肥胖糖尿病女性急性食用坚果的影响研究 (REACT-NUT)

肥胖是一种多因素疾病，体内过多的脂肪积累会对健康产生负面影响。 它被认为是一个全球公共卫生问题，主要是因为它与罹患其他非传染性慢性疾病 (NCD) 的风险增加有关。 在巴西，估计有四分之一的人口肥胖，这使其成为病理性衰老的重要危险因素。

肥胖的主要原因是消耗和消耗的热量之间的能量不平衡，其高患病率与缺乏身体活动和久坐行为有关。 众所周知，由天然食品和最低限度加工食品组成的均衡饮食对于控制体重至关重要。 然而，在目前的情况下，超加工食品的消费量显着增加，天然和最低加工食品的摄入量减少，对肥胖的患病率产生了重大影响。

肥胖是 2 型糖尿病最相关的危险因素之一，这种疾病在世界范围内日益流行，被认为是 21 世纪的突发卫生事件之一。 糖尿病影响发病率和死亡率，是中风、肾功能障碍、心血管疾病、视力丧失和神经病变的主要危险因素。 控制糖尿病的非药物策略通常包括营养干预、定期体力活动、戒烟和维持健康体重。

即使在健康个体中，大量营养素的急性摄入也会引起不良反应，随着时间的推移，这可能会导致慢性影响。 在这种情况下，高饱和脂肪餐 (HSFM) 的摄入起着重要作用，因为众所周知，长期食用 HSFM 会导致肥胖、2 型糖尿病、癌症和心血管疾病的发生，并加剧胰岛素抵抗和体重过重引起的慢性炎症。 此外，研究表明 HSFM 还可以诱导代谢性内毒素血症并调节循环 microRNA 的分布。 MicroRNA 是长约 22 个核苷酸的非编码 RNA 分子，通过降解 mRNA 或抑制靶基因的翻译来调节转录后水平的基因表达。 因此，microRNA 可能会导致 HSFM 的不利影响。

鉴于 HSFM 对健康的不利影响，人们进行了研究，紧急补充具有抗炎和抗氧化特性的食物，如橙汁和绿茶，以尽量减少不健康饮食的负面影响。 我们研究小组进行的一项研究表明，急性补充绿茶可抑制 HSFM 摄入诱导的 62 种 microRNA 的表达。 生物信息学分析表明，这些 microRNA 调节与 TGF-β、CARM1、RSK 和 BMP 通路相关的基因。 识别这些 miRNA 及其分子途径可以增强人们对膳食化合物对健康和疾病益处的了解。

经常食用核桃（Juglans regia）与更好的心血管健康和胰岛素反应有关，这可能是由于通过降低碳水化合物消化酶的活性来调节胰岛素反应。 然而，关于核桃对炎症和抗氧化反应影响的文献仍然有限且尚无定论。 此外，调查核桃急性影响的研究数量有限，有一些证据表明有积极的反应。 在这方面，一些但并非所有研究都证明了餐后胰岛素抵抗的减弱、内皮功能的改善、氧化应激和饱腹感。 有趣的是，Torabian 等人。观察到，急性食用核桃会增加血浆多酚浓度，增强总抗氧化能力，并减少血浆脂质过氧化。

除了关于核桃急性影响的证据有限之外，核桃与 HSFM 结合对代谢组学和 microRNA 谱的影响还有待研究。 代谢组学最初被定义为生命系统对病理生理刺激或基因修饰的动态多参数代谢反应的定量测量。 因此，它直接反映了分子代谢水平上特定生物系统的表型，从而可以检测以前未知、未表征或很少报道的代谢物的变化。 因此，代谢组学可以产生有关核桃预防和治疗疾病机制的重要知识。 这同样适用于 microRNA 的研究，它可以帮助识别与食用核桃的有益作用相关的细胞内途径。

有鉴于此，这项研究将产生关于核桃在减轻 HSFM 不利影响方面的急性作用的新证据。 此外，减轻 HSFM 的不利影响可以产生显着的益处，特别是对于肥胖和糖尿病等胰岛素抵抗患者。

评估急性核桃补充剂 (Juglans regia) 是否可以减轻肥胖和糖尿病女性中由 HSFM 诱导的炎症标志物、氧化应激、代谢组学和循环 microRNA。

该项目已获得博图卡图医学院伦理委员会的批准。 该研究将是随机和交叉的，包括在博图卡图医学院门诊咨询期间招募的年龄超过 18 岁的肥胖症（体重指数 [BMI] ≥ 30）和非胰岛素依赖型糖尿病女性。 排除标准包括：使用膳食补充剂、过去 3 个月使用皮质类固醇、癌症、心力衰竭、肾病、肝病、肺病、神经系统疾病、对 HSFM 或核桃的任何成分过敏以及习惯性食用核桃过去一个月（每周≤3次）。

样本量是根据之前的一项研究估算的，该研究显示，与对照组（不含橙汁）相比，食用与橙汁相关的 HSFM 餐后，IL-6 水平降低了 60%。 考虑到这种减少、5% 的 1 类错误和 90% 的功效，这项研究将包括 15 个人。

签署知情同意书 (ICF) 的患者将在两个时间点接受评估，间隔至少一周的清除期。 在第一次会议中，禁食 10 小时后，将提供 HSFM，含或不含 30 克核桃。 在第二次中，条件将被交换。 这个核桃用量是指各种膳食指南提出的坚果每日食用量建议。 简单随机化将由未参与研究的护士进行。 医院门诊将提供HSFM，要求患者吃完正餐和所有核桃。 在研究方案期间，将建议患者在第一次研究访问前两周内避免食用核桃。

将在干预后时间点 0（饭前即刻）、15 分钟、30 分钟、60 分钟和 150 分钟采集血样。 将在 0 至 60 分钟的时间点测量血清胰岛素和葡萄糖，而将在 0 和 150 分钟的时间点测量炎症、氧化应激、循环 microRNA 和代谢组学的血清生物标志物。 此外，研究人员将在餐后的所有时间点使用视觉模拟量表（VAS）评估饱腹感。

代谢组学分析 分析将在 Thermo Dionex Ultimate 3000 系统上使用液相色谱法进行，该系统与高分辨率、精确质量 Thermo QExactive Plus 质谱仪相结合，并具有在正负分析模式下运行的电喷雾电离功能。

循环 MicroRNA 的分析 提取 RNA 后，研究人员将按照制造商的说明使用人类 miRNA 阵列 4.0 Affymetrix GeneChip® (ThermoFisher Scientific)。 该阵列包含 2,578 组针对成熟人类 miRNA 的探针和 2,025 组针对人类前 miRNA（茎环）的探针。 该阵列中还包含用于检测 snoRNA 和 scaRNA（总共 1,996 个）是否存在的探针。 GeneChips 将使用 Affymetrix GeneChip G3000 7G 扫描仪进行扫描，设置为捕获 miRNA 的信号强度。 原始强度数据将导入到 Affymetrix Expression Console (v1.4.1.46) 用于信号预处理，包括使用稳健的多阵列平均 (RMA) 算法进行背景校正、探针的中值抛光汇总以获得信号值以及跨多个阵列的分位数归一化。 将使用 Affymetrix“背景之上检测”(DABG) 算法执行对 miRNA 信号强度的检测，该算法为每个高于背景概率的信号生成 p 值。 此方法将遵循制造商推荐的方案。 分析将在莫纳什大学 Hudson Genomics 进行。

统计分析 正态分布时，数据将表示为平均值和标准差；非正态分布时，数据将表示为中位数和 25-75% 百分位数；或者表示为百分比。 为了比较两组（有坚果和没有坚果），研究人员将使用学生 t 检验来处理正态分布数据，使用 Mann-Whitney 检验来处理非正态分布数据，并使用卡方检验来进行分类变量比较。 此外，研究人员将应用广义估计方程（GEE）来评估重复测量。 数据分析将使用 JAMOVI v 2.3.21 进行，显着性水平设置为 5%。