Pesquisa sobre os efeitos do consumo agudo de nozes em mulheres diabéticas obesas (REACT-NUT)

A obesidade é uma doença multifatorial em que o acúmulo excessivo de gordura corporal leva a efeitos negativos à saúde. É considerada um problema de saúde pública global, principalmente devido à sua associação com um risco aumentado de desenvolvimento de outras doenças crônicas não transmissíveis (DCNT). No Brasil, estima-se que um quarto da população seja obesa, sendo um importante fator de risco para o envelhecimento patológico.

A principal causa da obesidade é o desequilíbrio energético entre calorias consumidas e gastas, e sua alta prevalência está associada à inatividade física e ao comportamento sedentário. Uma alimentação balanceada, composta por alimentos in natura e minimamente processados, é reconhecidamente essencial para o controle do peso. Porém, no cenário atual, houve um aumento significativo no consumo de alimentos ultraprocessados ​​e uma diminuição na ingestão de alimentos in natura e minimamente processados, resultando em grande impacto na prevalência da obesidade.

A obesidade é um dos fatores de risco mais relevantes para a diabetes tipo 2, doença cada vez mais prevalente em todo o mundo e considerada uma das emergências de saúde do século XXI. O diabetes tem impacto na morbimortalidade e é um importante fator de risco para acidente vascular cerebral, disfunção renal, doenças cardiovasculares, perda de visão e neuropatia. As estratégias não farmacológicas para controlar o diabetes geralmente incluem intervenção nutricional, atividade física regular, cessação do tabagismo e manutenção de um peso corporal saudável.

A ingestão aguda de macronutrientes pode induzir respostas adversas mesmo em indivíduos saudáveis, o que pode levar a efeitos crônicos ao longo do tempo. Neste contexto, a ingestão de uma refeição rica em gordura saturada (HSFM) desempenha um papel importante, uma vez que se sabe que o consumo crónico de uma HSFM contribui para o desenvolvimento da obesidade, diabetes tipo 2, cancro e doenças cardiovasculares, bem como exacerba inflamação crônica induzida por resistência à insulina e excesso de peso. Além disso, estudos mostram que o HSFM também pode induzir endotoxemia metabólica e modular perfis de microRNAs circulantes. MicroRNAs são moléculas de RNA não codificantes com cerca de 22 nucleotídeos de comprimento que regulam a expressão gênica no nível pós-transcricional, degradando o mRNA ou inibindo a tradução de genes alvo. Assim, os microRNAs podem contribuir para os efeitos adversos do HSFM.

Dados os impactos prejudiciais à saúde do HSFM, estudos têm sido realizados com suplementação aguda de alimentos com propriedades anti-inflamatórias e antioxidantes, como suco de laranja e chá verde, a fim de minimizar os efeitos negativos de dietas pouco saudáveis. Um estudo realizado pelo nosso grupo de pesquisa mostrou que a suplementação aguda de chá verde inibiu a expressão de 62 microRNAs induzida pela ingestão de HSFM. A análise de bioinformática revelou que esses microRNAs regulavam genes associados às vias TGF-beta, CARM1, RSK e BMP. A identificação desses miRNAs e suas vias moleculares pode melhorar a compreensão dos benefícios dos compostos dietéticos na saúde e na doença.

O consumo regular de nozes (Juglans regia) está associado a uma melhor saúde cardiovascular e à resposta à insulina, potencialmente devido à regulação da resposta à insulina, reduzindo a atividade das enzimas que digerem carboidratos. No entanto, a literatura sobre os efeitos das nozes nas respostas inflamatórias e antioxidantes permanece limitada e inconclusiva. Além disso, existe um número limitado de estudos que investigam os efeitos agudos das nozes, com algumas evidências de respostas positivas. A este respeito, a atenuação pós-prandial da resistência à insulina, a melhoria da função endotelial, o stress oxidativo e a saciedade foram demonstradas em alguns, mas não em todos os estudos. Curiosamente, Torabian et al. observaram que o consumo agudo de nozes aumentou as concentrações plasmáticas de polifenóis, aumentou a capacidade antioxidante total e reduziu a peroxidação lipídica plasmática.

Além das evidências limitadas sobre os efeitos agudos das nozes, seus efeitos em conjunto com o HSFM nos perfis metabolômicos e de microRNA ainda precisam ser estudados. A metabolômica foi inicialmente definida como a medição quantitativa da resposta metabólica multiparamétrica dinâmica dos sistemas vivos a estímulos fisiopatológicos ou modificação genética. Assim, reflete diretamente o fenótipo de um determinado sistema biológico no nível metabólico molecular, permitindo a detecção de alterações em metabólitos previamente desconhecidos, não caracterizados ou raramente relatados. Portanto, a metabolômica pode gerar conhecimentos importantes sobre os mecanismos das nozes na prevenção e tratamento de doenças. O mesmo se aplica ao estudo dos microRNAs, que podem auxiliar na identificação de vias intracelulares relacionadas aos efeitos benéficos do consumo de nozes.

À luz disso, este estudo irá gerar novas evidências sobre os efeitos agudos das nozes na mitigação dos efeitos adversos do HSFM. Além disso, a mitigação dos efeitos adversos do HSFM poderia trazer benefícios significativos, especialmente para pacientes com resistência à insulina, como os obesos e os diabéticos.

Avaliar se a suplementação aguda de nozes (Juglans regia) atenua marcadores inflamatórios, estresse oxidativo, metabolômica e microRNAs circulantes induzidos por HSFM em mulheres obesas e diabéticas.

O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética da Faculdade de Medicina de Botucatu. O estudo será randomizado e cruzado, incluindo mulheres com obesidade (índice de massa corporal [IMC] ≥ 30) e diabetes não insulinodependentes com idade superior a 18 anos, recrutadas durante consultas ambulatoriais na Faculdade de Medicina de Botucatu. Os critérios de exclusão incluirão: uso de suplementos dietéticos, uso de corticosteróides nos últimos 3 meses, câncer, insuficiência cardíaca, doença renal, doença hepática, doença pulmonar, doenças neurológicas, alergia a qualquer componente de HSFM ou nozes e consumo habitual de nozes. (≤3 vezes por semana) no último mês.

O tamanho da amostra foi estimado com base em estudo anterior que mostrou redução de 60% nos níveis de IL-6 após refeições com HSFM associado ao suco de laranja em comparação ao grupo controle (sem suco de laranja). Considerando essa redução, um erro tipo 1 de 5% e um poder de 90%, este estudo incluirá 15 indivíduos.

Os pacientes que assinarem o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE) serão avaliados em dois momentos, separados por um período mínimo de washout de uma semana. No primeiro encontro, após jejum de 10 horas, será oferecido HSFM com ou sem 30g de nozes. No segundo, a condição será trocada. Esta dosagem de nozes refere-se à recomendação de consumo diário de nozes proposta por diversas diretrizes dietéticas. A randomização simples será realizada por enfermeiro não envolvido na pesquisa. O HSFM será fornecido no ambulatório do hospital e os pacientes serão obrigados a consumir toda a refeição e todas as nozes. Durante o protocolo do estudo, os pacientes serão aconselhados a evitar o consumo de nozes por 2 semanas antes da primeira visita do estudo.

Amostras de sangue serão coletadas nos momentos 0 (imediatamente antes da refeição), 15 min, 30 min, 60 min e 150 min após as intervenções. A insulina e a glicose séricas serão medidas nos momentos 0 a 60 min, enquanto os biomarcadores séricos de inflamação, estresse oxidativo, microRNAs circulantes e metabolômica serão medidos nos momentos 0 e 150 min. Além disso, os investigadores avaliarão a saciedade usando uma escala visual analógica (VAS) em todos os momentos após a refeição.

Análise Metabolômica As análises serão conduzidas por cromatografia líquida em um sistema Thermo Dionex Ultimate 3000 acoplado a um espectrômetro de massa Thermo QExactive Plus de alta resolução e precisão com ionização por eletrospray operando nos modos de análise positiva e negativa.

Análise de MicroRNAs Circulantes Após a extração de RNAs, os investigadores utilizarão o array de miRNA humano 4.0 Affymetrix GeneChip® (ThermoFisher Scientific), seguindo as instruções do fabricante. Esta matriz contém 2.578 conjuntos de sondas para miRNAs humanos maduros e 2.025 conjuntos de sondas para pré-miRNAs humanos (stem-loop). Sondas para detectar a presença de snoRNA e scaRNA (um total de 1.996) também estão incluídas nesta matriz. Os GeneChips serão escaneados usando o scanner Affymetrix GeneChip G3000 7G, configurado para capturar intensidades de sinal para os miRNAs. Os dados brutos de intensidade serão importados para o Affymetrix Expression Console (v1.4.1.46) para pré-processamento de sinal, que inclui correção de fundo usando o algoritmo robusto de média de matrizes múltiplas (RMA), resumo de polimento mediano de sondas para obter valores de sinal e normalização de quantis em múltiplas matrizes. Uma chamada de detecção para a força do sinal de miRNA será realizada usando o algoritmo Affymetrix "Detection Above Background" (DABG), que gera um valor p para cada sinal acima da probabilidade de fundo. Este método seguirá o protocolo recomendado pelo fabricante. As análises serão realizadas na Monash em Hudson Genomics.

Análise Estatística Os dados serão apresentados como média e desvio padrão quando distribuídos normalmente, mediana e percentis 25-75% quando não distribuídos normalmente, ou como porcentagens. Para comparar os dois grupos (com e sem nozes), os investigadores usarão o teste t de Student para dados normalmente distribuídos, o teste de Mann-Whitney para dados distribuídos não normalmente e o teste Qui-quadrado para comparações de variáveis ​​​​categóricas. Além disso, os investigadores aplicarão equações de estimativa generalizada (GEE) para avaliar medidas repetidas. As análises dos dados serão realizadas no programa JAMOVI v 2.3.21, com nível de significância de 5%.