結核、HIV、またはその両方に感染した無症候性ボランティアにおけるMVA85Aの研究

プライムブースト免疫戦略 異種プライムブースト免疫戦略には、それぞれ同じ抗原をコードする 2 つの異なるワクチンを数週間隔てて投与することが含まれます。 DNAプライム組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ（MVA）ブーストを使用すると、多くの異なる疾患モデルにおいて同じベクターを使用した相同ブースティングを使用するよりも、より高いレベルの抗原特異的CD4+およびCD8+ T細胞が誘導されます（Schneider、1998年; McShane、2001年）。 小児期におけるBCGの予防効果を考慮すると、理想的にはBCGがそのようなプライム・ブースト戦略における初回免疫となるでしょう。 これを行うために、我々は候補抗原として抗原 85A に焦点を当てました。 抗原 85A はすべてのマイコバクテリア種の間で高度に保存されており、BCG のすべての株に存在します。 抗原 85A は結核菌から分泌される主要な抗原で、抗原 85 複合体 (A、B、および C) の一部を形成します。 この複合体は、M.tb と BCG の両方の分泌タンパク質の大部分を構成します。 それは細胞壁内のフィブロネクチン結合に関与しており、ミコリルトランスフェラーゼ活性を持っています。 抗原 85A はマウスおよびヒトの研究では免疫優勢であり、小動物では防御的です (Huygen、1996)。

組換え改変ワクシニア ウイルス アンカラ (rMVA)。 多くのウイルスが、潜在的な組換えワクチンとして研究されてきました。 生きたワクシニアウイルスによるワクチン接種による天然痘の世界的な根絶の成功により、ワクシニアが組換え利用の候補として注目されました。 MVA やアビポックスベクターなどのポックスウイルスの非複製株は、従来の複製ワクシニア株よりも免疫原性が高い可能性があるという近年の認識により、このアプローチの魅力が高まっています。 MVA (改変ワクシニアウイルス アンカラ) は、鳥類細胞で 570 回以上継代されているワクシニアウイルス株で、ヒト細胞株では複製能がなく、良好な安全記録があります。 天然痘根絶プログラムの一環として 120,000 人以上のワクチン接種者に投与され、高リスク群に意図的にワクチン接種が行われたにもかかわらず、副作用はありませんでした (Stickl, 1974; Mahnel, 1994)。 人間におけるこの安全性は、動物モデルにおける MVA の無毒性と一致しています。 MVA には親ゲノムと比較して 6 つの主要なゲノム欠失があり、哺乳類細胞内で複製する能力が著しく損なわれています (Meher、1991)。 非形質転換哺乳動物細胞では複製は記録されていません。 ウイルスの複製は細胞の感染中後期にブロックされますが、重要なことに、この不成功感染中であってもウイルスおよび組換えタンパク質の合成は損なわれません。 ウイルスゲノムは、ニワトリ胚線維芽細胞における一連の継代を通じて安定であることが証明されています。 複製欠損組換え MVA は、非常に安全なウイルス ベクターとみなされています。 動物モデル研究で試験した場合、組換えMVAは無毒性でありながら、ウイルス性疾患や癌に対するワクチンとして防御免疫原性があることが示されています。 重度の免疫抑制状態のマカクザルにおける最近の研究では、MVA は免疫不全状態のヒトにおいて安全であるはずであるという見解が支持されている (Akira, 2001; Stittelaar, 2001)。

免疫抑制における rMVA の安全性。 現在、免疫抑制および HIV 感染におけるウイルスベクターとしての MVA の安全性と免疫原性を実証するかなりの前臨床および臨床データが存在します。 HIV抗原を発現する組換えMVAは、免疫抑制されたマカクザルに投与されたが、重篤な有害事象は発生しなかった(Stittelaar et al., 2001)。 さらに、HIV 抗原およびエピトープを発現する組換え MVA の安全性は現在、HIV 感染患者を対象としたいくつかの第 I 相臨床試験で、抗レトロウイルス療法中および抗レトロウイルス療法中および非併用の両方で評価されており、重篤な有害事象は発生していません (Cosma et al, 2003; Harrer et al.アル 2005)。

この BCG プライム - MVA85A ブースト戦略を裏付ける前臨床データ BALB/c マウスでは、BCG を初回免疫として使用し、その後 MVA85A で追加免疫すると、抗原特異的 IFN-γ 分泌 CD4+ および CD8+ T 細胞の両方がより高いレベルで誘導され、抗原に対する有意に高いレベルの防御が誘導されます。 BCG 単独の場合よりもエアロゾル攻撃の方が有利である (Goonetilleke et al, 2003)。 この計画は現在、より感度の高いモルモットのエアロゾル攻撃モデルでさらに評価されており、非常に有望な結果が得られています。 BCGでワクチン接種され、MVA85Aで追加免疫され、その後、抗原85Aである鶏痘-85A（FP85A）を発現する第2の組換えウイルスベクターでさらに追加免疫されたモルモットは、BCG単独でワクチン接種されたモルモットよりも攻撃に対する有意に優れた防御を示した（Williams et al、2005）。 。 この体制はアカゲザルにおいても免疫原性があり、保護的です (Verrek、私信)。

MVA85A 英国試験に関するこれまでの臨床データ 過去 3 年間にわたり、HM は一連の第 I 相試験において、この BCG プライム MVA85A 追加ワクチン接種戦略の安全性と免疫原性を評価する臨床試験プログラムを確立しました。 MVA85A は、2002 年 9 月に世界中で臨床試験に入った最初の結核ワクチン候補であり、現在アフリカで臨床試験が行われている唯一のワクチンです。 MVA85A を用いたこれらの第 I 相試験の設計では、コッホ反応の可能性を最小限に抑えるために、マイコバクテリアへの曝露量を段階的に増加させたボランティアグループへの連続ワクチン接種が可能になりました。 ガンビアでは環境抗酸菌と結核菌の両方への曝露の程度が高いため、英国とガンビアでも試験が順次実施された。 コッホ反応は、結核菌に対する過剰な免疫反応が刺激された場合に、結核に罹患した人または動物における免疫病理の発症を表します。 コッホが治療用ワクチンの一種としてマイコバクテリアを使用した独自の研究を行ったときに、結核患者でこの病気が報告されました。 現在、治療ワクチン接種のマウスモデルで実証されています27。 利用可能な動物データは、結核菌に潜在的に感染しているマウスではこれらの反応が起こらないことを示唆しており、このような反応は高い細菌量と相関している可能性があり、コッホ現象は潜在的に感染しているヒトであっても無症候性のワクチン接種には問題を引き起こさない可能性があることを示唆している25。

英国では、抗酸菌症およびBCG未感染の無症候性ボランティア14名が募集された。 5×107pfuのMVA85Aを3週間間隔で皮内投与して2回ワクチン接種した。 これらの研究では、MVA85A は安全で忍容性が高いことが判明しました。 すべての被験者は、ワクチン接種後 3 ～ 7 日間持続する局所的な副作用 (発赤、かゆみなど) を経験しました。 被験者の約3分の1は、ワクチン接種後の最初の12～24時間に、一時的な全身症状（筋肉痛、頭痛）を経験しました。 すべての局所的および全身的な副作用は自然に解決されました。 これらの研究ではいずれも重篤な有害事象はありませんでした。

これらの進行中の臨床試験で使用される主な免疫学的結果は、ツベルクリン PPD、精製抗原 85 複合体、および複数の重複する 15 mer ペプチドのプールに対する特異的な T 細胞応答を評価するために使用される、体外インターフェロン ガンマ (IFN-γ) Elispot アッセイです。抗原85Aの長さ。 MVA85Aによる単回ワクチン接種は、ワクチン接種後1週間で著しく高レベルの特異的エフェクターT細胞応答を誘導した(PPDに対するIFN-γ Elispot応答の平均は、100万PBMCあたり460スポットであった)。

次に、以前にBCGワクチン接種を受けたボランティアにおけるMVA85Aの安全性が17人のボランティアで実証された。 これら 17 人のボランティアにおける MVA85A の安全性プロファイルは、BCG 投与を受けていないグループと同じでした。 これらの17人のボランティアは、ワクチン接種後1週間で、MVA85A単独で免疫したボランティアよりもさらに高い抗原特異的T細胞のピークレベルを示した(PPDに対する平均応答は100万PBMCあたり917スポットであった)。 おそらく T 細胞記憶の誘導にとってより重要なことは、BCG ワクチン接種を受けたボランティアは、BCG または MVA85A 単独でワクチン接種したボランティアと比較して、MVA85A 後にワクチン接種後最大 24 週間、有意に高いレベルの抗原特異的 T 細胞を維持したことです (McShaneら、2004)。

英国で実施される次の試験では、BCGワクチン接種の1か月後に投与された場合のMVA85Aの増強効果が調べられた。 10人の健康でBCG接種を受けていないボランティアにBCGワクチンを接種し、1か月後にMVA85Aで追加免疫した。 BCGとMVA85Aの間隔が0.5～37年であった前回の試験と比較して、同等の安全性と増強効果が見られた。

英国で現在進行中の研究は、潜在的に結核菌に感染している無症候性ボランティアを対象にMVA85Aの安全性と免疫原性を評価することを目的としている。 M.tb の潜伏感染とは、臨床的または放射線学的疾患の証拠がなく、非常に低レベルの持続性細菌感染症を患っていると推定されているにもかかわらず、M.tb に対する検出可能な免疫応答を有する状態を指します。 この研究における潜在性感染は、BCG および ESAT 6 や CFP 10 などのほとんどの環境抗酸菌には存在しない抗原に基づく特定の診断検査を使用して定義されており、これにより潜在性結核菌感染症の正確な診断が可能になります。 この研究の被験者は結核接触クリニックから募集され、MVA85A の単回ワクチン接種を受けました。 追跡調査には、このグループにおけるこのワクチンの安全性の詳細な放射線学的および臨床的評価が含まれていました。 現在までに、この研究では 11 人の被験者に MVA85A のワクチン接種が行われており、MVA85A の安全性および免疫原性プロファイルは以前の研究で見られたものと同一です。 重要なのは、コッホ反応の臨床的、放射線学的、または免疫学的証拠が存在しないことです。 PPD、ESAT 6、CFP10、抗原 85A、およびその他のマイコバクテリア抗原に対する Elispot の反応は、ワクチン接種後 12 か月間監視されています。

ガンビアの研究 英国での MVA85A を用いた試験の成功を受けて、ガンビアの MRC 部門との協力が開始されました。 MVA85A は、BCG 投与を受けていない被験者 (n = 11) を対象とした第 I 相臨床試験で最初に評価され、続いて BCG 初回刺激を受けた被験者 (n = 10) を対象に評価されました。 これらの研究では、安全性と免疫原性のプロファイルは英国の研究で見られたものと同等です。 英国とガンビアの両方の研究で、MVA85A は臨床試験で他のどの組換え MVA よりも 5 ～ 10 倍高い免疫応答を誘導しました。 これについて最も可能性の高い説明は、ボランティアは環境のマイコバクテリアへの曝露によって誘発された弱い既存の抗マイコバクテリア免疫を持っており、これがMVA85Aのワクチン接種によって促進されているということです。 ガンビアでBCG未投与の被験者にMVA85Aを投与すると、反応の規模と動態は英国のBCG初回刺激群と類似しており、この所見は熱帯気候におけるより高度な環境初回刺激を表す可能性が高い。

南アフリカの研究 ケープタウンで、結核菌に感染していない、HIVに感染していない健康な成人を対象としたMVA85Aの安全性と免疫原性に関する第II相研究が2005年8月に開始された。 英国とガンビアの両方の研究で成人における安全性と免疫原性のデータがすでに得られているにもかかわらず、この施設でのMVA85Aを用いた研究は安全性要件として成人を対象に開始されています。 南アフリカの人口は、宿主の遺伝学とマイコバクテリアへの曝露の両方の点で、英国やガンビアの人口とは大きく異なります。 南アフリカではガンビアよりも結核菌への曝露がかなり多く、環境中の抗酸菌への曝露はガンビアよりも南アフリカの方が低いと考えられています。 BCG の文献では、地理的地域によって有効性が大きく異なることが実証されており、青少年を対象とした研究に進む前に、ケープタウンの成人を対象とした調査結果を確認することが重要でした。 合計２４人の成人への接種を目指す。 これらの研究は 2005 年 8 月に開始され、現在までに 14 人のボランティアがワクチン接種を受けています。 心強いことに、これまでの安全性と免疫原性の結果は、英国とガンビアで行われた以前の研究と同等である。