Stamcelleterapi til behandling af kvindelig stress-urininkontinens

** Studieindstillinger: Undersøgelsen skal afholdes på Ain-Shams University Maternity Hospital - urogynækologisk enhed; rekruttering af patienterne fra det urogynækologiske ambulatorium

** Prøvestørrelse:

Halvtreds kvindelige patienter med stress-urininkontinens på grund af iboende sphincter-mangel vil blive rekrutteret i to grupper; gruppe A inklusive 25 patienter vil blive injiceret med stamceller, og disse vil være de patienter, der nægter operation som primær behandlingslinje eller uegnede til operation. gruppe B; inklusive 25 patienter, vil gennemgå den spændingsfri vaginal tape operation. Prøvestørrelsen bestemmes i henhold til følgende ligning:

[P1(100-P1) + P2(100-P2)]/(P2-P1)2 hvor; Testens styrke = 80 % Konfidensniveau = 95 % Alfa-fejl = 5 % Forudsat succesrate for den fortrinsvis anvendte intervention "spændingsfri vaginaltape" hos patienter med intrinsic sphincter-mangel P1=80 % (Schierlitz et al, 2008).

Forudsat succesrate for stamcelleterapi P2= 90% (Smaldone et al, 2009).

** Intervention:

1. Samtykke Informeret samtykke vil blive taget i henhold til World Medical Association (WMA) erklæring fra Helsinki; de etiske principper for medicinsk forskning, der involverer menneskelige forsøgspersoner.
2. Anamnese Fuldstændig sygehistorie vil blive taget fra hver patient sammen med detaljeret anamnese med hensyn til tømningsvaner, inkontinens, tømningsdysfunktion, urinvejsinfektion. Der vil blive indhentet spørgeskema om inkontinens, & spørgeskema om livskvalitet.
3. Undersøgelse Fuldstændig fysisk undersøgelse og bækkenundersøgelse for at vurdere tilstedeværelsen af ​​stress-urininkontinens og for at udelukke patienter med markant hypermobilitet af urinrøret, eller svær cystocele eller rectocele.
4. Urodynamisk undersøgelse En multikanals urodynamisk undersøgelse med Euet Sensik ® vil blive udført, inklusive cystometri, måling af urinrørstryk, måling af abdominalt lækpunktstryk (ALPP) og måling af resterende urin. Patienter med stress-urininkontinens på grund af intrinsic sphincter-mangel vil blive udvalgt. Kriterier for udvælgelse er: fravær af ufrivillige sammentrækninger under lækage forårsaget af en stressmanøvre; lav ALPP (<60 cmH2O); & maksimalt urethral lukningstryk (MUCP) <20-30 cmH2O. Patienter med tømningsdysfunktion vil blive udelukket (resterende urinvolumen >100 ml).

5. Cellehentning, kultur og behandling:

   * Knoglemarvsaspiration:

   -Site: posterior superior hoftekammen.

   -Fremgangsmåde: Patienten placeres i lateral decubitusposition, med det øverste ben bøjet og underbenet lige. Hoftebenskammen palperes, og det foretrukne prøveudtagningssted markeres med en pen. Der anvendes aseptisk teknik, herunder sterile handsker og kjole. Stedet er forberedt med et antiseptisk middel (povidon-jod), skrubbet og draperet, hvilket blot blotlægger det sted, der skal prøves. Huden og det underliggende væv til periosteum infiltreres med et lokalbedøvelsesmiddel (ca. 10 ml 1% Xylocain [lidokain]). En 10 ml sprøjte med en 25-gauge kanyle bruges til at injicere en indledende 0,5 ml direkte under huden, hvilket hæver en hvirvel. En 22-gauge nål bruges til at trænge dybere ind i det subkutane væv og det underliggende periosteum, et område på ca. 1 cm i diameter. Et hudsnit laves med et lille kirurgisk blad, hvorigennem knoglemarvsaspirationsnålen, med en stilet låst på plads, føres ind. Når nålen kommer i kontakt med knoglen, fremføres den ved langsomt at rotere med uret og mod uret, indtil den kortikale knogle er penetreret, og marvhulen er trængt ind. Dybden af ​​penetrationen bør ikke strække sig ud over en indledende 1 cm. Når man er inde i marvhulen, fjernes stiletten. Ved hjælp af en 20 mL sprøjte aspireres ca. 5 mL knoglemarv. Efterfølgende prøver opnås ved at fastgøre en separat sprøjte, idet der opsamles 5 mL ad gangen. Prøverne overføres derefter til et ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA)-holdigt rør. Marvnålen fjernes, og der påføres tryk på aspirationsstedet med gaze, indtil enhver blødning stopper.

   * Cellebehandling og kultur:

   - Mononukleære celler (MNC'er) vil blive isoleret ved tæthedsgradientcentrifugering ved hjælp af Ficol/Hypaque.

   - Mesenkymale stamceller (MSC'er) vil blive isoleret gennem plastisk vedhæftning ved podning af MNC'er i T25-vævskulturkolber i komplette dyrkningsmedier (DMEM, 1% antibiotika/svampemidler, 20% autologt serum). Kolberne inkuberes ved 37ºC i CO2-inkubator i 3-5 dage.

   - Efter 5 dage vil kolberne blive evalueret under omvendt mikroskop for antallet og morfologien af ​​MSC'er. Ikke-adhærente celler vil blive kasseret og medium genopfyldes.

   - Halvdelen af ​​mediet vil blive skiftet hver 3. dag.

   - Kolber vil blive evalueret, indtil cellerne når omkring 80-90% sammenløb.

   • MSC'er vil blive høstet ved hjælp af Trypsin-EDTA (0,25%) i 5 minutter. Bagefter stoppes trypsinvirkningen ved tilsætning af autologt serum.
   • MSC'er vil blive vasket ved hjælp af phosphatbufret saltvand (PBS), talt, testet for levedygtighed ved hjælp af trypanblåt udelukkelsestest.
   • MSC vil blive identificeret ved hjælp af immunfænotypiske markører (positive for CD44 og negative for CD34).
   • Celler vil blive suspenderet i sterilt saltvand, minimum 20 X 106 MSCs celler i en 10 cc sprøjte, klar til injektion.

   Kvalitetskontrol for steriliteten ved udførelse af bakterielle aerobe og anaerobe kulturer vil blive udført for at sikre de fuldstændige aseptiske forhold under prøveudtagning, forberedelse, opbevaring og injektion. (Gunetti et al., 2012)

6. Injektion af celler:

   Patienten vil blive placeret i litotomiposition. Et Foley's kateter (størrelse 18) vil blive indsat i urinrøret, derefter under lokalbedøvelse; hentede celler (i alt 20-30 millioner celler pr. patient i 10cc sprøjte) (Sebe et al., 2011) vil blive injiceret i det submucosale væv i niveau med det proksimale urinrør lige distalt for blærehalsen (styret af stræk på Foley's) kateter), kl. 3,9,12 og injicerer omkring 3,5 cc på hvert sted.

7. Spændingsfri vaginal tape (TVT):

   Yderligere 25 patienter skal gennemgå kirurgisk indgreb, som er operationen "spændingsfri vaginal tape" på obstetrisk & gynækologisk afdeling - Ain Shams Maternity Hospital - urogynækologisk afdeling. I denne teknik vil der blive lavet et lille midurethralt snit i vaginalslimhinden, hvorefter et polypropylen 40*1 cm mesh tape, der er fastgjort til to buede trokarer, føres lateralt til urinrøret og gennem endopelvis fascia ind i det retropubiske rum. Trokaren vil derefter blive ført langs bagsiden af ​​skambenet, gennem rectus fascia, i to små suprapubiske hudsnit, hvorefter spændingen på tapen justeres og den resterende tape skæres af i niveau med huden.

8. Opfølgning:

Opfølgningsbesøg vil blive gennemført 3 måneder, 6 måneder, 9 måneder og 12 måneder efter behandlingen. Klinisk undersøgelse, inkontinensspørgeskema, livskvalitetsspørgeskema og urodynamisk undersøgelse vil blive udført.

** Dataindsamling og registrering:

Hver patient vil have et case record form (CRF), hvor følgende data vil blive registreret:

• Alder, paritet
• Body Mass Index (BMI).
• Type intervention (stamcelleterapi eller TVT)
• International Consultation on Incontinence Questionnaire-Urinary Incontinence Short Form (ICIQ-UI SF) ved indlæggelse & 3m, 6m, 9m, 12m post-injektion.
• Inkontinens livskvalitet (I-QOL) Instrumentscore ved indlæggelse & 3m, 6m, 9m, 12m efter injektion.
• Hostetest ved indlæggelse & 3m, 6m, 9m, 12m efter injektion.

• Urodynamisk undersøgelse om indlæggelse & 3m, 6m, 9m, 12m post-injektion.

  • Statistisk analyse:

Beskrivende statistik for målte variable vil blive udtrykt som interval, middelværdi og standardafvigelse (for metriske data); interval, median og interkvartil interval (for diskrete data); og antal og proportioner (til kategoriske data). Præ-injektion og post-injektion fund vil blive sammenlignet ved hjælp af t-testen eller Wilcoxon-testen afhængigt af om de målte parametre var Gaussiske variabler. En P-værdi på 0,05 eller mindre vil blive betragtet som statistisk signifikant.

** Etiske overvejelser:

1. Uddelegering af efterforskeransvar:

   Efterforskeren vil sikre, at alle personer, der hjælper med forsøget, er tilstrækkeligt informeret om protokollen og deres forsøgsrelaterede opgaver og funktioner. Efterforskeren vil føre en liste over underforskere og andre passende kvalificerede personer, til hvem han eller hun har uddelegeret væsentlige retssagsrelaterede opgaver.

2. Patientinformation og informeret samtykke Før optagelse i den kliniske undersøgelse, skal patienten give samtykke til deltagelse, efter at arten, omfanget og de mulige konsekvenser af den kliniske undersøgelse er blevet forklaret i en for hende forståelig form. Et informeret samtykkedokument, på arabisk, indeholder alle lokalt påkrævede elementer og specificerer, hvem der har informeret patienten. Efter at have læst det informerede samtykkedokument, skal patienten give skriftligt samtykke. Patientens samtykke skal bekræftes på tidspunktet for samtykket af patientens personligt daterede underskrift og ved personligt dateret underskrift fra den person, der gennemfører samtalen om informeret samtykke. Hvis patienten ikke er i stand til at læse, skal mundtlig præsentation og forklaring af den skriftlige informerede samtykkeerklæring og oplysninger, der skal udleveres til patienterne, ske i nærværelse af et uvildigt vidne. Samtykke skal bekræftes på tidspunktet for samtykke mundtligt og med patientens personligt daterede underskrift eller af et lokalt juridisk anerkendt alternativ (f.eks. patientens tommelfingeraftryk eller mærke). Vidnet og den person, der fører de informerede samtykkedrøftelser, skal også underskrive og personligt datere samtykkedokumentet. Det originale underskrevne samtykkedokument vil blive opbevaret af efterforskeren. Investigatoren vil ikke foretage nogen foranstaltninger, der kun kræves specifikt til den kliniske undersøgelse, før gyldigt samtykke er opnået.
3. Fortrolighed Kun patientnummer og patientinitialer vil blive registreret i CRF, og hvis patientens navn fremgår af et andet dokument, skal det opbevares i fortrolighed af efterforskerne. Investigatoren vil føre en personlig patientidentifikationsliste (patientnumre med de tilsvarende patientnavne) for at gøre det muligt at identificere journaler.
4. Protokolgodkendelse Inden studiets begyndelse og i overensstemmelse med de lokale bestemmelser, der følges, vil protokollen og alle tilsvarende dokumenter blive erklæret til etisk og forskningsmæssig godkendelse af rådet for ob/gyn-afdelingen, Ain Shams University; ifølge WMA-erklæringen fra Helsinki.