基于 rNDV 的 COVID-19 活疫苗的研究

缺乏针对 COVID-19 的高效治疗方法以及当前大流行对公共卫生造成的社会和经济影响，凸显了开发疫苗的无可争议的重要性，这些疫苗除了具有安全性和引发保护性反应的能力外，还具有后勤适用性用于跨不同国家和环境的大规模管理。

这是基于独特的重组病毒载体技术的疫苗开发计划的第一项临床研究，该技术已成功设计出禽类疫苗，并且没有人类使用禁忌症。

本研究研究的重组疫苗基于重组新城疫病毒（rNDV）LaSota 毒株的活性病毒载体，其中插入了编码 SARS-CoV-2 的 S 糖蛋白的基因。

新城疫病毒 (NDV) 是导致鸟类新城疫的副粘病毒。 根据毒力水平，NDV 主要分为三个家族。 毒性最低的是弱毒组。 一种慢病毒株是 LaSota (NDV_LS)，它广泛用于禽类疫苗的开发。 LaSota 菌株似乎只在接种部位复制，虽然它没有到达淋巴结，但它减少了促炎细胞因子的诱导，同时增强了强大的保护性免疫反应。 非常重要的是，这种病毒无法将自身插入人类基因组。

NDV 毒力增强的关键因素之一是与蛋白 F 前体表型对应的切割位点的激活。 在高毒性菌株中，裂解是由无处不在的细胞内蛋白质进行的，这导致在鸟类中广泛复制。

然而，减毒株或无毒株中的切割位点被抑制病毒复制到粘膜表面的分泌性蛋白酶激活。 这与在人类和非人类灵长类动物的 NDV-LS 中起作用的分泌蛋白酶相同，限制病毒复制到上呼吸道。

值得注意的是，NDV 基因组是非分段的。 因此，转录产生单链 RNA，为基因组提供足够的稳定性以避免重排事件。 这些特征巩固了抗原和遗传稳定性，这些稳定性促成了 NDV 在过去几十年中作为疫苗载体的成功。

病毒载体的重组特性基于编码 SARS-CoV-2 刺突蛋白的基因的设计和合成。 这种设计基于 Wuhan-Hu-1 病毒 (NC_045512.2) 的序列并在计算机中组装。

像 LaSota 这样的弱毒株已经在鸟类种群中使用了 70 多年的疫苗接种，并已被证明是安全的，并且具有显着的自然减毒病毒活性。 事实上，研究表明，将外来基因插入 NDV 基因组可进一步降低鸟类的致病性。 此外，rNDV 不会随粪便排出，因此不会在鸟类之间传播。 禽类 rNDV 疫苗的安全性测试表明，比本研究建议剂量高 10 倍的剂量与任何致病性无关。

已经提出了一种针对 SARS-CoV 和其他新发感染的 rNDV 疫苗。 已经证明，当通过鼻内途径对非洲绿猴施用时，表达 SARS-CoV 冠状病毒中 S 蛋白的 rNDV 载体能够产生保护性免疫，而无需担心安全问题。

据报道，在非人类灵长类动物（Macaca fascicularis）中通过 IV 途径注射的 rNDV 与任何严重疾病或血液学或生化实验室值异常无关。

最近，在 COVID-19 大流行的背景下，使用野生型和预融合膜锚定载体形式研究了一种基于表达新城疫病毒 (NDV) S 蛋白的病毒载体的疫苗。 这些研究是在老鼠和仓鼠模型中进行的，接种了两次疫苗。 当通过肌内途径给药时，测试的疫苗会诱导高水平的中和抗体。 值得注意的是，这些疫苗原型保护小鼠免受适应小鼠的 SARS-CoV-2 挑战：在肺部未检测到病毒载量和病毒抗原。

为了产生 rNDV，细胞系被表达包含相关基因的整个病毒基因组的质粒转染。 整个 NDV 基因组的克隆用辅助质粒转染，辅助质粒在噬菌体 T7 RNA 聚合酶启动子的控制下编码病毒蛋白 N、P 和 L。 从培养物中获得嵌合病毒，在10日龄SPF鸡胚中繁殖，直至产生原疫苗病毒。

该疫苗已配制用于鼻内和肌肉内给药。

在我们的研究中，90 名没有 COVID-19 病史、没有接种 SARS-CoV-2 疫苗或没有从事与 SARS-CoV-2 接触风险较高相关的活动的健康志愿者将按顺序分配到九个治疗组中的一个墨西哥城的单一研究地点。

这些治疗组对应于三种不同的剂量和三种不同的给药方案。 所有这些计划都预见到两次疫苗接种间隔 21 天。 （参见“武器与干预”）。

将对患者进行疗效和安全性测量。 将通过循环和中和针对 SARS-CoV-2 的 S 蛋白的 IgG 和 IgM 抗体、鼻粘膜中的 IgA 滴度和细胞因子介导的 T 细胞反应来衡量疗效。 将通过收集有关不良事件和安全实验室评估（主要是血液学和血液化学）的信息来监测患者安全。

每个治疗组的第一次干预将以顺序方式对 18 名哨兵受试者进行。 一旦所有前哨受试者都接受了第一次干预并且安全数据监测委员会确定已经满足安全条件，该研究将继续招募其余受试者，直到总共达到 90 名参与者。

统计检验将应用于具有相似基线特征的每个治疗组。 对于连续变量，学生 t 分布和方差分析将用于比较平均值，而卡方和 Fisher 精确检验将用于评估分类值。

有待检验的三个工作假设，每个管理方案一个。 它们可以合并如下：基于病毒载体 (rNDV) 的重组抗 SARS-CoV-2 疫苗[肌肉注射两次/鼻内注射两次/第一次鼻内注射，第二次注射通过肌内途径]是安全的（即可接受的低调或反应原性：低频率的轻度至中度且无严重的局部或全身不良反应）并诱导针对 SARS-CoV-2 的体液和细胞免疫反应类似（或更大）到从自然获得的 COVID-19 恢复期个体的血清中测得的值。