Påvisning af plasma-DNA af nyreoprindelse hos nyretransplanterede patienter (DART-REIN)

På det diagnostiske niveau er rutineovervågning af graftfunktionalitet efter nyretransplantation afhængig af brugen af ​​ikke-specifikke markører, såsom serumkreatinin (som tillader estimering af glomerulær filtrationshastighed eller GFR) og proteinuri. Definitiv diagnose af renal allograft dysfunktion kræver stadig invasiv allograft biopsi, som fortsat er guldstandarden for vurdering af graft status. Den histopatologiske diagnose af nyretransplantatdysfunktion er baseret på Banff-klassifikationen og gør det muligt at undersøge transplantatets immuninfiltrat og cellulære læsioner for at stille en præcis diagnose. Imidlertid har nyrebiopsi visse begrænsninger: 1/ Den er invasiv for patienten med tilhørende komplikationer, hovedsageligt hæmoragisk i 1 til 3,5 % af tilfældene; 2/ Dens effektivitet til at forudsige tidlig afstødning (3 måneder) efter transplantation er fortsat kontroversiel. Mangel på patientfordel er blevet bevist af flere undersøgelser til screening af biopsi; 3/ Histologisk analyse er genstand for intra- og inter-observatør variationer; og 4/ det er en dyr undersøgelse på grund af den medicinske tid, der kræves til at udføre og tolke biopsien.

Det "donorcellefrie DNA (dd-cfDNA)" er blevet foreslået som et diagnostisk værktøj til transplantatets tjeneste. Analyser baseret på molekylære signaturer på donorens cirkulerende DNA (Single Polymorphism Nucleotide (SNP)) har gjort det muligt at skelne det cirkulerende cellefrie DNA fra den transplanterede nyre (fra donoren) fra det cirkulerende cellefrie DNA specifikt for modtageren. Data fra flere undersøgelser tyder på, at blodets dd-cfDNA-niveauer kan detektere afstødning i hjerte-, lunge-, lever- og nyre-allotransplantater. Først studeret af multiplex qPCR og derefter NGS-teknologier, blev SNP'erne til stede på dd-cfDNA'et derefter kvantificeret ved digitale PCR-teknikker.

I denne undersøgelse foreslog efterforskere en anden tilgang til at forudsige og karakterisere nyretransplantationsafstødning/dysfunktion baseret på kvantificeringen af ​​epigenetiske signaturer til stede på det donorcellefrie DNA. I 2018, Moss et al. udvikler en dekonvolutionsmodel, der er i stand til at identificere vævsoprindelsen af ​​cirkulerende DNA ved at drage fordel af dets epigenetiske egenskaber. Undersøgelsen bekræftede, at det cellefrie DNA, der cirkulerer i raske forsøgspersoner, hovedsageligt kommer fra blodceller og endotelceller, men ikke fra nyreceller. I 2023, Loyfer et al. foreslået et methyleringsatlas med mere end 200 celletyper og foreslog, at hver celle har sin egen epigenetiske signatur, der kan studeres i cellefrit DNA.

I denne undersøgelse undersøger forskere udviklingen af ​​blodnyrespecifik cellefri DNA-mængde hos patienter med kronisk nyresygdom før og efter transplantationsoperationen ved at teste et sæt nyrespecifikke epigenetiske markører. Formålet med denne undersøgelse er at identificere den biologiske støj fra "native nyre" på nyrespecifikt cellefrit DNA og at sammenligne det med signal, der kommer fra "transplanteret nyre". Forskere antager, at den biologiske støj fra "native nyre" ved kroniske nyresygdomme er ubetydelig sammenlignet med støjen fra post-transplantationstransplantatet.

For at undersøge denne hypotese indsamler efterforskerne blodprøver før og efter transplantationskirurgi for at kvantificere nyrespecifikke cellefri DNA-markører. De foreslog også at kvantificere cellefrie DNA-markører for transplantatperfusionsvæske for at validere specificiteten af ​​nyremarkører og for at studere transplantatvævsskader under organtransport. Hver nyrecellefri DNA-prøve kvantificeres af en proprietær teknologi ved hjælp af en multipleks digital-PCR-analyse.