A vese eredetű plazma DNS kimutatása vesetranszplantált betegeknél (DART-REIN)

Diagnosztikai szinten a graft funkcionalitásának rutinszerű monitorozása veseátültetés után nem specifikus markerek, például szérum kreatinin (amely lehetővé teszi a glomeruláris filtrációs ráta vagy GFR becslését) és proteinuria alkalmazásán alapul. A vese allograft diszfunkció végleges diagnosztizálásához továbbra is invazív allograft biopszia szükséges, amely továbbra is az arany standard a graft állapotának felmérésében. A vese graft diszfunkciójának kórszövettani diagnózisa a Banff osztályozáson alapul, és lehetővé teszi a graft immuninfiltrátumának és sejtes elváltozásainak vizsgálatát a pontos diagnózis felállításához. A vesebiopsziának azonban vannak bizonyos korlátai: 1/ Invazív a beteg számára, társuló szövődményekkel, az esetek 1-3,5%-ában főleg vérzéses; 2/ Hatékonysága a transzplantáció utáni korai kilökődés előrejelzésében (3 hónap) továbbra is vitatott. A betegek számára nyújtott előnyök hiányát számos biopsziás szűrési vizsgálat igazolta; 3/ A szövettani elemzés megfigyelőn belüli és megfigyelőközi eltéréseknek van kitéve; és 4/ költséges vizsgálat a biopszia elvégzéséhez és értelmezéséhez szükséges orvosi idő miatt.

A „donorsejt-mentes DNS-t (dd-cfDNS)” javasolták diagnosztikai eszközként a graft szolgálatában. A donor keringő DNS-ének molekuláris aláírásain (Single Polymorphism Nucleotide (SNP)) alapuló elemzések lehetővé tették a transzplantált veséből (a donortól származó) keringő sejtmentes DNS megkülönböztetését a keringő sejtmentes DNS-től, amely specifikus a címzett. Számos tanulmányból származó adatok arra utalnak, hogy a vér dd-cfDNS szintje képes kimutatni a kilökődést szív-, tüdő-, máj- és vese allograftokban. Először multiplex qPCR-rel, majd NGS-technológiával tanulmányozták, majd a dd-cfDNS-en jelen lévő SNP-ket digitális PCR-technikákkal határozták meg.

Ebben a tanulmányban a kutatók egy másik megközelítést javasoltak a vesetranszplantátum kilökődés/diszfunkció előrejelzésére és jellemzésére a donorsejtektől mentes DNS-en jelenlévő epigenetikai aláírások számszerűsítése alapján. 2018-ban Moss et al. dekonvolúciós modellt fejleszt ki, amely epigenetikai tulajdonságait kihasználva képes azonosítani a keringő DNS szöveti eredetét. A tanulmány megerősítette, hogy az egészséges alanyokban keringő sejtmentes DNS főként vérsejtekből és endotélsejtekből származik, de nem vesesejtekből. 2023-ban Loyfer et al. több mint 200 sejttípusból álló metilációs atlaszt javasolt, és azt javasolta, hogy minden sejtnek megvan a maga epigenetikai aláírása, amely sejtmentes DNS-ben tanulmányozható.

Ebben a tanulmányban a kutatók a vérben a vesespecifikus sejtmentes DNS mennyiségének alakulását vizsgálják krónikus vesebetegségben szenvedő betegekben a transzplantációs műtét előtt és után, vese-specifikus epigenetikai markerek tesztelésével. Ennek a tanulmánynak az a célja, hogy azonosítsa a "natív vese" biológiai zaját a vese-specifikus sejtmentes DNS-en, és összehasonlítsa azt a "transzplantált veséből" származó jelekkel. A kutatók azt feltételezik, hogy a krónikus vesebetegségekben a "natív veséből" származó biológiai zaj elhanyagolható a transzplantáció utáni grafthoz képest.

Ennek a hipotézisnek a vizsgálatához a kutatók vérmintákat gyűjtenek a transzplantációs műtét előtt és után, hogy számszerűsítsék a vese-specifikus sejtmentes DNS-markereket. Javasolták továbbá a graft perfúziós folyadék sejtmentes DNS-markereinek számszerűsítését a vesemarkerek specifitásának validálására és a graft szövetkárosodásának vizsgálatára a szervszállítás során. Minden egyes vesesejt-mentes DNS-mintát szabadalmaztatott technológiával, multiplex digitális PCR vizsgálattal határoznak meg.