ヒトの内皮における高血糖とミトコンドリア機能

対象者は、当社の包含/除外基準に従って募集されます。 調査員らは、チラシ、地域新聞広告、インターネット広告掲載、昨年約 50,000 件のユニーク外来患者が訪れたウィスコンシン州フロッタート記念ルーテル医科大学の内科クリニックからの直接募集など、採用に対して多面的なアプローチを採用しています。 電子健康記録は、HIPAA ガイドラインとウィスコンシン医科大学の方針に従って、潜在的な対象者を特定するために活用されます。 対象となる可能性のある人は、詳細な病歴、擬人化測定、血圧と心拍数の測定、および空腹時脂質、グルコース、グリコシル化ヘモグロビン、クレアチニン、および肝機能検査を含む測定のための採血を含む表現型検査を受けることになります。 表２の包含／除外基準に従ってスクリーニングに合格した健康な非ＤＭ被験者は、研究プロトコールに登録される。

一晩の絶食（12時間）の後、被験者は朝、ウィスコンシン南東部臨床トランスレーショナルリサーチイニシアチブ（8UL1TR000055）の一部である成人トランスレーショナルリサーチユニット（A-TRU）に来ます。 高血糖チャレンジ中の血糖サンプリングを容易にするために、肘前静脈ラインが配置されます。 ミトコンドリア検査のための J ワイヤー生検による静脈からの内皮細胞の取得を容易にするために、肘前静脈内カテーテルが配置されます。 主任研究者は、J ワイヤー内皮細胞生検技術の経験を発表しており、この技術は広く検証されています。 最初の静脈グルコースサンプルが肘前静脈から採取され、橈骨動脈内皮の最初の J ワイヤー生検が橈骨動脈ラインを通して実行されます。 次に、被験者は、A-TRU 栄養士が作成した標準化された 75 g のブドウ糖飲料を飲むように求められます。これは、臨床的に使用されている標準的な経口ブドウ糖負荷です。 その後、飲料摂取の 4 時間後まで、血糖サンプルを 1 時間ごとに採取します。 摂取後 1 時間および 4 時間で、橈骨動脈の J ワイヤー内皮生検が繰り返されます。 4 本の別個の J ワイヤを各測定時点 (0、1、および 4 時間) で橈骨動脈に通します。

非糖尿病被験者では、75 g の経口チャレンジにより、投与後 1 時間で全身グルコースのピーク増加が誘導され、この時点で内皮機能不全が同時に検出可能になります。 内皮細胞は、J-wire キャプチャ技術によって取得されます。 Ｊワイヤから単離された内皮細胞の一部は、高血糖チャレンジ前、チャレンジ後１時間、およびチャレンジ後４時間のミトコンドリアネットワークの複雑性を測定するために使用される。 研究者らは、シトクロム c 抗体を使用してミトコンドリアをタグ付けする、以前に報告され検証された免疫蛍光法を使用して、これらの細胞のミトコンドリア ネットワークを視覚化します。 ネットワークの断片化 (数値が大きい = 断片化と分裂が大きい) は、検証済みのプロトコルを使用して ImageJ (NIH、Bethesda) で計算されたネットワーク断片化数によって定量化されます。