Chemikálie narušující endokrinní systém: Možné účinky na mužské a ženské reprodukční zdraví v Saskatchewanu

Ukázka studie:

K účasti budou požádány páry podstupující in vitro fertilizaci (IVF) a/nebo intracytoplazmatickou injekci spermií (ICSI) pro asistovanou reprodukci v ARTUS, stejně jako zdraví dobrovolníci mužského a ženského pohlaví ve věku 18-43 let. Aby byli pacienti s neplodností způsobilí, musí s účastí souhlasit jak muž, tak partnerka. Páry s kombinací mužského a ženského faktoru neplodnosti se nebudou moci zúčastnit. Budou hodnoceny páry podstupující léčbu neplodnosti z následujících důvodů:

• nevysvětlitelná neplodnost (n=15 mužů, n=15 žen)
• PCOS (n=15 mužů, n=15 žen)
• Mužský faktor neplodnosti (n=15 mužů, n=15 žen)

Páry s mužským faktorem neplodnosti budou sloužit jako kontroly pro srovnání žen (tj. analýzy folikulární tekutiny) a páry s PCOS budou sloužit jako kontroly pro srovnání mužů (tj. analýzy semenné plazmy).

Další účastníci budou zařazeni do následujících kontrolních skupin (pro analýzy vzorků krve):

-Zdraví dobrovolníci bez anamnézy nebo současné diagnózy reprodukční dysfunkce (n=15 mužů, n=15 žen)

Nábor účastníků:

Neplodné páry se budou rekrutovat z klinických praxí Dr. Allison Case a Adrian Gamelin v Centru asistovaných reprodukčních technologií na University of Saskatchewan (ARTUS). Plakáty pro nábor pacientů ARTUS budou také umístěny v čekárně a vyšetřovnách na oddělení porodnice, divize REI. Zdraví dobrovolníci a dobrovolníci se budou rekrutovat z reklam na webových stránkách PAWS na University of Saskatchewan az newsletterů Health E-News v oblasti zdraví Saskatoon.

Návštěva před studiem:

Způsobilí účastníci budou požádáni, aby navštívili centrum ARTUS a domluvili se na schůzce před studiem. Při této schůzce budou s účastníky prodiskutovány studijní postupy a bude získán souhlas.

Studijní návštěvy:

Vzorky krve a folikulární tekutiny budou odebrány partnerkám neplodných párů. Vzorky krve a semenné plazmy budou odebrány od mužských partnerů neplodných párů. Vzorky krve budou odebrány pouze zdravým mužům a ženám. Všechny vzorky budou odebírány u plodných i neplodných párů v časovém intervalu 2 týdnů.

A. Neplodné páry:

Neplodné páry účastnící se této studie podstoupí léčbu neplodnosti podle běžného standardu péče. Jinými slovy, účast v této studii neovlivní léky na plodnost, ultrazvuková vyšetření, krevní obraz během léčby, odběr oocytů, odběr spermatu, laboratorní postupy a postupy přenosu embryí.

Muž i žena budou požádáni, aby poskytli 1 extra vzorek krve (přibližně 7 ml nebo 1 čajovou lžičku krve) na každé z následujících pravidelně naplánovaných schůzek:

1. První ultrazvuková návštěva (přibližně 1. den terapie FSH)
2. Den odběru vajíček
3. Den embryotransferu

Ženy běžně podstupují pravidelné odběry krve během léčby IVF; proto bude při pravidelných odběrech krve odebrána jedna zkumavka navíc pro výzkumné účely. Muži obvykle neposkytují vzorek krve během léčby IVF, ale v této studii o to budou požádáni. Odběry krve budou provádět flebotomové (personál specializující se na odběr krve) v Royal University Hospital, lékaři, zdravotní sestry a/nebo výzkumní pracovníci se školením v oblasti flebotomie. Vzorky krve budou zpracovány k odstranění buněk a sérum bude zmrazeno po dobu 12-24 měsíců až do dokončení studie.

Folikuly ve vaječnících ženy budou vypuštěny a vajíčka budou odebrána z folikulární tekutiny podle standardní péče. Po odběru vajíček je folikulární tekutina normálně vyhozena. V této studii budeme sbírat tekutinu z folikulů na každém vaječníku po odebrání vajíček. Folikulární tekutina bude zmražena po dobu 12-24 měsíců až do dokončení studie.

Muž poskytne vzorek spermatu v den odběru oocytů podle standardní péče. Vzorek spermatu je zpracován tak, že se sperma nechá projít kolonou, aby se oddělily nejvíce pohyblivé spermie (pohybující se velmi rychle) od méně pohyblivých a nepohyblivých spermií. Semenná plazma je tekutá část spermatu, která zůstane po získání nejpohyblivějších spermií. Po získání pohyblivých spermií se semenná plazma normálně vyhodí. V této studii odebereme semennou plazmu a zmrazíme ji po dobu 12–24 měsíců, dokud nebude studie dokončena.

B. Zdraví dobrovolníci:

Zdraví dobrovolníci budou požádáni, aby poskytli 1 vzorek krve (přibližně 7 ml nebo 1 čajovou lžičku krve) ve 3 oddělených dnech. Odběry krve budou provádět lékaři, sestry a/nebo výzkumní pracovníci s výcvikem ve flebotomii (tj. odběru krve). Termíny odběrů krve budou probíhat s odstupem přibližně 4-7 dnů.

Po dokončení studie budou všechny vzorky zmrazené krve, folikulární tekutiny a semenné plazmy přepraveny do Toxikologického centra na University of Saskatchewan. Hodnotí se úrovně expozice BPA a ftalátům. Vzorky budou po dokončení studie zničeny. Očekávaná délka účasti ve studii je přibližně 13-20 dní (v souladu se standardní léčbou plodnosti) u pacientek s neplodností a 3 dny u zdravých dobrovolníků. Všechny vzorky budou získány během 2 týdnů.

Statistická analýza

Zahrňte shrnutí primárních a sekundárních koncových bodů/výsledků, plánovanou velikost vzorku (s odůvodněním) a plánované statistické a průběžné analýzy.

Cílové body studie:

Expozice ftalátům bude určena kvantifikací koncentrací 5 různých ftalátů. Koncentrace bisfenolu A (BPA), di-2-ethylhexylftalátu (DEHP), di-n-oktylftalátu (DNOP), di-n-butylftalátu (DNBP), n-butylbenzylftalátu (BBP), diethylftalátu ( DEP), diisononyl ftalát (DINP) a diisodecyl ftalát (DIDP) budou kvantifikovány v krvinkách, krevní plazmě a folikulární tekutině (individuální i sdružené vzorky) pomocí metod kapalinové chromatografie a tandemové hmotnostní spektrometrie již vyvinutých v naší laboratoři. Analýzy budou prováděny pomocí systému vysoce výkonné kapalinové chromatografie (HPLC) řady Agilent 1200 propojeného s trojitým kvadrapólovým hmotnostním spektrometrem ABI SCIEX 3200 nebo kvadrapólovým hmotnostním spektrometrem doby letu QToF II (Micromass, Beverly MD). Koncentrace toxických látek budou závislými proměnnými. Nezávislou proměnnou bude reprodukční stav (tj. nevysvětlitelná neplodnost, PCOS, neplodnost mužského faktoru, kontroly). Koncentrace BPA a ftalátů v krvinkách, krevní plazmě, seminální plazmě a spojené folikulární tekutině budou porovnány mezi studijními skupinami pomocí vícerozměrné analýzy variance (ANOVA).

Pro provedení této pilotní studie je vhodné n=15 na skupinu.

Potenciální význam/opodstatnění:

Větší znalosti o možných účincích BPA a ftalátů na reprodukční funkce mohou zvýšit naše chápání příčin neplodnosti, pomoci při prevenci reprodukčních chorob a optimalizovat reprodukční zdraví, což zlepší péči o pacienty. Věříme, že výsledky naší studie, ať už pozitivní či negativní, zaujmou širokou veřejnost, zdravotníky i vědeckou komunitu.