Test biopsji płynnej płynu EBUS-TBNA płynu do diagnozowania raka płuc

Tło rak płuc jest główną przyczyną zgonów z powodu raka. W szczególności bezbłędne raki płuc (NSCLC) stanowi ponad 80% przypadków [1]. Endobronochialna aspiracja igły przezbroniennej pod kontrolą ultradźwiękową (EBUS-TBNA) jest procedurą pierwszego wyboru w celu oceny nsclc, ponieważ pozwala na ocenę niskiego ryzyka [1-4]. Podczas zabiegu pobierane są klatki piersiowej węzłów chłonnych pod przewodnictwem sonograficznym endobronochialnym. Jednak 10-15% EBUS-TBNA nie daje odpowiedniego materiału cytologicznego do precyzyjnej diagnozy, oceny oceny lub dalszych testów [5-6]. Może to wynikać z błędów próbkowania, niskiej jakości lub ilości zebranego materiału lub obfitości martwicy [6]. W takich przypadkach można uznać za dalsze inwazyjne procedury chirurgiczne, takie jak śródpiersia lub torakoskopia, aby ukończyć określenie stopnia stopnia [1].

Zaleca się sekwencjonowanie nowej generacji (NGS) komórek nowotworowych w celu zidentyfikowania zmian molekularnych w celu wyboru ukierunkowanych terapii i poprawy wyników [3]. Gdy próbki tkanek są ograniczone lub nie-diagnostyczne, NGS można również wykonywać na krwi obwodowej lub innych płynach ustrojowych, takich jak złośliwe wysięk opłucnowy i supernatant EBUS-TBNA, technikami biopsji płynnej (LB). Profilowanie molekularne krwi obwodowej przez LB jest wysoce zgodne z NG biopsji tkanek, te same mutacje są wykrywane za pomocą obu metod, a tym samym zyskuje coraz większą popularność w leczeniu pacjentów z NSCLC [7-14]. LB może zapewnić charakterystykę molekularną, gdy jakość lub ilość tkanki nie jest wystarczająca, zidentyfikuj możliwe cele terapeutyczne, gdy takie nie są wykrywane przez NG tkanek, i prowadzić dalsze leczenie w przypadku postępu choroby [7-9]. LB NG supernatantu EBUS-TBNA oceniono w kilku badaniach na małą skalę, które wykazały dobrą zgodność z NG biopsji tkankowych i krwi obwodowej, poprawa wskaźników awarii oraz prawdopodobnie obniżone koszty i czasy zwrotu [13-15]. Badania te obejmowały tylko supernatant z pozytywnych procedur, tj. Procedury, w których zidentyfikowano komórki nowotworowe z próbek EBUS-TBNA. Obecnie LB NG nie mogą ustalić (lub wykluczającego) zaangażowania węzłów chłonnych w rozwój guza, a zatem nie mogą przyczynić się do procesu oceny.

Naszym celem jest wstępna ocena, czy LB NG z supernatantu mogą przyczynić się do zidentyfikowania udziału węzłów chłonnych u pacjentów ze zdiagnozowanym NSCLC, ale określonym jako ujemne dla węzłów chłonnych przez EBUS-TBNA.

Hipoteza badań postawiamy hipotezę, że istnieje doskonała korelacja między LB NGS z supernatantu EBUS-TBNA i zaangażowaniem guza węzłów chłonnych, nawet jeśli takie zaangażowanie nie rozpoznane jest przez cytologię EBUS-TBNA.

Cele badań Ogólne cele w celu wstępnej oceny, czy LB NG supernatantu mogą wskazywać na zaangażowanie węzłów chłonnych u pacjentów z niedrobnokomórkowym rakiem płuc (NSCLC), u których w aspiracie (fałszywie ujemne).

Konkretne cele

1. Aby ocenić zgodność między pozytywnością supernatantów LB NG a chirurgicznymi węzłami chłonnymi u pacjentów z ujemną oceną EBUS-TBNA (brak wykrytych komórek nowotworowych), którzy będą wymagać chirurgicznej resekcji klatki piersiowej węzłów chłonnych.
2. Aby ocenić zgodność między LB NG supernatantu a NGS próbek guza chirurgicznego.

2.3. Aby ocenić zgodność między LB NG supernatantu a LB NG z krwi obwodowej.

Metody Jest to prospektywne studium wykonalności. Pierwotnym rezultatem będzie zgodność między wynikami NGS supernatantów EBUS-TBNA (dodatnie vs. negatywne dla każdej mutacji powszechnie związanej z NSCLC) a końcową oceną patologiczną po operacji (dodatnie i negatywne zaangażowanie węzłów chłonnych klatki piersiowej). Wtórnym wynikiem eksploracyjnym będzie zgodność między zmianami genetycznymi wykryte przez kompleksowe NG tkanki a tymi wykryte przez supernatant LB, NG DNA bez komórki.

Kryteria włączenia:

1. Dziesięciu dorosłych (wiek ≥18 lat) pacjentów z wysokim podejrzeniem dla NSCLC z udziałem klatki chłonnej (według oceny klinicznej i badań obrazowania), zaplanowanych dla procedury EBUS-TBNA.
2. Uczestnicy z negatywnymi wynikami EBUS-TBNA (brak dowodów zaangażowania węzłów chłonnych przez guz według histologii), którzy będą wymagać chirurgicznej resekcji węzłów chłonnych klatki piersiowej, będą stanowić końcową grupę badawczą.

Kryteria wykluczenia:

1. Pacjenci niezdolni lub nie chcą wyrazić świadomej zgody na udział w badaniu.
2. Poddani, u których NSCLC ostatecznie zostanie wykluczony.
3. Pacjenci, którzy nie będą wymagać chirurgicznej resekcji klatki piersiowej węzłów chłonnych lub którzy nie przejdą takiej procedury w naszym centrum medycznym z jakiegokolwiek powodu.

Rozmiar próbki:

Z rekrutujemy 10 uczestników do tego studium wykonalności. Powinno to pozwolić na wykrycie znaczącej zgody (kappa Cohena)> 0,55, z 80% mocą i błędem typu I (alfa) 0,05.

Zmierzone zmienne:

Zebrane dane będą obejmować:

• Wiek
• Płeć
• Historia palenia
• Wcześniejsza historia medyczna, współistniejące i leki
• Wyniki obrazowania i ocena radiologiczna
• Raport EBUS-TBNA, w tym wielkość i struktura węzłów chłonnych, liczba i lokalizacja próbkowanych węzłów
• Raporty o operacji
• Ostateczna patologia i inscenizacja chirurgiczna
• NGS tkanki nowotworowej z próbek chirurgicznych
• LB NGS z supernatantu EBUS-TBNA
• Decyzje o leczeniu

Procedury badań:

Uczestnicy przejdą procedury EBUS-TBNA przy umiarkowanej sedacji, jak zwykle w naszej klinice. Podczas zabiegów podejrzane węzły chłonne piersiowe zostaną pobrane przy użyciu wskazówek ultrasonograficznych. Igła EBUS-TBNA i płyn płukania strzykawki zostaną zebrane w rurach zawierających 30 ml cytolitu (Hologic, Marlborough, Massachusetts). Próbki zostaną odwirowane przy 1200 obr./min przez 10 minut, supernatant zostanie wlany do innej rurki, a granulat komórki zostanie ustalony w formalinie i osadzony w parafinie jako blok komórkowy do standardowego obróbki cytopatologicznej. Supernatant (zwykle odrzucany) będzie przechowywany w 4 ° C, dopóki chirurgiczna resekcja węzłów chłonnych zostanie zalecana przez płytę nowotworową.

DNA i RNA zostaną wyekstrahowane z tkanki ustalonej w formalinie i zatopionej w parafinie (FFPE) dla NGS z wykorzystaniem kompleksowego testu OnComine ™ Plus w przypadku decyzji terapeutycznych, jak się powszechnie praktykowano [16]. W przypadku osób w końcowej grupie badawczej DNA bez komórek zostanie wyekstrahowane z próbek supernatantów, a NGS zostanie wykonany przy użyciu testu wolnego od komórek OnComine ™ Pan-Cancer, a także z krwi obwodowej, zgodnie z zaleceniami producenta i jak opisano wcześniej [17]. Oba testy mogą wykryć szerokie spektrum mutacji genetycznych, które są zwykle związane z NSCLC. Wszystkie ekstrakcje, sekwencjonowanie, analiza i obliczenia zostaną wykonane w laboratorium patologii Barzilai University Medical Center.

Analiza statystyczna:

Statystyki opisowe obejmują średnie i mediany o odchyleniach standardowych i zasięgu, liczbach bezwzględnych i wartościach procentowych. Zgoda między testami zostanie obliczona za pomocą statystyki Kappa Cohena.

Odniesienia

1. Planchard D, i in. Przerzucone, niestabilne rak płuc: Wytyczne praktyki klinicznej ESMO dotyczące diagnozy, leczenia i obserwacji. Ann Oncol; 29 Suppl 4: IV192-IV237. 2018.
2. Kalemkerian GP i in. Wytyczne dotyczące badań molekularnych dotyczące wyboru pacjentów z rakiem płuc do leczenia ukierunkowanymi inhibitorami kinazy tyrozynowej: American Society of Clinical Oncology poparcie College of American Patologists/International Association for Study of Płuca/Stowarzyszenie Patologii Molekularnej aktualizacji praktyki klinicznej. J Clin Oncol; 36 (9): 911-919. 2018.
3. Ettinger DS i in. Niezamałą komórkową rak płuc, wersja 3.2022, NCCN Clinical Practice Wytyczne w onkologii. J Natl Comppr Canc Netw; 20 (5): 497-530. 2022.
4. Torre M, i in. Dokładność diagnostyczna aspiracji igły transbronochialnej endobronchialnej igły transbronochialnej (EBUS-TBNA) do zaawansowania węzłów chłonnych raka płuc. Mediantum; 5:15. 2021.
5. JaliAALA HA, i in. Endobronchialna aspiracja igły przezbronienne pod kontrolą ultradźwiękową (EBUS-TBNA): aktualizacje techniczne i wydajność patologiczna. Diagnostyka (bazylea); 11 (12): 2331. 2021.
6. Turner Sr i in. Wykonalność endobronochialnej aspiracji igły transbrononowej do masowo równoległego sekwencjonowania nowej generacji u pacjentów z rakiem klatki piersiowej. Rak płuc; 119: 85-90. 2018.
7. Heitzer E i in. Zalecenia dotyczące praktycznego wdrożenia krążących testów mutacji DNA nowotworów w przerzutowych niedrobnokomórkowych raku płuc. ESMO Open; 7 (2): 100399. 2022.
8. Frank MS, i in. Zmiany molekularne, które można działać, ujawniają się u większości zaawansowanych niedrobnokomórkowych pacjentów z rakiem płuc przez profilowanie guza genomowego podczas progresji po leczeniu pierwszej linii. Nowotwory (bazylea); 14 (1): 132. 2021.
9. Bonanno L, i in. Biopsja płynna i bezzbyt mistrzowskie rak płuc: Czy patrzymy na wierzchołek góry lodowej? BR J Rak; doi: 10.1038/s41416-022-01777-8. Epub przed drukiem. 2022.
10. Durin L, i in. Płynna biopsja płynów ustrojowych bez Plasma w niedrobnokomórkowym raku płuc: przyjrzyj się bliżej guza! Komórki; 9 (11): 2486. 2020.
11. Werner B, i in. Przekraczające oporność krwi w zakresie alternatywnych biopsji płynnych w onkologii. Nowotwory (bazylea); 14 (5): 1309. 2022.
12. Baburaj G, i in. Podejście biopsji płynnej w celu wysięku opłucnowego u pacjentów z rakiem płuc. Mol Biol Rep; 47 (10): 8179-8187. 2020.
13. Janaki N, i in. Porównanie supernatantu cytocentrowania płynu i tkanki złożonej z parafiny z uniesionymi formaliną do ukierunkowanego sekwencjonowania nowej generacji. Cytopatol raka; 127 (5): 297-305. 2019.
14. Gokozan H, i in. Zastosowanie cytologii supernatantów wirowanych poprawia koszty i czas zwrotu dla ukierunkowanego sekwencjonowania nowej generacji. Cytopatol diagnostyczny; 48 (12): 1167-1172. 2020.
15. Hannigan B, i in. Test biopsji cieczy dla raka płuc przy użyciu supernatantów odśrodkowych z próbek aspiracji. Ann Oncol; 30 (6): 963-969. 2019.
16. Perdrizet K, i in. Integracja kompleksowego sekwencjonowania genomowego niezmysłowego raka płuc komórkowego z publicznym systemem opieki zdrowotnej. Cancer Treat Res Commun; 31: 100534. DOI: 10.1016/j.ctarc.2022.100534. 2022.
17. Kim Y, i in. Wykrywanie EGFR T790M oparte na egzosomie w osoczu i płynie opłucnowej prospektywnie włączonych pacjentów z rakiem płuc w komórce po leczeniu inhibitora kinazy tyrozynowej pierwszego rzutu. Komórka raka int; 21 (1): 50. 2021.