TNFをブロックして黒色腫におけるICI依存性の免疫覚醒を増強する (ATPIC)

最先端技術に関するプロジェクトの背景と独自性

抗PD-1や抗CTLA-4などの画期的な免疫チェックポイント阻害剤（ICI）が進行性黒色腫患者の治療に導入されたにもかかわらず、そのうちの60％は反応しないか、治療開始後5年以内に再発します。 重度の免疫関連有害事象（irAE）は、大腸炎などのICI療法によって引き起こされますが、これはインフリキシマブなどの腫瘍壊死因子α（TNF）阻害剤（TNFi）で治療できます。 免疫反応および臨床反応に対する TNFi の薬力学的影響はまだ解明されていません。

TNF はマウスの腫瘍壊死を引き起こす可溶性因子として同定されていますが、腫瘍微小環境における TNF の慢性産生が癌の進行に寄与することが示されています。 研究者らは、この癌促進特性が免疫逃避を含む複数の機構に依存していることを示した。 たとえば、研究者らは、TNFがCD8 T細胞の活性化誘導細胞死（AICD）を引き起こし、それによってマウス黒色腫腫瘍におけるCD8 T細胞の浸潤を制限することを示した。 黒色腫、乳がん、および結腸がんのマウスモデルでは、TNFi は ICI (抗 PD-1、抗 CTLA-4) の有効性を高め、大腸炎などの irAE の重症度を軽減します。 したがって、TNF 遮断抗体を ICI と組み合わせると、in vivo での治療効果と耐性が促進されます。

研究者らの未発表データは、ベースライン（治療導入前、0週目[W0]）と治療導入後6週目（W6）の間で、すべての治療がエフェクター記憶表現型への循環T細胞の分化を促進したことを示している（データは示さず）。 また、1- 最先端技術に関するプロジェクトの背景と独自性 進行性黒色腫患者の治療に導入された抗PD-1や抗CTLA-4などの免疫チェックポイント阻害剤（ICI）の驚異的な進歩にもかかわらず、 , その60％は治療開始後5年以内に反応しないか、再発します。 重度の免疫関連有害事象（irAE）は、大腸炎などのICI療法によって引き起こされますが、これはインフリキシマブなどの腫瘍壊死因子α（TNF）阻害剤（TNFi）で治療できます。 免疫反応および臨床反応に対する TNFi の薬力学的影響はまだ解明されていません。 TNF はマウスの腫瘍壊死を引き起こす可溶性因子として同定されていますが、腫瘍微小環境における TNF の慢性産生が癌の進行に寄与することが示されています。 研究者らは、この癌促進特性が免疫逃避を含む複数の機構に依存していることを示した。 たとえば、研究者らは、TNFがCD8 T細胞の活性化誘導細胞死（AICD）を引き起こし、それによってマウス黒色腫腫瘍におけるCD8 T細胞の浸潤を制限することを示した。 黒色腫、乳がん、および結腸がんのマウスモデルでは、TNFi は ICI (抗 PD-1、抗 CTLA-4) の有効性を高め、大腸炎などの irAE の重症度を軽減します。 したがって、TNF 遮断抗体を ICI と組み合わせると、in vivo での治療効果と耐性が促進されます。 前臨床研究に基づいて、研究者らはICI［抗PD-1、ニボルマブ（nivo）+抗CTLA-4、イピリムマブ（ipi）］で治療された進行性黒色腫患者（ステージIIIc/IV）を対象とした2つの臨床試験（TICIMELおよびMELANFalpha）を実施した。 )] TNFi [セルトリズマブ (certo) またはインフリキシマブ (inflix)] と組み合わせた場合 (TICIMEL)、または組み合わせなかった場合 (MELANFalpha)。 inflix は二価の抗 TNF キメラ IgG1 モノクローナル抗体であるのに対し、certo はヒト化抗 TNF モノクローナルの一価のペグ化 Fab' フラグメントです。 すべての患者（つまり 92 人）が 2018 年から 2021 年の間に登録されました。 TICIMEL (n=32) は、ipi、nivo、TNFi (certo または inflix) の同時投与の安全性と忍容性を評価することを目的とした第 1b 相臨床試験です。 14人の患者から得られた研究者らの最初のデータは、両三療法がヒトにおいて安全であり、certoコホートにおいて高い奏効率が期待できることを示している。 MELANFalpha (n=60) は、ICI に対する応答/抵抗性の予測バイオマーカーを発見することを目的としたパイロット研究です。 これは特に、非応答者の血漿中で ipi/nivo 治療時に高い TNF レベルが検出されることを示しています。 研究者らの未発表データは、ベースライン（治療導入前、0週目[W0]）と治療導入後6週目（W6）の間で、すべての治療がエフェクター記憶表現型への循環T細胞の分化を促進したことを示している。 また、患者の血液中の Th1 T 細胞の割合も大幅に増加しました。 ただし、これらの効果は、ipi/nivo コホートと比較してセルトリズマブ コホートで大幅に増幅されました。 したがって、研究者らは、セルトリズマブ コホートにおける IFN-ガンマ血漿濃度の増加を観察しました。 Th2、Th17、および Th1/17 T 細胞の割合は、3 つの治療計画によって有意な影響を受けませんでした。 さらに、TNFi と ICI の組み合わせは、循環する MART-1 特異的 CD8 T 細胞の割合の増加と関連していました。 これらの細胞は主に中枢/エフェクター記憶表現型を示し、CXCR3 の発現増加を示します (図 1D ～ F)。 研究者らは、3 つのコホートのそれぞれに登録された 4 人の進行性黒色腫患者から以前 (W0) と W6 に採取された末梢血単核球 (PBMC) に対して CiteSeq 単一細胞 RNA シーケンス (scRNAseq) を実行しました。 免疫応答の活性化と成熟の兆候は、TICIMEL の患者全員で明らかでしたが、W6 の患者は 1 人でした。 これは、TNFi が ipi/nivo で治療された患者で観察される免疫増強を損なう可能性が低いことを示しています。 さらに、研究者らは、治療条件がTICIMELおよびMELANFalpha（alphaPD-1+alphaCTLA-4+/- TNFi [抗マウスTNF、クローンXT3.11]）の条件を模倣するマウス黒色腫モデル（B16Ova）で、三療法が有効であることを示した。併用療法と比較して、腫瘍の全退縮の頻度と全生存期間が増加しました。 再チャレンジ実験で証明されたように、三療法で治癒したマウスは抗黒色腫記憶反応を発現しました。 TNF 遮断が ICI 時の患者の抗黒色腫免疫反応の覚醒をどのように促進するか、また TNFi の特性がこれらの反応をどのように異なって調節するかを理解することは、以下の点で極めて重要です。

• (i) ICI 耐性の原因となる機構の一部を克服するために関与する必要がある細胞および分子経路をより深く理解する。
• (ii) これらの対応を促進するための、より良い可能性のある新しい戦略を特定します。
• (iii) そのような治療法から最も恩恵を受ける可能性のある患者を特定する。

仮説、プロジェクトの主な目的とエンドポイント

研究者らの最近発表されたデータと未発表のデータを考慮して、研究者らは、TNF 遮断が患者における ICI の有効性を促進する可能性があると仮説を立てています。 ただし、この効果は、使用される TNF 遮断剤の構造特性によって影響を受ける可能性があります。 この仮説を評価するために、研究者らは、TICIMEL (ipi+nivo+certo または inflix) 臨床試験と MELANFalpha (ipi+nivo、TNFi なし) 臨床試験からの患者の臨床生物学的反応を比較します。 certo と inflix が免疫応答に異なる影響を与える分子機構を解明するために、研究者らは、それぞれ共培養系および独自のマウス黒色腫モデルで ex vivo および in vivo 実験を実施します。

方法論と実行する作業を説明するプロジェクト計画 主および副目的を達成するために、提案は 3 つの主要な WP に分割されます。

WP1: 進行性黒色腫患者におけるセルトリズマブとインフリキシマブが ICI 依存性の全身免疫反応にどのような影響を与えるかを解読する。

WP2: 進行性黒色腫患者の腫瘍における ICI 依存性の抗黒色腫免疫応答に対する TNFi の影響を分析すること。 研究者らはすでに、TICIMELの第1部に登録された患者から採取したホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）黒色腫生検に対して免疫組織化学（IHC）を実施し、治療前および治療中の腫瘍浸潤白血球（CD3、CD8、CD4、FOXP3、CD68）を評価した。 ）。

WP3: 共培養実験およびマウスにおける TNFi が ICI 依存性の抗黒色腫免疫応答に及ぼす影響を分析する。