使用补充蛋白质改善植物性食品的合成代谢作用 (CompProtein)

1. 初步测试准备：参与者将在整夜禁食（约 10 小时不摄入热量食物/饮料）并在前 72 小时内避免运动后到达初步测试阶段。 在进行任何现场程序之前，将通过审查知情同意文件向参与者介绍与参与相关的程序和风险。 我们鼓励参与者提出问题并让他们的问题得到解答，然后再询问他们是否愿意继续。 确认将通过在知情同意流程表上签名进行记录。

   1.1 人体测量：在获得同意后，将测量参与者的身高和体重，以确认体重指数 (BMI) 在资格限制内 (18.5 - 30 kg/m^2)。 由于参与者已经接受了所有其他纳入和排除标准的评估，符合条件的 BMI 将导致研究纳入并继续进行初步测试。 确认研究资格后，研究团队中经过培训的成员将测量血压。 随后，将根据制造商的建议通过双能 X 射线吸收测定法 (DEXA) 确定身体成分。 简而言之，参与者将被要求移除身上的所有金属物体，然后由经过培训的技术人员进行定位，以准确测量去脂体重和脂肪量。 扫描持续大约 6-10 分钟，在此期间，参与者将被指示保持不动。

   1.2 静息代谢率：静息代谢率（RMR）将通过间接热量测定法进行评估。 这是一项非劳力测试，使用自动气体分析系统测量 RMR。 该设备测量氧气消耗量和二氧化碳生成量，作为吸入气体和呼出气体浓度之间的差异。 在测试开始之前，参与者将仰卧在桌子上，透明的硬塑料头罩和柔软的透明塑料布将放置在参与者的颈部、头部和肩部以捕获呼出的气体。 然后，参与者将一动不动地躺着，不会入睡，同时捕捉呼吸气体浓度。 当 RMR 稳定至少 20 分钟（通常从开始起约 30 分钟）时，测试将结束。

   1.3 十次最大重复（10RM）测试：在静息代谢率测试之后，参与者将进行腿部伸展和压腿的 10RM 测试。 首先，参与者将在标准自行车测力计上以自行选择的速度骑车约 5 分钟。 然后，参与者将以预计 10RM 的约 50% 完成一组 8-10 次重复，然后休息 1-2 分钟。 然后负载将设置为预测 10RM 的 ~90%。 负载将增加2.5-5.0% 每次成功尝试后直至失败（通常在 5 次尝试内）。 最大尝试次数之间休息两分钟，练习之间休息 5 分钟。 首先测试腿部伸展，然后进行腿部推举。 在离开实验室之前，参与者可以在结束会议之前提出任何问题。

   1.4 习惯饮食记录：当前的饮食摄入量将通过在线自动自我管理（ASA24）饮食记录系统进行评估。 参与者将收到他们的个人和私人用户名和密码。 他们将被要求记录连续 3 天（2 个工作日，1 个周末）。 由于它是一个在线系统，他们可以在闲暇时在场外完成。

   1.5 计划：在离开实验室之前，参与者和研究团队将确定第一次输注试验的日期（初步测试后至少 7 天）。 此外，研究小组将在第一次输注前一天晚上为参与者提供标准化膳食，并指导他们在第一次试验前的 72 和 24 小时内避免剧烈运动和饮酒。 参与者在离开实验室之前还将获得一份小吃。

2. 输液试验

2.1 准备：在初步测试或上次输注后至少7天，参与者将被要求返回实验室进行输注试验。 每次输注当天早上，参与者将在禁食过夜（约 10 小时不摄入热量食物/饮料）并分别在 72 小时和 24 小时内避免剧烈运动和饮酒后于第二天早上到达实验室。 每次试验前 3 天，参与者将被要求通过在线自动自我管理（24 小时）饮食记录系统 (ASA24) 记录他们的饮食摄入量。

2.2 稳定同位素输注：到达实验室后，参与者将仰卧在诊所式床上，然后将静脉导管插入手背或手臂静脉。 放置导管的尝试不会超过四次。 基线血液采样后，在使用校准的输液泵开始恒定输注（0.05 μmol/kg/min）之前，将施用 L-[ring-13C6]苯丙氨酸（2 μmol/kg）的启动剂量。 本实验采用的稳定同位素氨基酸示踪剂不具有放射性，完全安全。 这些稳定同位素将丰富体内的氨基酸库，使我们能够确定氨基酸掺入组织的速率。 用于静脉注射的示踪剂的制备将在专用于制备示踪剂的层流罩下的无菌环境中进行，并符合良好生产规范指南。

2.3 血液采集：开始输注后，将第二根静脉导管置于手或手臂静脉的对侧，以重复采血。 第一次输注时将采集血样 12 次，第二次输注时将采集 10 次。 在与活检时间一致的时间点（-150、-30 和 300 分钟），将收集约 16 mL（7 mL 血浆、7 mL 血清和约 2 mL 废物）。 在所有其他时间点（-210、-90、0、30、60、90、120、180 和 240 分钟）将收集约 9 mL（7 mL 血浆和约 2 mL 废物）。 因此，第一次输注和第二次输注期间收集的总体积将分别为约 129 mL 和约 104 mL。 使用连接到四通旋塞阀的 Leur-Lok 接入装置将血液收集到真空管中。 在抽取之间，将使用低速率（约 60 cc/小时）的盐水滴注来保持导管畅通。

2.4 肌肉采集：将采集总共五块肌肉活检组织（三块作为第一次输注的一部分，两块在第二次输注期间）。 活检程序涉及使用无菌空心针（Bergström 针）去除一小块肌肉组织，并将由 Nicholas Burd 博士在医学博士 Jared Willard 博士的主持下进行。 参与者将在床上休息，如果需要，活检区域将被剃毛。 随后，使用 4% 葡萄糖酸氯己定对该区域进行消毒，然后皮下注射 5 mL 局部麻醉剂（2% 赛洛卡因与 1:100,000 肾上腺素），特别小心以避免渗透肌肉。 一旦麻醉生效（约 10 分钟），Burd 医生将在皮肤上做一个小切口（约 4-5 毫米），以形成一个开口，通过该开口放置活检针以收集组织。 Burd 博士将快速切下一小块肌肉（约 50-100 毫克；大约是标准铅笔橡皮的大小），并将针从受试者的腿部取出。 在样本采集过程中（约 30 秒），受试者可能会感觉到腿部深处的压力。 将在参与者的大腿下放置无菌一次性手术巾，并在所有活检程序中使用无菌手套。

活检完成后，训练有素的研究团队成员将用无菌纱布施加压力，直至出血停止（至少 10 分钟）。 随后，将使用蝶形缝线（Steri-strips）缝合切口部位，然后使用绷带。 将在绷带顶部施加弹性压力包裹，以尽量减少瘀伤的机会。 然后，参与者将被指示将蝶形缝线和压力包裹物分别留在伤口上 96 小时和 24 小时。

将为参与者提供“活检护理套件”（第 10.1 节/活检护理套件中描述），以便在离开实验室后正确护理切口。 研究小组的一名成员将在试验后的第二天联系参与者，检查康复过程。

2.5 抵抗运动和膳食摄入：在第一次输注试验中的第二次活检结束后和在第二次试验中的第一次活检结束后，参与者将立即开始为急性抵抗运动进行热身。 首先，参与者将在标准自行车测力计上以自行选择的速度骑车 5 分钟。 随后，参与者将开始阻力练习。 参与者将以初步测试时测得的 10 次最大重复次数 (10RM) 的约 60% 完成热身组，然后以约 90% 10RM 的速度进行 4 组 10-12 次重复，组间休息 1-3 分钟，进行腿部伸展和腿部伸展运动。压腿。 参与者将在第二次试验中匹配第一次输注的负荷、组数和重复次数。

完成练习后，参与者将立即返回输液室用餐。 在第一次输注期间，参与者将被随机分配食用 246 克市售大米和黑豆（约 610 kcal；约 20 克蛋白质，约 127 克碳水化合物）或等热量和等氮的结晶氨基酸和麦芽糖糊精饮料。 在第二次试验中，参与者将被随机分配以消耗剩余的条件。

市售的大米和黑豆将分别煮熟并混合，然后在输液试验当天食用。 根据美国农业部防止食源性疾病的最低内部温度，餐食将被烹饪至至少 160°F 的内部温度。