Bloqueando o TNF para Potenciar o Despertar Imune Dependente de ICI no Melanoma (ATPIC)

Antecedentes e originalidade do projeto em relação ao estado da arte

Apesar dos enormes inibidores do ponto de controle imunológico (ICI), como anti-PD-1 e anti-CTLA-4, trazidos para o tratamento de pacientes com melanoma avançado, 60% deles não respondem ou recaem dentro de 5 anos após o início do tratamento. Eventos adversos imunológicos graves (irAEs) são desencadeados após a terapia com ICI, como colite, que pode ser tratada com inibidores (TNFi) do Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF), como infliximabe. O impacto farmacodinâmico do TNFi nas respostas imune e clínica ainda precisa ser esclarecido.

Embora o TNF tenha sido identificado como um fator solúvel capaz de desencadear necrose tumoral em camundongos, a produção crônica de TNF no microambiente tumoral demonstrou contribuir para a progressão do câncer. Os investigadores e outros mostraram que esta propriedade de promoção do câncer depende de vários mecanismos, incluindo a fuga imune. Por exemplo, os pesquisadores mostraram que o TNF desencadeia a morte celular induzida por ativação (AICD) em células T CD8, limitando assim a infiltração de células T CD8 em tumores de melanoma de camundongos. Em modelos de camundongos de melanoma, câncer de mama e cólon, o TNFi aumenta a eficácia do ICI (anti-PD-1, anti-CTLA-4) e reduz a gravidade de irAEs, como colite. Portanto, a combinação de anticorpos bloqueadores de TNF com ICI promove a eficácia da terapia e a tolerância in vivo.

Os dados não publicados dos investigadores mostram que todos os tratamentos promoveram a diferenciação de células T circulantes em direção a um fenótipo de memória efetora (dados não mostrados) entre a linha de base (antes da indução do tratamento, semana 0 [S0]) e a semana 6 (S6) após a indução do tratamento. Eles também significativamente 1- Antecedentes e originalidade do projeto em relação ao estado da arte Apesar do tremendo avanço dos inibidores de checkpoint imunológico (ICI), como anti-PD-1 e anti-CTLA-4 trazidos para o tratamento de pacientes com melanoma avançado , 60% deles não respondem ou recaem dentro de 5 anos após o início do tratamento. Eventos adversos imunológicos graves (irAEs) são desencadeados após a terapia com ICI, como colite, que pode ser tratada com inibidores (TNFi) do Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF), como infliximabe. O impacto farmacodinâmico do TNFi nas respostas imune e clínica ainda precisa ser esclarecido. Embora o TNF tenha sido identificado como um fator solúvel capaz de desencadear necrose tumoral em camundongos, a produção crônica de TNF no microambiente tumoral demonstrou contribuir para a progressão do câncer. Os investigadores e outros mostraram que essa propriedade de promoção do câncer depende de vários mecanismos, incluindo a fuga imune. Por exemplo, os pesquisadores mostraram que o TNF desencadeia a morte celular induzida por ativação (AICD) em células T CD8, limitando assim a infiltração de células T CD8 em tumores de melanoma de camundongos. Em modelos de camundongos de melanoma, câncer de mama e cólon, o TNFi aumenta a eficácia do ICI (anti-PD-1, anti-CTLA-4) e reduz a gravidade de irAEs, como colite. Portanto, a combinação de anticorpos bloqueadores de TNF com ICI promove a eficácia da terapia e a tolerância in vivo. Com base em estudos pré-clínicos, os investigadores implementaram dois ensaios clínicos (TICIMEL e MELANFalpha) em pacientes com melanoma avançado (estágio IIIc/IV) tratados com ICI [anti-PD-1, nivolumab (nivo) + anti-CTLA-4, ipilimumab (ipi )] em combinação (TICIMEL) ou não (MELANFalpha) com TNFi [certolizumab (certo) ou infliximab (inflix)]. Enquanto o inflix é um anticorpo monoclonal IgG1 quimérico anti-TNF bivalente, o certo é um fragmento Fab' PEGilado monovalente de um monoclonal anti-TNF humanizado. Todos os pacientes (ou seja, 92) foram inscritos entre 2018 e 2021. TICIMEL (n=32) é um ensaio clínico de fase 1b com o objetivo de avaliar a segurança e a tolerabilidade da coadministração de ipi, nivo e TNFi (certo ou inflix). Os primeiros dados dos investigadores, obtidos de 14 pacientes, indicam que ambas as triterapias são seguras em humanos, com uma alta taxa de resposta promissora na coorte certo. MELANFalpha (n=60) é um estudo piloto com o objetivo de descobrir biomarcadores preditivos de resposta/resistência a ICI. Ele mostra notavelmente que altos níveis de TNF são detectados após o tratamento com ipi/nivo em plasmas de não respondedores. Os dados não publicados dos investigadores mostram que todos os tratamentos promoveram a diferenciação das células T circulantes em direção a um fenótipo de memória efetora entre a linha de base (antes da indução do tratamento, semana 0 [S0]) e a semana 6 (S6) após a indução do tratamento. Eles também aumentaram significativamente a proporção de células T Th1 no sangue dos pacientes. No entanto, esses efeitos foram significativamente amplificados na coorte de certolizumabe em comparação com a de ipi/nivo. Consequentemente, os investigadores observaram concentrações plasmáticas aumentadas de IFN-gama na coorte de certolizumabe. As proporções de células T Th2, Th17 e Th1/17 não foram significativamente afetadas pelos três regimes de tratamento. Além disso, a combinação de TNFi com ICI foi associada a proporções aumentadas de células T CD8 específicas para MART-1 circulantes. Essas células exibiram principalmente um fenótipo de memória central/efetora e mostraram expressão aumentada de CXCR3 (Fig. 1D-F). Os investigadores realizaram o sequenciamento de RNA de célula única CiteSeq (scRNAseq) em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) obtidas antes (S0) e na S6 de 4 pacientes com melanoma avançado inscritos em cada uma das 3 coortes. Sinais de ativação e maturação das respostas imunes foram óbvios em todos os pacientes do TICIMEL, exceto um, na S6. Isso indica que é improvável que o TNFi comprometa o reforço imunológico observado em pacientes tratados com ipi/nivo. Além disso, os investigadores mostram em um modelo de melanoma de camundongo (B16Ova) em que as condições de tratamento imitam as de TICIMEL e MELANFalpha (alfaPD-1+alfaCTLA-4+/- TNFi [anti-TNF de camundongo, clone XT3.11]), que a triterapia aumentou a frequência de regressões tumorais totais e sobrevida global, em comparação com a terapia dupla. Camundongos, curados após triterapia, desenvolveram respostas de memória anti-melanoma, conforme evidenciado por um experimento de reexposição. Compreender como o bloqueio do TNF aumenta o despertar das respostas imunes antimelanoma dos pacientes após ICI e como as propriedades do TNFi podem modular diferencialmente essas respostas é fundamental para:

• (i) compreender melhor as vias celulares e moleculares, que precisam ser acionadas para superar alguns dos mecanismos responsáveis ​​pela resistência ao ICI.
• (ii) identificar novas e potencialmente melhores estratégias para promover essas respostas.
• (iii) identificar pacientes que podem se beneficiar mais de tais terapias.

Hipótese, objetivo(s) principal(ais) e endpoint(s) do projeto

Considerando os dados recentemente publicados e não publicados dos investigadores, os investigadores levantam a hipótese de que o bloqueio do TNF pode promover a eficácia da ICI em pacientes. Este efeito pode, no entanto, ser afetado pelas propriedades estruturais do agente bloqueador de TNF usado. Para avaliar essa hipótese, os pesquisadores irão comparar as respostas clinicobiológicas dos pacientes dos ensaios clínicos TICIMEL (ipi+nivo+certo ou inflix) e MELANFalpha (ipi+nivo, sem TNFi). Para esclarecer os mecanismos moleculares pelos quais certo e inflix impactam diferentemente nas respostas imunes, os pesquisadores realizarão experimentos ex vivo e in vivo em sistemas de co-cultura, bem como em um modelo único de melanoma de camundongo, respectivamente.

Plano de projeto descrevendo a metodologia e os trabalhos a serem realizados Para atingir os objetivos primários e secundários, a proposta está dividida em três GTs principais.

WP1: Decifrar como o certolizumabe e o infliximabe influenciam as respostas imunes sistêmicas dependentes de ICI em pacientes com melanoma avançado.

WP2: Analisar o impacto que o TNFi tem nas respostas imunes anti-melanoma dependentes de ICI em tumores em pacientes com melanoma avançado. Os investigadores já realizaram imunohistoquímica (IHC) em biópsias de melanoma fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE) de pacientes inscritos na primeira parte do TICIMEL para avaliar os leucócitos infiltrantes do tumor antes e durante a terapia (CD3, CD8, CD4, FOXP3, CD68 ).

WP3: Analisar o impacto que o TNFi tem nas respostas imunes anti-melanoma dependentes de ICI em experimentos de co-cultura e em camundongos.