Изучение живой вакцины против COVID-19 на основе rNDV

Отсутствие высокоэффективных методов лечения COVID-19 и социально-экономические последствия нынешней пандемии для общественного здравоохранения подчеркивают неоспоримую важность разработки вакцин, которые, помимо их безопасности и способности вызывать защитный ответ, являются подходящими с точки зрения логистики. для массового администрирования в различных странах и условиях.

Это первое клиническое исследование программы разработки вакцины, основанной на уникальной технологии рекомбинантных вирусных векторов, которая оказалась успешной при разработке птичьих вакцин и не имеет противопоказаний к применению у людей.

Рекомбинантная вакцина, подлежащая исследованию в этом исследовании, основана на активном вирусном векторе штамма LaSota рекомбинантного вируса болезни Ньюкасла (rNDV), в который был вставлен ген, кодирующий гликопротеин S SARS-CoV-2.

Вирус болезни Ньюкасла (NDV) представляет собой парамиксовирус, ответственный за болезнь Ньюкасла у птиц. По уровню вирулентности различают три основных семейства NDV. Лентогенная группа имеет самую низкую вирулентность. Одним из лентогенных вирусных штаммов является LaSota (NDV_LS), который широко используется при разработке птичьих вакцин. Штамм LaSota, по-видимому, размножается только в месте инокуляции и, хотя он не достигает лимфатических узлов, снижает индукцию провоспалительных цитокинов, одновременно усиливая сильный защитный иммунный ответ. Очень важно, что этот вирус не может внедряться в геном человека.

Одним из ключевых факторов повышенной вирулентности NDV является активация сайта расщепления, который соответствует фенотипу предшественника белка F. У высоковирулентных штаммов расщепление осуществляется повсеместно распространенными внутриклеточными белками, что приводит к широкой репликации у птиц.

Однако сайт расщепления у аттенуированных или невирулентных штаммов активируется секреторной протеазой, которая сдерживает репликацию вируса на поверхности слизистых оболочек. Это та же самая секреторная протеаза, которая действует при NDV-LS у людей и нечеловеческих приматов, ограничивая репликацию вируса верхними дыхательными путями.

Следует отметить, что геном NDV не сегментирован. По этой причине транскрипция приводит к одноцепочечной РНК, которая обеспечивает геному достаточную стабильность, чтобы избежать событий реассортации. Эти особенности лежат в основе антигенной и генетической стабильности, которая на протяжении десятилетий способствовала успеху NDV в качестве вакцинного вектора.

Рекомбинантная природа вирусного вектора основана на дизайне и синтезе гена, который кодирует спайковый белок в SARS-CoV-2. Такой дизайн основан на последовательности вируса Wuhan-Hu-1 (NC_045512.2) и собран in silico.

Лентогенные штаммы, такие как LaSota, использовались более 70 лет для вакцинации птичьих популяций и доказали свою безопасность и поразительную естественно ослабленную вирусную активность. Действительно, исследования показали, что вставка чужеродных генов в геном NDV приводит к дальнейшему снижению патогенности у птиц. Кроме того, rNDV не выделяется с фекалиями и, следовательно, не передается от птицы к птице. Испытания на безопасность птичьих rNDV вакцин показали, что дозы, в 10 раз превышающие дозы, предложенные в этом исследовании, не связаны с какой-либо патогенностью.

Была предложена вакцина rNDV против SARS-CoV и других новых инфекций. Было продемонстрировано, что вектор rNDV, экспрессирующий S-белок в коронавирусе SARS-CoV, способен вырабатывать защитный иммунитет без проблем с безопасностью при введении африканским зеленым мартышкам интраназальным путем.

Сообщалось, что rNDV, введенный внутривенно приматам, не являющимся человеком (Macaca fascicularis), не был связан с какими-либо тяжелыми заболеваниями или отклонениями в гематологических или биохимических лабораторных показателях.

Недавно, в контексте пандемии COVID-19, была изучена вакцина на основе экспрессирующего S-белок вирусного вектора вируса болезни Ньюкасла (NDV) с использованием как дикого типа, так и предварительно слитого мембранно-заякоренного вектора. Эти исследования проводились на мышах и хомяках с двумя введениями вакцины. Испытанные вакцины индуцировали высокие уровни нейтрализующих антител при внутримышечном введении. Примечательно, что эти прототипы вакцин защищали мышей от адаптированного для мышей заражения SARS-CoV-2: в легких не было обнаружено ни вирусной нагрузки, ни вирусного антигена.

Для получения rNDV клеточную линию трансфицируют плазмидами, которые экспрессируют весь вирусный геном, содержащий рассматриваемый ген. Клон всего генома NDV трансфицируют хелперными плазмидами, которые кодируют вирусные белки N, P и L под контролем промотора РНК-полимеразы бактериофага Т7. Химерный вирус получают из культуры и размножают в курином эмбрионе SPF 10-дневного возраста до тех пор, пока не будет получен исходный вакцинный вирус.

Вакцина разработана для интраназального и внутримышечного введения.

В нашем исследовании девяносто здоровых добровольцев без истории COVID-19, вакцинации против SARS-CoV-2 или деятельности, связанной с более высоким риском заражения SARS-CoV-2, будут последовательно распределены в одну из девяти групп лечения в единственный исследовательский центр в Мехико.

Эти лечебные группы соответствуют трем различным дозам и трем различным схемам введения. Все эти схемы предусматривают два введения вакцины с интервалом в 21 день. (см. «Оружие и вмешательство»).

Пациенты будут наблюдаться для оценки эффективности и безопасности. Эффективность будет измеряться путем циркулирующих и нейтрализующих антител IgG и IgM против белка S SARS-CoV-2, титров IgA в слизистой оболочке носа и цитокин-опосредованных Т-клеточных ответов. Безопасность пациентов будет контролироваться путем сбора информации о нежелательных явлениях и лабораторных оценок безопасности (в основном, гематологии и биохимии крови).

Первое вмешательство для каждой лечебной группы будет проводиться последовательно восемнадцати контрольным субъектам. После того, как все дозорные субъекты получили первое вмешательство и Совет по мониторингу данных о безопасности определил, что условия безопасности были соблюдены, в исследование будут включены остальные субъекты, пока не будет достигнуто в общей сложности 90 участников.

Статистические тесты будут применяться к каждой группе лечения с аналогичными исходными характеристиками. Для непрерывных переменных t-распределение Стьюдента и дисперсионный анализ будут использоваться для сравнения средних значений, а критерий хи-квадрат и точный критерий Фишера будут использоваться для оценки категорийных значений.

Необходимо проверить три рабочие гипотезы, по одной для каждой схемы введения. Их можно объединить следующим образом: Рекомбинантная вакцина против SARS-CoV-2 на основе вирусного вектора (rNDV), вводимая [два раза внутримышечно / два раза интраназально / первый раз интраназально и второй внутримышечным путем] является безопасным (т. е. приемлемый низкий профиль или реактогенность: низкая частота легких или умеренных побочных реакций и отсутствие тяжелых местных или системных побочных реакций) и индуцирует гуморальный и клеточный иммунный ответ против SARS-CoV-2, аналогичный (или больше) по сравнению с показателями, измеренными в сыворотке выздоравливающих от COVID-19 естественным путем.