 한 백신 개발 프로그램의 첫 번째 임상 연구이며, 사람에게 사용하기에 금기 사항이 없습니다.

본 연구에서 연구 대상인 재조합 백신은 재조합 뉴캐슬병 바이러스(rNDV) LaSota 균주의 활성 바이러스 벡터를 기반으로 SARS-CoV-2의 S 당단백질을 코딩하는 유전자가 삽입된 것이다.

뉴캐슬병 바이러스(NDV)는 조류의 뉴캐슬병을 일으키는 파라믹소바이러스입니다. 독성 수준에 따라 세 가지 주요 NDV 계열이 있습니다. 독성이 가장 낮은 그룹은 약독 그룹입니다. 약독성 바이러스 변종 중 하나는 LaSota(NDV_LS)로 조류 백신 개발에 널리 사용됩니다. LaSota 균주는 접종 부위에서만 복제하는 것으로 보이며 림프절에 도달하지는 않지만 강력한 보호 면역 반응을 강화하면서 전 염증성 사이토카인의 유도를 감소시킵니다. 매우 중요한 것은 이 바이러스가 인간 게놈에 자신을 삽입할 수 없다는 것입니다.

NDV에서 독성 증가의 주요 요인 중 하나는 단백질 F 전구체 표현형에 해당하는 절단 부위의 활성화입니다. 매우 독성이 강한 균주에서 절단은 유비쿼터스 세포내 단백질에 의해 수행되며 이는 조류에서 광범위한 복제를 유도합니다.

그러나 약독화 또는 비독성 균주의 절단 부위는 점막 표면에 대한 바이러스 복제를 억제하는 분비성 프로테아제에 의해 활성화됩니다. 이것은 인간 및 비인간 영장류의 NDV-LS에서 작용하는 동일한 분비성 프로테아제로, 상기도로의 바이러스 복제를 제한합니다.

NDV 게놈이 분절되지 않았다는 점은 주목할 만합니다. 이러한 이유로 전사는 재분류 이벤트를 피하기에 충분한 안정성을 게놈에 제공하는 단일 가닥 RNA를 생성합니다. 이러한 특징은 백신 벡터로서 수십 년 동안 NDV의 성공에 기여한 항원 및 유전적 안정성을 뒷받침합니다.

바이러스 벡터의 재조합 특성은 SARS-CoV-2에서 스파이크 단백질을 코딩하는 유전자의 설계 및 합성에 기반합니다. 이러한 디자인은 우한-Hu-1 바이러스(NC_045512.2)의 시퀀스를 기반으로 하며 인실리코로 조립됩니다.

LaSota와 같은 약독형 변종은 조류 개체군에서 70년 이상 백신 접종에 사용되어 왔으며 안전하고 자연적으로 약화된 바이러스 활동이 있는 것으로 입증되었습니다. 사실, 연구에 따르면 NDV 게놈에 외래 유전자를 삽입하면 새의 병원성이 더 감소하는 것으로 나타났습니다. 또한 rNDV는 대변으로 배설되지 않으므로 새에서 새로 전염되지 않습니다. 조류 rNDV 백신을 사용한 안전성 테스트는 이 연구에서 제안된 용량보다 10배 더 높은 용량이 병원성과 관련이 없는 것으로 나타났습니다.

SARS-CoV 및 기타 신종 감염에 대한 rNDV 백신이 제안되었습니다. SARS-CoV 코로나바이러스에서 S-단백질을 발현하는 rNDV 벡터는 비강 경로를 통해 아프리카 녹색 원숭이에게 투여될 때 안전 문제 없이 보호 면역을 발달시킬 수 있음이 입증되었습니다.

인간이 아닌 영장류(Macaca fascicularis)에 IV 경로로 주입된 rNDV는 심각한 질병이나 혈액학적 또는 생화학적 실험실 값의 이상과 관련이 없는 것으로 보고되었습니다.

최근 COVID-19 팬데믹 상황에서 뉴캐슬병 바이러스(NDV)의 S-단백질 발현 바이러스 벡터를 기반으로 한 백신이 야생형과 사전융합 막 고정 벡터 형식을 모두 사용하여 연구되었습니다. 이 연구는 백신을 2회 투여한 쥐와 햄스터 모델에서 수행되었습니다. 테스트된 백신은 근육 내 경로로 투여되었을 때 높은 수준의 중화 항체를 유도했습니다. 특히, 이러한 백신 프로토타입은 마우스에 적응된 SARS-CoV-2 공격으로부터 마우스를 보호했습니다. 폐에서 바이러스 부하도 바이러스 항원도 검출되지 않았습니다.

rNDV를 생산하기 위해 해당 유전자를 포함하는 전체 바이러스 게놈을 발현하는 플라스미드로 세포주를 형질감염시킵니다. 전체 NDV 게놈의 클론은 박테리오파지 T7 RNA 중합효소 프로모터의 제어 하에 바이러스 단백질 N, P 및 L을 암호화하는 헬퍼 플라스미드로 형질감염됩니다. 키메라 바이러스는 배양물로부터 얻어지고 원래의 백신 바이러스가 생성될 때까지 10일령의 닭 배아 SPF에서 증식된다.

백신은 비강내 및 근육내 투여를 위해 제형화되었다.

우리 연구에서는 COVID-19 병력이 없거나 SARS-CoV-2 백신 접종 또는 SARS-CoV-2 노출 위험이 높은 활동과 관련된 활동이 없는 건강한 지원자 90명을 한 번에 9개 치료 그룹 중 하나로 순차적으로 배정합니다. 멕시코시티의 단일 연구 사이트.

이들 치료군은 3가지 상이한 투여량 및 3가지 상이한 투여 계획에 상응한다. 이 모든 계획은 21일 간격으로 두 번의 백신 투여를 예상합니다. ("무기 및 개입" 참조).

효능 및 안전성 측정을 위해 환자를 추적할 것입니다. 효능은 SARS-CoV-2의 S 단백질에 대한 순환 및 중화 IgG 및 IgM 항체, 코 점막의 IgA 역가 및 사이토카인 매개 T 세포 반응에 의해 측정됩니다. 부작용에 대한 정보 수집 및 안전 실험실 평가(주로 혈액학 및 혈액 화학)를 통해 환자 안전을 모니터링합니다.

각 치료 그룹에 대한 첫 번째 개입은 18명의 센티넬 피험자에게 순차적으로 시행됩니다. 모든 센티널 피험자가 첫 번째 개입을 받고 안전성 데이터 모니터링 위원회가 안전 조건이 충족되었다고 판단하면 연구는 총 90명의 참가자에 도달할 때까지 나머지 피험자를 등록합니다.

통계적 테스트는 유사한 기준선 특성을 가진 각 치료 그룹에 적용될 것입니다. 연속 변수의 경우 스튜던트 t 분포 및 ANOVA를 사용하여 평균값을 비교하고 카이제곱 및 피셔의 정확 검정을 사용하여 범주 값을 평가합니다.

각 관리 계획에 대해 하나씩 테스트할 세 가지 작업 가설이 있습니다. 그들은 다음과 같이 통합될 수 있습니다: 바이러스 벡터(rNDV) 기반 재조합 항-SARS-CoV-2 백신 [근육 내 경로로 2회/비강 내 경로로 2회/비강 내 경로로 첫 번째 및 두 번째 근육 내 경로에 의해] 안전하고(즉, 허용 가능한 낮은 프로파일 또는 반응성: 낮은 빈도의 경증에서 중등도 및 심각한 국소 또는 전신 부작용 없음) SARS-CoV-2 유사(또는 더 큼) 자연적으로 획득한 COVID-19 회복기 개인의 혈청에서 측정한 것입니다.