인간의 내피에서 고혈당증과 미토콘드리아 기능

피험자는 포함/제외 기준에 따라 모집됩니다. 조사관은 전단, 커뮤니티 신문 광고, 인터넷 광고 게시물, Froedtert Memorial Lutheran Hospital/Medical College of Wisconsin의 내과 클리닉에서 직접 모집을 포함하여 모집에 대한 다면적인 접근 방식을 사용합니다. 전자 건강 기록은 HIPAA 지침 및 위스콘신 의과대학 정책에 따라 잠재적인 과목을 식별하는 데 활용됩니다. 잠재적 피험자는 자세한 병력, 의인화 측정, 혈압 및 심박수 측정, 공복 지질, 포도당, 글리코실화 헤모글로빈, 크레아티닌 및 간 기능 검사를 포함하는 측정을 위한 채혈을 포함하는 표현형 분석을 받게 됩니다. 표 2의 포함/제외 기준에 따라 스크리닝을 통과한 건강한 비-DM 피험자는 연구 프로토콜에 등록됩니다.

하룻밤 금식(12시간) 후 피험자는 아침에 위스콘신 남동부의 임상 중개 연구 이니셔티브(8UL1TR000055)의 일부인 성인 중개 연구 단위(A-TRU)로 옵니다. 고혈당 시험 동안 혈당 샘플링을 용이하게 하기 위해 전주 정맥 주사 라인이 배치될 것입니다. 미토콘드리아 검사를 위해 J-와이어 생검을 통해 정맥에서 내피 세포를 쉽게 얻을 수 있도록 전주 정맥 카테터를 배치합니다. 연구 책임자는 J-와이어 내피 세포 생검 기술에 대한 경험을 발표했으며 이 기술은 광범위하게 검증된 기술입니다. 초기 정맥 포도당 샘플은 전주 정맥에서 채취하고 요골 동맥 내피의 초기 J-와이어 생검은 요골 동맥 라인을 통해 수행됩니다. 피험자는 A-TRU 영양사가 만든 표준화된 75g 포도당 음료(임상적으로 사용되는 표준 경구 포도당 챌린지)를 마시도록 요청받습니다. 그 후 음료 섭취 후 4시간까지 혈당 샘플을 매시간 채취합니다. 섭취 후 1시간 및 4시간에 요골 동맥의 J-와이어 내피 생검을 반복합니다. 4개의 별도 J 와이어가 각 측정 시점(0,1 및 4시간)에 대해 요골 동맥으로 전달됩니다.

비당뇨병 피험자에서 75g 경구 투여는 투여 후 1시간에 전신 포도당의 최대 증가를 유도하며 이때 내피 기능 장애가 동시에 감지됩니다. 내피 세포는 J-와이어 캡처 기술을 통해 얻을 수 있습니다. J-와이어로부터 분리된 내피 세포의 일부는 고혈당 도전 전, 도전 후 1시간 및 도전 후 4시간 동안 미토콘드리아 네트워크 복잡성을 측정하는 데 사용될 것입니다. 조사관은 미토콘드리아에 태그를 지정하기 위해 시토크롬 c 항체를 사용하여 이전에 보고되고 검증된 면역형광 방법을 사용하여 이러한 세포의 미토콘드리아 네트워크를 시각화합니다. 검증된 프로토콜을 사용하여 ImageJ(NIH, Bethesda)로 계산한 네트워크 단편화 수로 네트워크 단편화(높은 수=더 큰 단편화 및 핵분열)를 정량화합니다.