AML 中的免疫表型分析和 Xist 基因 (Xist)

急性髓系白血病 (AML) 是一种异质性疾病，其特征是骨髓和外周血中髓系祖细胞（母细胞）的克隆扩增。 具有高死亡率和多变的预后。 AML 是成人中最常见的急性白血病，约占该组病例的 80%。 美国 (US) 每年大约有 19,520 例 AML 新病例，并且有 10,670 例死于 AML。 根据埃及国家人口登记计划（2008-2011 年）的结果，在埃及，AML 的男性发病率为 0.96%，女性为 1.14%。 AML 的诊断基于形态学诊断，原始细胞增殖≥ 20% 的骨髓细胞、流式细胞术免疫表型分析和细胞遗传学异常。

通过流式细胞术进行的免疫表型分析包括一种额外的快速技术来预测 AML 的结果，尽管在临床常规诊断中只有少数标记物被确定为预后因素，尽管事实上需要新的和快速可用的标记物来改善 AML 患者的治疗决策。 更重要的是，AML 患者的治疗必须在诊断后立即开始。 AML 母细胞表达也在健康未成熟骨髓细胞上发现的抗原，包括共同分化 (CD) 标记 CD13、CD33 和 CD34。 其他细胞标志物的表达取决于 AML 的形态学亚型和分化阻滞阶段，例如单核细胞分化标志物（CD4、CD14、CD11b、CD11c、CD64、CD36）、红细胞（CD36、CD71）和巨核细胞标志物（CD41a 和 CD61） .

在大约 52% 的成人原发性 AML 患者中发现了非随机染色体异常（例如，缺失、易位），并且长期以来一直被认为是导致和促进这种疾病的遗传事件。 某些细胞遗传学异常，包括 t(8;21)(q22;q22)、t(15;17)(q22;q12) 和 inv(16)(p13.1;q22) 与更长的缓解和生存期相关，而 5 号、7 号染色体、复杂核型（描述为>3 条染色体异常）和 11q23 的改变与治疗反应差和总生存期更短相关。

一些研究报告了异常表达的标志物与 AML 临床结果的相关性。 例如，CD7 和 CD25 表达与正常核型 (NK) AML 的不良预后有关。 IL3 受体 alfa (CD123) 在 45% 的 AML 患者中过度表达，这种更高的表达也与不良结果有关，并与 fms 样酪氨酸激酶受体 (FLT3) 基因突变相关。 具有高 CD33 表达的一致抗原谱也与核磷蛋白 (NPM1) 突变的 AML 相关。 Lo-Coco 等人，(2015) 结果表明，CD34/25/123/99+ve 白血病相关免疫表型 (LAIP) 与 FLT3-ITD 阳性细胞密切相关。 在诊断与这些亚克隆相关的免疫表型指纹时通过多参数流式细胞术进行的这种鉴定是一种新颖且简化的工具，具有更高的敏感性以解开这些克隆并允许患者分层和风险适应性治疗对疾病结果具有潜在影响。

目前，AML的病因和发病机制尚不完全清楚，只有少数AML病例可以通过传统的细胞形态学分类进行准确分类。 因此，很难判断病情和预测预后。 特定基因的不当表达是 AML 中的常见发现，并且可能诱导临床相关的生物学子集。 因此，鉴定可以预测结果或指导治疗选择的新型生物标志物将对 AML 的临床管理做出更大贡献。

长期以来，X 染色体非整倍体与人类癌症有关，但因果关系尚未确定。 在哺乳动物中，X 染色体失活 (XCI) 由 X 失活特异性转录物 (Xist) RNA 触发，以平衡两性之间的基因表达。 在人类中，每个女性细胞中的一条 X 染色体被灭活 (Xi) 以实现转录平衡。 X 连锁失活中心 (XIC) 负责启动 X 失活。 XIC 的确切大小尚不清楚，但它包括 Xq13.2 的 Xistgene。 它编码一个大的非编码 RNA，该 RNA 最初在两个 X 染色体上表达，然后在活性 X 上停止表达并在将要失活的 X 上上调。 Xist RNA 产物包裹着未来的 Xi 染色体，从 XIC 扩散开来。

X 失活特异性转录物 RNA 是 1990 年代初期发现的首批长链非编码 RNA (lncRNA) 之一，比人类基因组计划 (HGP) 揭示我们的基因组中的绝大部分都是非编码序列早十年。 Xist 是一个 19 kb 的、剪接的、未翻译的调节转录物，覆盖在 X 染色体上，它以顺式表达。 Xist RNA 是 XCI 的主要调节因子，XCI 是一种表观遗传过程，可平衡雌性 (XX) 和雄性 (XY) 哺乳动物之间的 X 连锁基因剂量。 Xist 基因的删除导致野生型 X 染色体的失活，表明该基因座对于基因沉默是必不可少的。

早期的转基因研究还揭示了 Xist 功能的两个关键特征。 首先，Xist RNA 触发基因沉默的能力严格取决于发育环境。 其次，Xist 有不同的任务，例如顺式定位到表达它的染色体以及触发基因沉默的能力，这些任务由 RNA 的遗传独立域介导。 此外，人类 Xist 的不适当沉默会导致干细胞质量异常。 尽管 Xist 已在细胞培养中得到广泛研究，但体内研究却很有限，然而，这些研究都没有在人体中进行过。

在某些情况下，已观察到 Xist RNA 错误定位和零星的 Xi 再激活。 例如，一项关于卵巢癌细胞系的研究表明，Xist 表达受到破坏，膜棕榈酰化蛋白 1 (MPP1) (p55) 基因可能重新激活。 先前的研究表明，在癌症中失活的 X 染色体在遗传上是不稳定的，因为这项研究报告说，与基因组的其余部分相比，失活的 X 染色体具有更高的突变率。

小鼠血液隔室中的 Xist 缺失表明突变的雌性发展出具有 100% 外显率的高度侵袭性骨髓增生性肿瘤和骨髓增生异常综合征（混合 MPN/MDS）。 重要的疾病成分包括原发性骨髓纤维化、白血病、组织细胞肉瘤和血管炎。 他们发现所有造血细胞类型都存在增殖和发育不良变化。 此外，Xist 缺陷型造血干细胞 (HSC) 显示异常成熟和长期 HSC 的年龄依赖性损失。

他们的研究表明，人类血液系统癌症可能是由 X 的过量使用引起的，无论是 Xi 上的 Xist 丢失还是 Xa 的重复。 他们提出，致癌作用是由 HSC 发生的一系列变化驱动的，并在成熟的造血细胞中进一步积累。 这些变化是由 Xist 缺失引发的，这会导致进行性 X 重新激活，进而引发一系列不利的全基因组变化，包括参与 DNA 复制、染色体分离、细胞周期检查点和造血作用的基因失调。 HSC 成熟失败和骨髓中长期 HSC 的丢失逐渐将造血功能转移到髓外位点，导致髓外造血 (EMH)，从而将 X 染色体与小鼠癌症联系起来。 因此，他们得出结论，Xist RNA 不仅是维持 XCI 所必需的，而且还在体内抑制癌症。

事实上，异常基因剂量在疾病中的新兴作用，无论是 X 染色体还是常染色体，都带来了影响表观遗传调节剂的药物在潜在治疗策略中的可能应用。

迄今为止，尚无关于人类Xist基因及其与AML患者免疫表型关系的研究发表。 因此，这将是第一项旨在解释其在 AML 中未探索的途径并检测其预后作用和免疫表型关联的研究。