제2형 당뇨병 환자에서 포도당 저하 요법이 순환 내피전구세포 및 동원인자 기질유래인자-1α에 미치는 영향 (IGLOOS)

당뇨병은 2011년에 전 세계적으로 3억 6600만 명이 영향을 받는 것으로 보고된 만성 질환이며 2030년까지 전 세계적으로 5억 5200만 명, 즉 성인 10명 중 1명으로 증가할 것으로 추정됩니다. 영국에서만 유병률이 4.5%이며 2025년에는 약 5백만 명이 영향을 받을 것으로 예상됩니다. 전체 당뇨병 인구 중 제2형 당뇨병(T2DM)이 90% 이상을 차지합니다. UKPDS(영국 전향적 당뇨병 연구)에서 T2DM 환자의 50%가 진단 당시 미세혈관 및/또는 대혈관 합병증을 나타냈습니다. 제2형 당뇨병 환자는 일반 인구에 비해 심혈관 합병증의 위험이 4~5배 더 높아 사망률의 80%를 차지한다는 것은 잘 알려져 있습니다. 따라서 의료 서비스에 대한 당뇨병 및 관련 합병증의 부담은 엄청납니다. 당뇨병과 관련된 합병증에 대한 약만 처방하는 것은 국민건강보험(NHS)에서 당뇨병 관리를 위한 약보다 3~4배 더 비쌉니다. 따라서 혈당 조절과 당뇨 합병증, 특히 심혈관 질환(CVD)을 동시에 목표로 하는 치료법은 포도당 저하 효과와 무관하게 바람직합니다.

현재 연구는 T2DM이 확립된 환자의 EPC, SDF-1α 및 기타 바이오마커 수준에 대한 인크레틴 기반 요법(DPP-4 억제제 대 GLP-1 유사체) 및 인크레틴 기반 요법 대 비인크레틴 기반 치료의 치료 효과를 평가하는 것을 목표로 합니다. 이러한 치료에 대해(>3개월 동안 받음).

연구 목적 T2DM 환자에서 DPP-4 억제제 치료가 GLP-1 유사체를 투여받은 환자와 비교하여 내피 전구 세포(EPC) 및 기질 유래 인자-1 α(SDF-1α)의 증가와 관련이 있는지 조사합니다. 혼동 요인에 대해 조정된 단면 분석.

또한, 이 연구는 인크레틴 기반 요법으로 치료하는 것이 비인크레틴 기반 요법과 비교하여 더 높은 순환 수준의 EPC 및 SDF1-α와 관련이 있는지 확인하는 것을 목표로 합니다.

후속 EPC 정량화를 위한 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 준비 PBMC는 표준 기술을 사용하여 수집됩니다. 간단히 말해서 PBMC는 9.7ml 나트륨 헤파린 혈액 튜브(이후 최대 4시간 동안 실온에서 보관됨)에 수집된 정맥혈에서 분리됩니다. 그런 다음 혈액 샘플을 원심분리(4⁰C에서 10분 동안 1500g)하고 나중에 바이오마커 분석을 위해 혈장층을 수집합니다(혈장 분취량은 사용할 때까지 -80⁰C에서 동결됨). 버피 코트 층(적혈구 펠릿 바로 위에 있는 흰색 불투명 층)은 PBMC 분리에 사용됩니다. PBMC를 분리하기 위해 버피 코트를 400g에서 Ficoll 구배(1.077g/ml)로 30분 동안 원심분리한 다음 생성된 세포층을 3번 더 세척합니다(10분 동안 300g 및 10분 동안 20g X2). 세포를 세척하고 혈소판을 고갈시킵니다. 분리된 PBMC의 수를 계산하기 위해 펠렛을 알려진 부피의 인산완충액(PBS)(1ml)에 현탁하고 소량(10µl)을 혈구계와 바이탈 스테인(트리판 블루).

종방향 샘플 수집으로 인한 분석 간 변동을 방지하기 위해 샘플은 액체 질소 증기(표준 동결 프로토콜 사용)에 저장되고 EPC의 정량화는 저장된 샘플에서 하나의 배치로 수행됩니다.

EPC의 정량화 EPC는 세포 표면/막관통 마커에 대해 이중 양성을 나타내는 세포로서 정량화될 것입니다: 분화 클러스터 24(CD24) 및 키나아제 도메인 수용체(KDR). 표준화된 유세포 분석 프로토콜이 사용됩니다. 요컨대, 세포를 해동하고 형광 접합 항체: CD34-플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC) 및 KDR-피코에리트린(PE)을 사용하여 면역형광 세포 염색을 수행합니다. 각 환자에 대해 IgG2a-FITC-PE를 사용한 해당 음성 대조군이 처리됩니다. 순환하는 EPC의 수는 원래 처리된 혈액 μl당 CD24 및 KDR에 대해 이중 양성을 나타내는 총 세포 수로 표현됩니다.

바이오마커 SDF-1α 분석 및 순환하는 EPC의 유병률과 관련된 바이오마커 분석은 제조업체 프로토콜에 따라 샌드위치 ELISA 및 다중 어레이 ELISA 기술을 사용하여 측정됩니다. 내인성 DPP4의 분석은 상업적 비색 검정을 사용하여 검정될 것이다; 다시 제조업체 프로토콜을 따를 것입니다. 바이오마커 및 DPP4 분석은 저장된 나트륨 헤파린 혈장 샘플에 대해 하나의 배치로 수행됩니다.

통계 통계적 방법 및 분석 기준선 특성은 그룹별로(현재 DPP-4 억제제를 투여 중인 사람, 현재 GLP-1유사체를 투여 중인 사람, 현재 DPP-4 억제제 또는 GLP-1 유사체를 사용하지 않는 사람) 정상에 대한 평균 및 표준편차로 표시됩니다. 분포 연속 변수, 비정규 분포 연속 변수의 중앙값 및 사분위수 범위, 범주형 변수의 개수 및 백분율. 1차 결과(EPC)는 잠재적 혼란 요인에 대한 조정 여부에 관계없이 선형 회귀를 사용하여 치료 그룹별로 비교됩니다. 고려해야 할 혼동 요인은 연령, 성별, 민족, 체질량 지수, T2DM 기간 및 인슐린 치료입니다. 3개의 그룹 각각에서 평균 EPC 및 그의 95% 신뢰 구간은 DPP-IV 대 GLP-1 치료 그룹 사이 및 인크레틴 대 비-인크레틴 치료 그룹 사이의 평균 차이와 함께 제시될 것이다. 모든 연속 2차 결과에 대해 유사한 분석이 사용됩니다. 이진 결과는 동일한 혼란 요인에 대한 조정이 있거나 없는 로지스틱 회귀 분석을 사용하여 그룹별로 비교됩니다. 모든 통계 테스트는 양면이며 p<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다.

샘플 크기 80%의 검정력 및 0.025의 유의성을 기반으로 합니다(두 가지 기본 비교, 즉 DPP-IV 대 GLP-1 사용자 및 인크레틴 사용자 대 비인크레틴 사용자), 216명의 환자(세 그룹 각각에서 72명)는 10 EPC/μl의 차이를 검출하기 위해 필요합니다. 24. 이 샘플 크기는 또한 8 pg/ml의 SDF-1α 차이가 SD가 16에서 24의 거듭제곱이라고 가정할 때 75% 검정력으로 감지할 수 있게 합니다.

데이터 관리 데이터 수집 시트 관리 모든 임상 데이터는 Leicester Diabetes Centre의 보안 구역에 저장됩니다. 등록된 각 피험자에게는 고유한 연구 식별 번호(ID)가 할당되어 전자 데이터베이스가 익명으로 유지됩니다.

데이터 수집 양식(Case report Form, CRF)은 기본 데이터 수집 도구입니다. 데이터 관리 확인이 이루어지며 가능한 경우 누락된 데이터에 대해 설명합니다. 항목이 개별 사례에 해당되지 않는 경우 N/A로 표시됩니다. 모든 항목은 검정 잉크로 읽기 쉽게 인쇄됩니다. 입력 오류가 발생한 경우 오류를 수정하기 위해 잘못된 입력과 그 위에 입력된 올바른 데이터를 통해 단일 선이 그려집니다. 이러한 모든 변경 사항에는 이니셜과 날짜가 표시됩니다. 읽을 수 없거나 불확실한 항목을 명확히 하기 위해 항목 위에 설명이 인쇄되고 이니셜과 날짜가 표시됩니다.

문서 저장, 액세스, 보안, 보관 식별 가능한 환자 데이터가 포함된 모든 연구 문서는 ICH-GCP(International Conference on Harmonisation-Good Clinical Practice), 건강 및 사회 관리를 위한 연구 거버넌스 프레임워크 및 데이터 보호법에 따라 관리됩니다. 정보는 연구에 필요한 경우에만 환자로부터 얻을 수 있습니다.

모든 전자 데이터는 안전한 대학(University of Leicester) 또는 병원(University Hospitals of Leicester NHS Trust) 네트워크 드라이브에 저장되며, 해당 연구 직원만 액세스할 수 있으며 연구팀이 이를 승인합니다.

모든 연구 문서 및 데이터는 5년 또는 규제 당국이 결정한 최소 기간 중 더 긴 기간 동안 보관됩니다. 연구 파일은 신탁 정책에 따라 보관됩니다.

데이터 기밀성 각 참가자는 모집 시 고유 식별 번호가 할당됩니다. 환자의 연락처 세부 정보는 별도의 데이터베이스에 보관되며 연구 방문을 준비하는 데 사용됩니다. 데이터베이스는 암호로 보호되며 환자와 접촉하는 연구팀 구성원만 액세스할 수 있습니다. 연구 중에 수집된 모든 데이터는 별도의 데이터베이스에 익명으로 저장됩니다. 다시 액세스는 암호로 보호되고 연구 팀의 관련 구성원으로 제한됩니다. 전자 데이터는 대학 또는 NHS 시스템에 저장됩니다.

안전성 문제 조사관은 연구에 기인할 수 있는 일상 생활 및 일상적인 건강 관리와 관련된 것 이상으로 어떠한 부작용도 예상하지 않습니다. 이 연구는 정맥혈을 회수하기 위해 단 한 번의 정맥 천자만 포함하므로 좋지 않은 영향을 미칠 위험이 매우 낮습니다. 그러나 모든 참가자는 때때로 멍, 부기 및 일시적인 불편을 초래할 수 있는 정맥 천자를 받게 됩니다.

조사관은 GCP(Good Clinical Practice) 지침에 설명된 대로 심각한 부작용(SAE) 또는 의심되는 예기치 않은 심각한 부작용(SUSAR)을 관리하고 보고하기 위한 레스터 대학교 지침을 따를 것입니다.

SAE는 사망을 초래하는 이상 반응 또는 예상치 못한 이상 반응입니다. 생명을 위협하는 경우 입원이 필요하거나 기존 입원의 연장이 필요합니다. 선천적 기형 또는 선천적 결함으로 구성되는 지속적이거나 상당한 장애 또는 무능력을 초래합니다. 또한, 조사관은 즉시 생명을 위협하거나 사망 또는 입원을 초래하지 않을 수 있지만 적절한 의학적 판단에 따라 환자를 위험에 빠뜨릴 수 있거나 다음을 위한 개입이 필요할 수 있는 중요하고 중대한 의학적 사건인 경우 사건을 심각한 것으로 정의합니다. 위에 나열된 하나 이상의 결과를 방지합니다. 이러한 범주에 속하지 않는 부작용은 심각하지 않은 것으로 정의됩니다.

모든 SAE는 연구 팀이 이벤트를 알게 된 후 24시간 이내에 적절한 보고 양식을 사용하여 레스터 대학 병원(UHL) NHS 신뢰 연구 및 개발(R&D) 및 후원자(레스터 대학)에 내부적으로 보고됩니다. 수석 조사자는 모든 SAE의 검토 및 제출을 책임지며, 그렇지 않은 경우 팀의 다른 구성원(지연을 방지하기 위해)을 책임집니다. 조사 사이트 파일에는 SAE 보고서에 대한 문서와 적시 제출 증거가 포함됩니다.