악성 흉막 중피종에서의 유전 적 감수성 : 생식선 변화의 임상 적 영향 (MAGNETS)

악성 흉막 중피종 (MPM)은 주로 석면 노출과 관련이 있으며 여전히 효과적인 요법이 부족한 흉막 중피의 희귀하고 공격적인 신 생물입니다. 유럽의 발병률은 노출과 질병 발병 사이의 긴 대기 시간으로 인해 2025 년경에 정점에 도달 할 것으로 예상됩니다. 석면 산업용 사용은 1970 년대에 정점에 이르렀으며 1994 년 이탈리아에서 중단되었습니다 (L.D. 257). 그러나 파비아 지방에서 브로니 타운의 시멘트 공장의 교정은 2007 년에 시작되었습니다. 작품은 아직 완료되지 않았으며 오늘날 인구의 노출이 계속됩니다. Asst Pavia Province와 IRCCS Policlinico San Matteo Foundation의 네트워크는 지난 2 년 동안 80 건 이상의 사례를 확인했습니다. 따라서 우리는 기대 수명이 낮은 희귀 암에주의를 기울였습니다 (진단으로 12-15 개월). 난소 암과 같은 중배엽에서 동일한 배아 기원을 가진 다른 질병은 더 흔하고 잘 연구되고 더 많은 치료법이 있습니다. 우리는 또한 우리의 영토의 특정 복지와 충족되지 않은 요구에 대응해야 할 필요성을 느낍니다. 흡입 된 석면 섬유는 흉막으로 이동하여 지속되고 자극을 유발하고 조직 손상을 지속 시키며 사후에 발견 될 수 있습니다 (1).

석면은 돌연변이 제제입니다. 나노 크기의 섬유는 티로신 키나제 (TKS)와 직접 상호 작용합니다 (예 : EGFR) 및 체세포 돌연변이를 활성화하지 않는 경우 부적절한 수용체 이량 체화 및 활성화를 유도 할 수있다. TK 수용체 활성화는 세포 신호 전달 캐스케이드 및 발암 성을 개시한다. 따라서 석면은 유전 적 소인이있는 개인의 종양 성장을 지원할 수있는 염증성 면역 억제 미세 환경의 생성을 유도한다 (2). 결과적으로, 이질성 기질과 함께 실행 가능한 종양 표적의 부족은 TK 및 면역 체크 포인트 억제제 (TKIS, ICIS)의 현대 약물의 실패를지지한다. 이러한 복잡한 맥락에서, MPM에서 생식선 변화의 역할은 질병에 걸린 것으로 알려진 BAP1 유전자의 변화를 제외하고는 크게 탐구되지 않은 채 남아있다 (3).

우리는 염증 침윤, 약물 반응, 암 소인과 관련된 유전자 패널에 중점을 둘 것입니다. 이 연구는 여전히 탐구되지 않은 환경을 해독하고 MPM 생물학에 대한 기계적 지식과 석면에 대한 개인 간 감수성을 향상시키는 데 기여할 것입니다. 또한, 새로운 실행 가능한 목표를 식별하고 개인화되고보다 효율적인 치료 전략을 설계하는 데 도움이 될 수 있습니다.

이 연구의 주요 목표는 미세 환경 침윤 조절, 약물 반응 및 암 소인과 관련된 유전자 패널의 생식선 변화를 찾는 것입니다. 이 연구는 석면 노출 대상체 및 MPM 환자로부터 얻은 혈액 샘플에 대해 병렬로 수행 될 것이다. 이 접근법은 다음을 허용 할 것이다 : i) 예후 및 예측적 영향으로 MPM 발병 소인 (또는 심지어 보호)과 관련된 추정 생식선 시그니처의 검출.

주요 목표는 MPM 환자와 석면 노출 건강한 대상에서 생식선 돌연변이의 유병률을 비교하는 것입니다.

이차 목표는 MPM 환자의 돌연변이 상태에 따라 전체 생존 (OS)의 비교가 될 것입니다.

이 연구는 3 단계로 구성 될 것입니다. 첫 번째 단계는 샘플 수집과 관련이 있습니다. MPM의 영향을받은 환자, 위생학 단위에서 후속 환자는 연구 후보가 될 것입니다 (30 건).

그들 각각에 대해 4ml 전혈은 혈액을 혈액으로 수집합니다 (EDTA를 항응고제로 사용). 비슷한 양의 혈액은 MPM 환자 (50 건) 및 석면 노출 된 대상 (30 건)으로부터 얻은 ICS Maugeri에서 이미 생존 할 수있는 바이오 뱅크에서 유래 될 것이다. 종양 바이오 뱅크 서비스 부서는 ICS Maugeri의 연구 실험실에 있습니다. 2009 년에 연구 목적으로 인간 생물학적 물질의 수집, 보존, 저장 및 분포를 목표로 자금을 지원했습니다. Maugeri 제도적 종양 학적 바이오 뱅크에서, 다른 유형의 암으로 고통받는 환자의 생물학적 샘플은 현재까지 저장되었으며 (4% 악성 흉막 중피종) 임상 병력 및 추적 관찰이 잘 기록된다. 등록 된 각 사례에 대해, 임상 및 인구 통계 데이터는 서면 사전 동의를 얻은 후 PI에 의해 수집됩니다. MPM 환자는 국제 지침에 따라 치료를 받고 흉부 신 생물 (GINT) 평가를위한 학제 ​​간 그룹을 기반으로 관리됩니다.

이 프로젝트의 다음 단계는 미세 환경 침윤 조절, 약물 반응 및 암 감수성에 관여하는 유전자 패널에 영향을 미치는 생식선 변이를 식별하는 것을 목표로하는 포괄적이고 심층적 인 발견 노력을 포함합니다. 차세대 시퀀싱 방법을 이용한 종양의 특성화는 현재 개인화 된 의약품 분야의 최전선에 있습니다. 대부분의 암 유형에서 유전자 자산은 적은 수의 산 (높은 비율의 종양에서 변경된 유전자)과 훨씬 더 많은 언덕, 즉 유전자가 드물게 변경된 유전자로 구성된 조경으로 정의되어야한다는 강조해야합니다. 공개 된 연구는 약 140 개의 유전자가 밝혀졌으며, 이는 세포 내 돌연변이에 의해 변경 될 때 종양 형성을 촉진하거나 유도 할 수있다; 다른 돌연변이는 승객이며 선택적 성장 이점을 부여하지 않습니다. 반면에, 몇몇 유전자는 생식선에서 돌연변이 체 형태로 유전 될 때 암에 걸리며 암에서 암에서 상당한 정도로 돌연변이되지 않는 것으로 알려져있다. 이들 유전자는 변화시 상당한 선택적 성장 이점을 부여하지 않지만 간접적 인 방식으로 종양 형성을 촉진 할 수있다. MPM의 유전자 특성화는 현재까지 유의 한 환자 간 변동성과 거의보고되지 않은 체세포 수차로 인해 완전히 명확하지 않았다. MPM에서의 대부분의 유전자 변화는 종양 억제 유전자 또는 간병인 유전자의 기능 상실이다. 발암 중독의 맥락이 없으면, 활성화 된 변환기의 제약 적 표적화 (mTOR 억제제, FAK 억제제)는 MPM 요법을 개선하기위한 열쇠를 보유 할 수있다. 따라서, 본 프로젝트는 MPM 프로모션과 관련된 숙주 인자를 결정하기 위해 MPM 및 노출 된 집단의 생식선 변화를 깊이 조사하는 것을 목표로했다. MPM의 병원성 생식선 변이체는 종종 DNA 손상 복구 및 염색질 리모델링 경로에 관여하며, 가장 자주 확인되는 생식선 돌연변이는 종양 억제 유전자를 암호화하는 BAP1에있다. 이의 단백질은 염색질 조절, 전사 조절, 세포 증식, DNA 복구, 세포 사멸 및 글루코이 성 대사에서 중요한 역할을하는 핵 탈 유비퀴틴 화 효소이다.

모든 관련 데이터를 식별하기 위해 수행 된 체계적인 문헌 검토에 기초하여, 미세 환경 침윤 조절에 관여하는 30 개의 유전자 세트 (예 : RBL1), 약물 반응 (예 : XRCC1) 및 암 소인 (예 : BRAC1-2)가 정의되었습니다. 이 단계는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 유래 DNA에서 미세 환경 면역 염증성에 관여하는 유전자의 맞춤형 패널을 분석하기위한 깊은 돌연변이 스크리닝에 중점을 둔 첫 번째 단계를 포함 할 것이다. 차세대 시퀀싱 (NGS) 접근법은 Illumina-ESEQ 100 시퀀싱 시스템에 의해 적용될 것이다. 이 연구에 등록 된 각 대상으로부터, 총 DNA는 자동화 된 정제 시스템에 의해 추출 된 다음, 20 ng의 입력 DNA를 라이브러리 구성 및 암 관련 유전자로부터의 모든 코딩 엑손의 차세대 시퀀싱에 사용될 것이다. 확인 된 변이체는 암호화 된 단백질의 구조 및 기능에 대한 상응하는 아미노산 치환의 가능한 영향을 평가하기 위해 Polyphen-2, Sift 및 Ensembl 변이 효과 예측 변수 (VEP)에 의해 생물 정보학 분석에 제출 될 것이다. 또한 Clinvar-NCBI, Gnomad 및 Cosmic 데이터베이스를 사용하여 임상 적으로 유의 한 변이체에 주석이 달릴 것입니다. 최근의 임상 연구는 높은 종양 돌연변이 부담 (TMB)을 면역 체크 포인트 억제제의 개선 및 생존 혜택과 관련시켰다; 따라서, TMB는 이들 면역 요법 제에 대한 반응의 바이오 마커로 부상하고있다. 또한, 생식선 변이체는 종양의 분자 표현형에 영향을 미칠 수 있고 따라서 체크 포인트 억제제 효능을 예측하는 것으로 나타났다. 이러한 고려 사항에서 쳐다 보면, 본 연구에서 우리는 또한 각각의 선택된 유전자에서 총 비 동의 돌연변이의 총 수를 평가함으로써 생식선 종양 돌연변이 부담 (GTMB)을 분석 할 것이다.