Genetische Anfälligkeit beim malignen Pleura -Mesotheliom: klinische Implikation von Keimbahnvariationen (MAGNETS)

Das maligne Pleura -Mesotheliom (MPM) ist ein seltenes und aggressives Neoplasma des Pleura -Mesothels, das hauptsächlich mit Asbestexposition verbunden ist und immer noch wirksame Therapien fehlt. Die Inzidenzraten in Europa werden aufgrund der langen Latenz zwischen Exposition und Beginn der Krankheit um 2025 prognostiziert. Der industrielle Gebrauch von Asbest war in den 1970er Jahren auf dem Höhepunkt und hörte 1994 in Italien ein (L. D. 257). In der Provinz Pavia begann jedoch die Rückgewinnung des Zementwerks in der Stadt Broni im Jahr 2007: Die Arbeiten sind noch nicht abgeschlossen, und die Exposition der Bevölkerung wird bis heute fortgesetzt. Das Netzwerk der Provinz Asst Pavia und der IRCCS Policlinico San Matteo Foundation identifizierte in den letzten 2 Jahren mehr als 80 Fälle von Vorfällen. Daher haben wir unsere Aufmerksamkeit auf einen seltenen Krebs mit einer geringen Lebenserwartung (12-15 Monate nach der Diagnose) gelenkt. Andere Krankheiten, selbst mit demselben embryologischen Ursprung aus Mesoderm, wie z. B. Eierstockkrebs, sind häufiger, gut untersucht und haben etabliertere Therapien. Wir haben auch das Bedürfnis, auf das spezifische Wohlergehen und die ungedeckten Bedürfnisse unseres Territoriums zu reagieren. Inhalierte Asbestfasern wandern in die Pleura, wo sie bestehen, Reizungen verursachen, Gewebeschäden verewigen und nach dem Mortem (1) zu finden sind.

Asbest ist ein nicht-mutagener Mittel: Die nanositarischen Fasern interagieren direkt mit Tyrosinkinasen (Tks) (z. EGFR) und kann eine unangemessene Rezeptordimerisierung und -aktivierung ohne Aktivierung somatischer Mutationen induzieren. Die Aktivierung der TK -Rezeptor -Aktivierung initiiert Zellsignalkaskaden und Karzinogenese. Asbest induziert somit die Erzeugung einer entzündlichen immunsuppressiven Mikroumgebung, die das Tumorwachstum bei Personen mit genetischer Veranlagung unterstützen kann (2). Infolgedessen unterstützt das Fehlen von Tumorzielen zusammen mit dem heterogenen Stroma das Versagen moderner Arzneimittel, sowohl TK- als auch Immun-Checkpoint-Inhibitoren (TKI, ICIS). In diesem komplexen Kontext bleibt die Rolle von Keimbahnveränderungen in MPM weitgehend unerforscht, mit Ausnahme von Änderungen des BAP1 -Gens, von denen bekannt ist, dass sie für die Krankheit prädisponieren (3).

Wir werden uns auf eine Gruppe von Genen konzentrieren, die an entzündlichen Infiltration, Arzneimittelreaktion und Krebsanposition beteiligt sind, um Keimbahnsignaturen mit potenziellen prognostischen und prädiktiven Implikationen zu definieren. Diese Studie wird dazu beitragen, ein noch unerforschtes Milieu zu entschlüsseln und die mechanistische Kenntnisse über MPM -Biologie und interindividuelle Anfälligkeit für Asbest zu verbessern. Darüber hinaus könnte es bei der Identifizierung neuartiger umsetzbarer Ziele und bei der Gestaltung personalisierter und effizienterer therapeutischer Strategien hilfreich sein.

Das Hauptziel der Studie ist es, nach Keimbahnveränderungen einer Gene, die an der Infiltrationsmodulation, der Arzneimittelreaktion und der Veranlagung von Krebs an der Mikroumgebung beteiligt ist, zu suchen. Die Studie wird parallel an Blutproben durchgeführt, die von Asbest-exponierten Probanden und bei MPM-Patienten erhalten wurden. Dieser Ansatz ermöglicht: i) Erkennung mutmaßlicher Keimbahnsignaturen im Zusammenhang mit MPM -Beginn (oder sogar Schutz) mit prognostischen und prädiktiven Implikationen.

Primäres Ziel ist der Vergleich der Prävalenz von Keimbahnmutationen bei MPM -Patienten mit Asbest, die gesunde Probanden ausgesetzt sind.

Das sekundäre Ziel wird der Vergleich des Gesamtüberlebens (OS) gemäß Mutationsstatus bei MPM -Patienten sein.

Die Studie wird auf drei Phasen strukturiert sein. Der erste Schritt wird die Probensammlung betrachten. Patienten, die von MPM betroffen sind, die in der Pneumologieeinheit befolgt werden, werden Kandidat der Studie (30 Fälle/Jahr) sein.

Für jeden von ihnen wird ein 4ml Vollblut durch Blutentzügung gesammelt (unter Verwendung von EDTA als Antikoagulans). Eine vergleichbare Blutmenge wird aus der Biobank abgeleitet, die bereits bei ICS Maugeri von MPM -Patienten (50 Fälle) und Asbest -exponierte Probanden (30 Fälle) lebensfähig ist. Die Oncological Biobanks Service Unit befindet sich in Forschungslabors von ICS Maugeri. Es wurde 2009 für die Sammlung, Erhaltung, Lagerung und Verteilung von menschlichem biologischem Material für Forschungszwecke finanziert. In der institutionellen Onkologischen Biobank aus Maugeri wurden bisher biologische Proben von Patienten, die an verschiedenen Krebsarten leiden (4% maligne Pleura-Mesotheliom), und für die klinische Anamnese und Follow-up gut dokumentiert sind. Für jeden eingeschriebenen Fall werden klinische und demografische Daten vom PI nach Erhalt einer schriftlichen Einverständniserklärung gesammelt. MPM -Patienten werden gemäß den internationalen Richtlinien behandelt und auf der Grundlage der interdisziplinären Gruppe für die Bewertung der Thoraxneoplasmen (GINT) verwaltet.

Der nächste Schritt des Projekts umfasst eine umfassende und eingehende Entdeckungsanstrengung, die darauf abzielt, Keimbahnvariationen zu identifizieren, die eine Gruppe von Genen beeinflussen, die an der Regulierung der Infiltrat, Arzneimittelreaktion und Krebsanfälligkeit beteiligt sind. Die Charakterisierung von Tumoren unter Verwendung von Sequenzierungsmethoden der nächsten Generation steht derzeit an der Spitze des Bereichs der personalisierten Medizin. Es sollte unterstrichen werden, dass bei den meisten Krebstypen das genetische Vermögenswert als eine Landschaft definiert werden sollte, die aus einer kleinen Anzahl von Bergen (Gene verändert in einem hohen Prozentsatz an Tumoren) und einer viel größeren Anzahl von Hügeln, nämlich die Gene verändert wurden. Veröffentlichte Studien haben etwa 140 Gene ergeben, die, wenn sie durch intragenische Mutationen verändert, die Tumorentstehung fördern oder vorantreiben können; Andere Mutationen sind Passagiere und bieten keinen elektiven Wachstumsvorteil. Andererseits ist bekannt, dass mehrere Gene in mutiertem Form in der Keimlinie für Krebs prädisponieren und bei Krebs in erheblichem Maße nicht somatisch mutiert werden. Diese Gene vermitteln bei der Veränderung keinen signifikanten selektiven Wachstumsvorteil, können jedoch auf indirekte Weise die Tumorentstehung fördern. Die genetische Charakterisierung von MPM wurde bisher aufgrund der signifikanten Variabilität der interpatienten und den kaum gemeldeten somatischen Aberrationen aufgrund der signifikanten Variabilität der Patienten nicht vollständig geklärt. Die meisten genetischen Veränderungen im MPM sind Funktionsverlust von Tumorsuppressorgenen oder Hausmeistergenen. In Abwesenheit eines Kontextes der onkogenen Sucht könnte das pharmazeutische Targeting aktivierter Wandler (mTOR -Inhibitoren, FAK -Inhibitoren) einen Schlüssel zur Verbesserung der MPM -Therapie enthalten. Daher zielte das vorliegende Projekt darauf ab, die Keimbahnvariation in MPM und die exponierte Bevölkerung tief zu untersuchen, um die an der MPM -Promotion beteiligten Wirtsfaktoren zu bestimmen. Pathogene Keimbahnvarianten in MPM sind häufig an der Reparatur von DNA -Schäden und an der Remodelling -Wege von Chromatin beteiligt. Sein Protein ist ein nukleares Deubiquitinierungsenzym, das eine wichtige Rolle bei der Chromatinmodulation, der Transkriptionsregulation, der Zellproliferation, der DNA -Reparatur, dem Zelltod und dem glucidischen Metabolismus spielt.

Basierend auf einer systematischen Literaturübersicht, um alle relevanten Daten zu identifizieren, ist ein Satz von 30 Genen, die an der Infiltrationsmodulation der Mikroumgebung beteiligt sind (z. RBL1), Arzneimittelantwort (z. XRCC1) und Krebsvorsorge (z. BRAC1-2) wurde definiert. Diese Phase umfasst einen ersten Schritt, der sich auf ein tiefes Mutations-Screening konzentriert, das darauf abzielt, ein benutzerdefiniertes Maß von Genen zu analysieren, die an der immuninflammatorischen Mikroumgebung auf peripherer Blutmononuklear-Zell (PBMC)-abgeleitete DNA beteiligt sind. Ein Sequenzierungsansatz der nächsten Generation (NGS) wird vom Illumina-ISEQ 100-Sequenzierungssystem angewendet. Aus jedem in dieser Studie eingeschlossenen Subjekt wird die Gesamt -DNA durch ein automatisiertes Reinigungssystem extrahiert, dann wird 20 ng Eingangs -DNA für die Bibliothekskonstruktion und die Sequenzierung aller kodierenden Exons aus krebsbezogenem Gen verwendet. Die identifizierten Varianten werden der Bioinformatikanalyse durch Polyphen-2, SIFT- und Ensembl-Variante-Effekt-Prädiktor (VEP) eingereicht, um den möglichen Einfluss der entsprechenden Aminosäure-Substitution auf die Struktur und Funktion des codierten Proteins zu bewerten. Darüber hinaus werden klinisch signifikante Varianten mithilfe von Clinvar-NCBI-, Gnomad- und kosmischen Datenbanken kommentiert. Jüngste klinische Studien haben eine hohe Tumor -Mutationsbelastung (TMB) mit verbesserten Ansprechraten der Patienten und dem Überleben von Immun -Checkpoint -Inhibitoren in Verbindung gebracht. Daher entwickelt sich TMB als Biomarker für die Reaktion für diese Immuntherapie -Wirkstoffe. Darüber hinaus wurde gezeigt, dass Keimbahnvarianten die molekularen Phänotypen von Tumoren beeinflussen und somit die Wirksamkeit der Checkpoint -Inhibitoren vorhersagen können. In diesen Überlegungen werden wir in dieser Studie auch die Keimbahn -Tumor -Mutationsbelastung (GTMB) analysieren, indem wir die Gesamtzahl der nicht synonymen Mutationen in jedem ausgewählten Gen bewerten.