여성 복압성 요실금 치료를 위한 줄기세포 치료

** 연구 환경: 연구는 Ain-Shams University Maternity Hospital - urogynecolgy unit; 비뇨부인과 외래 환자 모집

** 표본의 크기:

내인성 괄약근 결핍으로 인한 복압성 요실금이 있는 50명의 여성 환자를 두 그룹으로 모집합니다. 25명의 환자를 포함하는 그룹 A는 줄기세포를 주입받게 되며, 이들은 1차 치료로 수술을 거부하거나 수술이 부적합한 환자들이다. 그룹 B; 25명의 환자를 포함하여 텐션 프리 질 테이프 수술을 받게 됩니다. 샘플 크기는 다음 방정식에 따라 결정됩니다.

[ P1(100-P1) + P2(100-P2) ] / (P2 - P1)2 여기서; 테스트의 검정력 = 80% 신뢰 수준 = 95% 알파 오류 = 5% 내인성 괄약근 결핍증 P1=80%(Schierlitz et al, 2008)가 있는 환자에서 바람직하게 사용되는 개입 "긴장력 없는 질 테이프"의 성공률 가정.

줄기 세포 치료의 성공률을 P2= 90%라고 가정합니다(Smaldone et al, 2009).

** 간섭:

1. 동의 사전 동의는 세계의사협회(WMA) 헬싱키 선언에 따라 이루어집니다. 인간 피험자를 대상으로 하는 의학 연구의 윤리적 원칙.
2. 병력 배뇨 습관, 요실금, 배뇨 기능 장애, 요로 감염에 관한 자세한 병력과 함께 각 환자의 전체 병력을 가져옵니다. 요실금에 대한 설문지 및 삶의 질에 대한 설문지를 받게 됩니다.
3. 검사 복압성 요실금의 존재를 평가하고 요도의 현저한 과운동성 또는 심한 방광류 또는 직장류가 있는 환자를 제외하기 위해 신체 및 골반 검사를 완료합니다.
4. 요역동학 연구 방광내압 측정, 요도압 측정, ALPP(복부 누출점 압력) 측정 및 잔뇨 측정을 포함하여 Euet Sensik ®을 사용한 다채널 요역동학 연구를 수행합니다. 내인성 괄약근 결핍으로 인한 복압성 요실금 환자가 선택됩니다. 선택 기준은 다음과 같습니다: 스트레스 조작으로 인한 누출 중 비자발적 수축이 없음; 낮은 ALPP(<60 cmH2O); & 최대 요도 폐쇄 압력(MUCP) < 20-30 cmH2O. 배뇨 기능 장애가 있는 환자는 제외됩니다(잔뇨량 >100ml).

5. 세포 회수, 배양 및 처리:

   * 골수 포부:

   - 부위: 후상장골능.

   -절차: 환자는 측면 욕창자위에서 위쪽 다리는 굽히고 아래쪽 다리는 곧게 편다. 장골능을 촉진하고 선호하는 샘플링 부위를 펜으로 표시합니다. 멸균 장갑과 가운을 포함한 무균 기술이 사용됩니다. 부위는 방부제(포비돈-요오드)로 준비하고, 문지르고, 드레이프하여 샘플링할 부위만 노출시킵니다. 피부와 골막의 하부 조직에 국소 마취제(약 10mL의 1% 자일로카인[리도카인])를 침투시킵니다. 25게이지 바늘이 달린 10mL 주사기를 사용하여 초기 0.5mL를 피부 바로 아래에 주사하여 팽진을 일으킵니다. 22게이지 바늘을 사용하여 직경 약 1cm의 영역인 피하 조직과 밑에 있는 골막으로 더 깊숙이 침투합니다. 작은 외과용 칼날로 피부를 절개하고, 이를 통해 탐침이 고정된 골수 흡인 바늘을 삽입합니다. 바늘이 뼈에 닿으면 천천히 시계 방향과 시계 반대 방향으로 회전하여 피질골을 관통하고 골수강에 들어갈 때까지 바늘을 전진시킵니다. 침투 깊이는 초기 1cm를 넘지 않아야 합니다. 골수 구멍 내에서 스타일렛이 제거됩니다. 20mL 주사기를 사용하여 약 5mL의 골수를 흡인합니다. 후속 검체는 별도의 주사기를 부착하여 한 번에 5mL씩 채취합니다. 그런 다음 샘플을 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 함유 튜브로 옮깁니다. 골수 바늘을 제거하고 출혈이 멈출 때까지 거즈로 흡인 부위를 압박합니다.

   * 세포 처리 및 배양:

   - 단핵 세포(MNCs)는 Ficol/Hypaque를 사용하여 밀도 구배 원심분리에 의해 분리됩니다.

   - 중간엽 줄기 세포(MSC)는 완전 배양 배지(DMEM, 1% 항생제/항진균제, 20% 자가 혈청)에서 T25 조직 배양 플라스크에 MNC를 시딩하여 소성 부착을 통해 분리됩니다. 플라스크는 3-5일 동안 CO2 인큐베이터에서 37ºC로 배양됩니다.

   - 5일 후, 중간엽 줄기세포의 수와 형태에 대해 역현미경으로 플라스크를 평가합니다. 부착되지 않은 세포는 폐기되고 배지가 보충됩니다.

   - 배지의 절반은 3일마다 교체됩니다.

   - 플라스크는 세포가 약 80-90% 합류에 도달할 때까지 평가됩니다.

   • MSC는 5분 동안 트립신-EDTA(0.25%)를 사용하여 수확됩니다. 이후 자가 혈청을 첨가하면 트립신 작용이 중단됩니다.
   • MSC는 인산염 완충 식염수(PBS)를 사용하여 세척하고, 계수하고, 트리판 블루 배제 테스트를 사용하여 생존력을 테스트합니다.
   • MSC는 면역 표현형 마커(CD44에 대해 양성 및 CD34에 대해 음성)를 사용하여 확인됩니다.
   • 세포는 주사 준비가 된 10cc 주사기에 최소 20 X 106 MSC 세포인 멸균 식염수에 현탁됩니다.

   검체 채취, 준비, 보관 및 주입 시 완벽한 무균 상태를 보장하기 위해 호기성 및 혐기성 세균 배양을 수행하여 무균성에 대한 품질 관리 검사를 수행합니다. (구네티 외, 2012)

6. 세포 주입:

   환자는 쇄석술 위치에 배치됩니다. Foley의 카테터(크기 18)를 요도에 삽입한 다음 국소 마취하에 삽입합니다. 회수된 세포(10cc 주사기에 환자당 총 20-3000만 세포)(Sebe et al., 2011)는 방광 목 바로 원위의 근위 요도 수준에서 점막하 조직에 주입됩니다(Foley's에 대한 신장에 의해 안내됨). 카테터), 3,9,12시 방향에 각 부위에 약 3.5cc를 주입합니다.

7. 장력이 없는 질 테이프(TVT):

   또 다른 25명의 환자는 산부인과 - Ain Shams 산부인과 병원 - 비뇨부인과에서 "장력이 없는 질 테이프" 수술인 외과 개입을 받게 됩니다. 이 기술에서는 질 점막에 작은 중간 요도 절개를 한 다음 두 개의 구부러진 트로카에 부착된 폴리프로필렌 40*1cm 메쉬 테이프를 요도 측면으로 통과시키고 골반 내 근막을 통해 치골 후 공간으로 통과시킵니다. 그런 다음 트로카는 두 개의 작은 치골 상부 피부 절개로 치골의 뒤쪽을 따라 직근 근막을 통과한 다음 테이프의 장력을 조정하고 나머지 테이프는 피부 수준에서 잘라냅니다.

8. 후속 조치:

추적관찰은 치료 후 3개월, 6개월, 9개월, 12개월에 실시한다. 임상 검사, 요실금 설문지, 삶의 질 설문지, 요역동학 연구가 수행됩니다.

** 데이터 수집 및 기록:

각 환자는 다음 데이터가 기록되는 사례 기록 양식(CRF)을 갖게 됩니다.

• 연령, 패리티
• 체질량지수(BMI).
• 중재 유형(줄기 세포 치료 또는 TVT)
• 입원 및 3m, 6m, 9m, 12m 주사 후 요실금 설문지-요실금 약식(ICIQ-UI SF)에 대한 국제 상담.
• 입원 및 주사 후 3m, 6m, 9m, 12m에 요실금 삶의 질(I-QOL) 기기 점수.
• 입원 및 주사 후 3m, 6m, 9m, 12m에 대한 기침 테스트.

• 입원 및 주사 후 3m, 6m, 9m, 12m에 대한 요역동학적 연구.

  • 통계 분석:

측정된 변수에 대한 기술 통계는 범위, 평균 및 표준 편차(메트릭 데이터의 경우)로 표현됩니다. 범위, 중앙값 및 사분위수 범위(이산 데이터의 경우); 및 수와 비율(범주형 데이터의 경우). 사전 주입 및 사후 주입 결과는 측정된 매개변수가 가우시안 변수인지 여부에 따라 t-테스트 또는 Wilcoxon 테스트를 사용하여 비교됩니다. 0.05 이하의 P-값은 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다.

** 윤리적 고려 사항:

1. 조사자의 책임 위임:

   시험자는 임상시험을 지원하는 모든 사람이 임상시험계획서, 임상시험 관련 의무 및 기능에 대해 충분히 알도록 해야 합니다. 조사관은 중요한 시험 관련 임무를 위임한 하위 조사관 및 기타 적절한 자격을 갖춘 사람의 목록을 유지합니다.

2. 환자 정보 및 사전 동의 임상 연구에 참여하기 전에 환자는 임상 연구의 성격, 범위 및 가능한 결과를 환자가 이해할 수 있는 형태로 설명한 후 참여에 동의해야 합니다. 아랍어로 된 정보에 입각한 동의 문서에는 현지에서 요구되는 모든 요소가 포함되어 있으며 누가 환자에게 알렸는지 명시되어 있습니다. 사전 동의 문서를 읽은 후 환자는 서면으로 동의해야 합니다. 환자의 동의는 동의 시점에 환자의 개인 날짜 서명과 정보에 입각한 동의 토론을 수행하는 사람의 개인 날짜 서명에 의해 확인되어야 합니다. 환자가 읽을 수 없는 경우 서면 동의서 양식 및 환자에게 제공할 정보에 대한 구두 발표 및 설명은 공정한 증인의 입회하에 이루어져야 합니다. 동의는 구두 동의 시 환자의 개인 날짜 서명 또는 현지에서 법적으로 인정되는 대안(예: 환자의 지문 또는 마크)으로 확인되어야 합니다. 증인과 정보에 입각한 동의 논의를 진행하는 사람도 동의 문서에 서명하고 개인적으로 날짜를 기입해야 합니다. 원본 서명 동의 문서는 조사관이 보관합니다. 연구자는 유효한 동의를 얻을 때까지 임상 연구에만 특별히 필요한 조치를 취하지 않습니다.
3. 기밀성 CRF에는 환자 번호와 환자 이니셜만 기록되며, 환자 이름이 다른 문서에 표시되는 경우 조사관이 기밀로 유지해야 합니다. 조사자는 기록을 식별할 수 있도록 개인 환자 식별 목록(해당 환자 이름이 있는 환자 번호)을 유지합니다.
4. 의정서 승인 연구 시작 전에 현지 규정에 따라 의정서 및 모든 해당 문서는 Ain Shams University 산부인과 협의회에서 윤리 및 연구 승인을 위해 선언됩니다. 헬싱키의 WMA 선언에 따르면.