研究循环肿瘤细胞簇在高危早期乳腺癌患者中的作用，GALIA研究 (GALIA)

乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤，也是女性癌症相关死亡率的主要原因。 炎性乳腺癌（IBC）是一种罕见但侵袭性强的疾病形式，约占新诊断乳腺癌的2-5%，其预后比非炎性亚型更差。 对卢布尔雅那肿瘤研究所（OI）治疗的IBC患者治疗结果的分析显示，总生存期（OS）有所改善，从2001-2009年诊断病例的4.7年增加到2010-2018年诊断病例的10年。 这一改善主要归因于HER2阳性亚型的靶向治疗。 在非炎性乳腺癌中，三阴性亚型与最差的生存结果相关。

在过去十年中，液体活检技术在诊断和监测治疗效果方面日益突出。 这些非侵入性方法能够追踪体液中的生物标志物，包括循环肿瘤细胞（CTC）和循环肿瘤DNA（ctDNA）。

CTCs是从原发肿瘤脱离、进入血液的恶性细胞，并作为远处器官转移的潜在来源。 然而，循环系统对这些细胞来说是高度敌对的环境，只有0.1%的细胞存活并成功外渗到远处组织。 在循环过程中，CTCs经历表型变化。 最初显示上皮特征，它们通过上皮-间质转化（EMT）和间质表型过渡，然后在组织定植时恢复为上皮状态，促进转移播种。

血液中CTCs的数量会波动。 使用CellSearch®方法，已在20%的早期乳腺癌患者和80%的转移性疾病患者中检测到CTCs。 每7.5 mL血液中≥1个CTC的存在是早期乳腺癌OS的不利预后标志物，而每7.5 mL血液中≥5个CTCs与转移性乳腺癌较差的预后相关。 在IBC中，研究已发现45-84%的患者存在≥1个CTC，20-47%的患者存在≥5个CTCs。

最近的研究表明，除了单个CTCs外，CTC簇也在血液中循环。 这些簇的转移潜力比单个CTCs高20至80倍。 CTC簇可以是同型的（仅由CTCs组成）或异型的（包含CTCs以及其他血细胞，如中性粒细胞或血小板）。 米兰的一个研究小组观察到，与转移性疾病患者相比，高风险早期乳腺癌患者中CTC簇的患病率更高。

CTC簇的分离需要专门技术。 CellSearch®系统长期以来是美国食品药品监督管理局（FDA）批准的唯一方法，主要检测上皮性CTC簇，导致乳腺癌患者中其他表型亚型的代表性不足。 最近，基于细胞大小和可变形性的替代分离方法已被开发出来，能够识别更多数量的CTC簇，包括那些表现出间质或混合上皮-间质表型的簇。

在EMT期间，间质相关基因的表达上调，而上皮基因表达减少。 这一转变伴随着细胞骨架重组、细胞间连接丧失和顶-底极性破坏，最终增强细胞运动性并促进侵袭性表型。 CTC簇在早期乳腺癌中比在转移性乳腺癌中更普遍的新发现表明，通过CTC簇的转移是疾病进展中的早期事件。

在OI，正在研究两种检测CTCs的方法：磁激活细胞分离（MACS），它检测上皮标志物，原理与CellSearch®方法相似；以及Parsortix®系统，它基于大小和可变形性分离CTCs。 研究结果表明，后者在CTC分离方面更有效。 2022年5月，美国食品药品监督管理局（FDA）批准了Angle开发的Parsortix®系统作为CTC分离工具。 同年，我们机构获得了Parsortix®系统，最初用于研究目的，未来可能应用于常规临床实践。 迄今为止，已在国际期刊上发表了关于CTCs的两篇科学文章，目前第三篇正在定稿中——研究非炎性乳腺癌患者血液中临床病理特征、CTC计数、CTC簇和巨核细胞的存在与免疫炎症标志物指数与总生存期（OS）的关系。 主要关注点是CTC簇的作用。

Kumar Jolly等人报告称，炎性乳腺癌（IBC）是一种典型恶性肿瘤，其中转移主要通过CTC簇发生。 然而，CTC簇、单个CTCs和其他循环血细胞（包括炎症和免疫细胞）在乳腺癌中的作用仍未完全理解，文献中存在矛盾的研究结果。 新出现的证据表明，与常氧CTC簇相比，缺氧CTC簇具有更高的转移潜力，导致更早的转移发生，并作为负面预后因素。 此外，越来越多的报告强调了细胞粘附结构在转移中的作用。 当前研究特别关注桥粒，特别是其亚单位斑珠蛋白和桥粒斑蛋白。 原发肿瘤中高斑珠蛋白表达与远处转移时间缩短相关。 Chang等人报告称，高桥粒斑蛋白表达、CTC簇的结构完整性和CTC在循环中存活时间延长之间存在相关性，从而增加转移风险。 同样，高桥粒斑蛋白表达已被确定为其他癌症的负面预后因素，包括宫颈癌、肺癌和头颈癌。

CTC和CTC簇分离与表征技术的进步使得对远处转移形成机制的研究越来越具有针对性。 然而，建立CTC培养物并评估它们对不同治疗药物的敏感性仍然是一个重大挑战。 研究人员报告称，在这方面使用肽纳米乳剂取得了更大成功。

与CTC研究并行，关于循环肿瘤DNA（ctDNA）监测的研究也在进行中。 Winn等人报告称，从ctDNA分析获得的遗传谱与IBC患者的肿瘤组织谱互补。 追踪ctDNA水平允许实时评估治疗效果和治疗耐药性的出现。

在整个研究过程中，将评估患者的生活质量，特别强调认知功能。 这一研究方面将涉及Europa Donna的患者代表。

炎性乳腺癌是一种独特且侵袭性强的乳腺癌亚型，其预后比非炎性形式更差。 在非炎性乳腺癌中，三阴性亚型与最差的临床结果相关。 研究CTCs、CTC簇和巨核细胞可能为乳腺癌的转移过程提供新的见解。 此外，监测特定的ctDNA水平可以作为评估治疗效果的有价值工具。

本研究旨在调查CTC计数、CTC簇和巨核细胞作为高风险乳腺癌（包括炎性乳腺癌和三阴性乳腺癌）患者在新辅助全身治疗后达到病理完全缓解（pCR）的预测因素的预后意义。 此外，将探讨CTCs、CTC簇、巨核细胞和ctDNA作为无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）预测因素的作用。