内分泌かく乱化学物質：サスカチュワン州の男性と女性の生殖に関する健康への潜在的な影響

研究サンプル:

ARTUSで生殖補助医療のための体外受精（IVF）および/または細胞質内精子注入（ICSI）を受けるカップル、および18～43歳の健康な男性および女性のボランティアに参加が求められます。 不妊患者が資格を得るには、男性と女性のパートナーの両方が参加に同意する必要があります。 男性不妊症と女性不妊症の両方の要因を併せ持つカップルは参加できません。 以下の理由で不妊治療を受けているカップルが評価されます。

• 原因不明の不妊症 (n=15 男性、n=15 女性)
• PCOS (n=15 男性、n=15 女性)
• 男性要因による不妊症 (男性 n=15、女性 n=15)

男性因子不妊症のカップルは女性の比較（卵胞液分析）の対照として機能し、PCOS のカップルは男性の比較（精漿分析）の対照として機能します。

追加の参加者は、次の対照グループ (血液サンプル分析用) に割り当てられます。

-生殖機能障害の病歴や現在診断を受けていない健康なボランティア (男性 n=15、女性 n=15)

参加者募集：

不妊カップルは、医師の臨床現場から募集されます。 サスカチュワン大学生殖補助医療センター（ARTUS）のアリソン・ケースとエイドリアン・ガメリン。 REI部門産婦人科の待合室や診察室にもARTUS患者募集のポスターを掲示します。 健康な男女のボランティアは、サスカチュワン大学の PAWS ウェブサイト上の広告と、サスカトゥーン保健地域の Health E-News ニュースレターから募集されます。

研究前の訪問:

資格のある参加者は、研究前の予約のためにARTUSセンターを訪れるよう求められます。 この面談の際に、研究手順について参加者と話し合い、同意が得られます。

研究訪問:

血液および卵胞液サンプルは、不妊カップルの女性パートナーから採取されます。 血液および精漿サンプルは、不妊カップルの男性パートナーから採取されます。 血液サンプルは健康な男性と女性からのみ採取されます。 すべてのサンプルは、妊娠可能なカップルと不妊のカップルの両方から 2 週間の間隔で収集されます。

A. 不妊カップル:

この研究に参加する不妊カップルは、通常の標準治療に従って不妊治療を受けます。 言い換えれば、不妊治療薬、超音波検査、治療中の血液検査、採卵、精液採取、臨床検査手順、胚移植手順は、この研究に参加しても影響を受けません。

男性と女性のパートナーの両方は、以下の定期的な予約のたびに追加の血液サンプル (約 7 mL または小さじ 1 杯の血液) を提供するように求められます。

1. 最初の超音波検査（FSH 療法のおよそ 1 日目）
2. 採卵日
3. 胚移植当日

女性は通常、体外受精治療中に定期的に採血を受けます。したがって、定期的に予定されている採血予約の際に、研究目的で追加のチューブが 1 本採取されます。 通常、男性は体外受精治療中に血液サンプルを提供しませんが、この研究では血液サンプルを提供するように求められます。 採血は、王立大学病院の瀉血専門医（採血を専門とするスタッフ）、瀉血の訓練を受けた医師、看護師、研究者によって行われます。 血液サンプルは細胞を除去するために処理され、血清は研究が完了するまで 12 ～ 24 か月間凍結されます。

標準治療に従って、女性の卵巣内の卵胞が排出され、卵胞液から卵子が回収されます。 卵子を採取した後、卵胞液は通常廃棄されます。 この研究では、卵子を採取した後、各卵巣の卵胞から液体を採取します。 卵胞液は研究が完了するまで12～24か月間凍結されます。

標準治療に従って、採卵処置当日に男性から精液サンプルが提供されます。 精液サンプルは、精液をカラムに通過させて、最も運動性の高い（非常に速く運動する）精子を、運動性の低い精子と運動性のない精子から分離することによって処理されます。 精漿は、最も運動性の高い精子が得られた後に残る精液の液体部分です。 精漿は通常、運動精子が得られた後に廃棄されます。 この研究では、精漿を採取し、研究が完了するまで 12 ～ 24 か月間凍結します。

B. 健康なボランティア:

健康なボランティアは、3 日に分けて 1 つの血液サンプル (約 7 mL または小さじ 1 杯の血液) を提供するように求められます。 採血は、瀉血（採血）の訓練を受けた医師、看護師、研究者によって行われます。 採血の予約は約4～7日おきに行われます。

研究が完了すると、凍結した血液、卵胞液、精漿サンプルはすべてサスカチュワン大学の毒性センターに輸送されます。 BPA およびフタル酸エステル類への曝露レベルが評価されます。 サンプルは研究終了後に破棄されます。 研究参加の予想期間は、不妊症患者の場合は約 13 ～ 20 日（標準的な不妊治療に従って）、健康なボランティアの場合は 3 日間です。 すべてのサンプルは 2 週間かけて取得されます。

統計分析

一次および二次エンドポイント/結果、計画されたサンプルサイズ (根拠付き)、および計画された統計分析と中間分析の概要を含めます。

研究のエンドポイント:

フタル酸エステル類への曝露は、5 種類の異なるフタル酸エステル類の濃度を定量することによって決定されます。 ビスフェノール A (BPA)、フタル酸ジ-2-エチルヘキシル (DEHP)、フタル酸ジ-n-オクチル (DNOP)、フタル酸ジ-n-ブチル (DNBP)、フタル酸 n-ブチルベンジル (BBP)、フタル酸ジエチル ( DEP)、フタル酸ジイソノニル (DINP)、およびフタル酸ジイソデシル (DIDP) は、当社の研究室ですでに開発された液体クロマトグラフィーおよびタンデム質量分析法を使用して、血球、血漿、および卵胞液 (個々のサンプルおよびプールされたサンプル) に含まれて定量されます。 分析は、ABI SCIEX 3200 トリプル四重極質量分析計システムまたは QToF II 四重極飛行時間型質量分析計 (Micromass、メリーランド州ビバリー) に接続された Agilent 1200 シリーズ高速液体クロマトグラフィー (HPLC) システムを使用して行われます。 有毒物質の濃度が従属変数になります。 生殖状態 (つまり、原因不明の不妊、PCOS、男性因子不妊、対照) が独立変数になります。 血球、血漿、精漿およびプールされた卵胞液中の BPA およびフタル酸エステルの濃度は、多変量分散分析 (ANOVA) を使用して研究グループ間で比較されます。

このパイロット研究を実施するには、グループあたり n=15 が適切です。

潜在的な重要性/正当化:

BPA とフタル酸エステル類が生殖機能に及ぼす影響についての知識が深まれば、不妊症の原因への理解が深まり、生殖器疾患の予防と生殖に関する健康の最適化が促進され、それによって患者ケアが改善される可能性があります。 私たちは、肯定的であれ否定的であれ、私たちの研究結果は一般の人々、医療専門家、科学界にとって興味深いものになると信じています。