低栄養児のための長期保存可能な MDCF-2

調査場所: この調査は、国の首都ダッカの 21 の行政単位の 1 つであるミルプールのバオニアバードにあるアンダースラム コミュニティの住民の間で実施されます。 ミルプールが調査地として選ばれたのは、そこに貧困層や下層中流階級の家族が住んでおり、居住環境や衛生状態が混雑した都市集落の典型であるためです。 さらに、調査員はこの地域にいくつかのフィールド サイトを確立し、コミュニティで継続的な調査活動を行っています。

登録: 訓練を受けたフィールド リサーチ アシスタント (FRA) が研究について詳細に説明し、保護者からの質問に答え、子供を研究に登録するよう親に勧めます。 保護者が研究への参加に関心がある場合は、指定されたスタッフがスクリーニングと同意に進みます。 スクリーニングは、上記の包含および除外基準のレビューで構成されます。 被験者が参加する資格がある場合、プロセスは、子供の両親の識字レベルに適した方法で書面による同意書を徹底的にレビューすることからなる同意に進みます。 同意書に署名する前に、参加者の両親は研究について質問する機会があります。 参加者が研究を十分に理解していると FRA が判断した場合、FRA と子供の親が同意書に署名します。 両親が同意書を読んだり署名したりするのに十分な読み書きができない場合は、研究に関係のない証人の面前で同意と拇印が得られます。 お子様のご両親には、署名済みの同意書のコピーが提供されます。

子供たちは徹底的な臨床評価と臨床検査（必要な場合）を受け、器質的疾患やその他の二次的栄養不良の原因を除外します。 詳細な包含/除外基準は、以下に別途記載されています。

研究の開始時に、参加者の人口統計学的特徴（家族の収入、住宅の標準/タイプ、家族構成、親の教育など）に関する情報が収集されます。 FRA は、2 g 精度のデジタル スケール (Seca、モデル 728、ドイツ)、長さ (インファントメーター、Seca、モデル 416、ドイツ)、および中上腕周囲 (MUAC) を使用して子供の体重を記録することにより、人体測定データを収集します。最も近いミリメートル (非伸縮性テープを使用)。 人体測定データの収集は、その後、研究全体を通して毎週行われます。

研究デザイン: 研究は 8 週間の期間で、5 群で構成され、研究を完了するには 1 群あたり最低 23 人の子供が必要です。 子供たちは、コンピューターで生成されたランダム化スキームを使用して、5 つのアームのいずれかにランダムに割り当てられます。 ジェンダーに関して武器のバランスをとる努力がなされるでしょう。 母親/主介護者は、研究を通じて子供の現在の食事と母乳育児の慣行を維持するようにアドバイスされます。 毎週の糞便サンプルの収集と採血による2週間の「慣らし」段階の後、治療が開始されます。 治療段階は4週間で、その間、各試験製品はテストセンターで1日2回、少なくとも6時間間隔で投与されます。 実際に摂取された各サービングの量は、提供された量から残りの量を差し引いて計算されます。 事前に計量されたナプキンが提供されます。逆流、嘔吐、またはこぼれた食べ物は綿棒で拭き取り、重量を量り、提供された量から差し引かれます。 糞便サンプルは、迅速な凍結保存のために確立された SOP を使用して毎週収集されます。 2回目の採血は、4週間の介入期間の終わりに行われます。 2週間の介入後フェーズがあり、その間に2つの追加の糞便サンプルが収集され（7および8週の終わりに）、治療の中止後に発生する微生物叢の変化を評価します。

子供は、副作用/有害事象（例： 発疹、食物アレルギーによる蕁麻疹、または臨床状態の重大な変化)。 有害事象が観察された場合、子供たちはダッカ病院で適切な管理慣行を使用して治療されます。

糞便サンプルの収集：糞便サンプルは、治療前の2週間、治療の4週間、および治療中止後の2週間を含む8週間の研究の過程で、各研究参加者から毎週収集されます（11サンプル/ 子供）。 糞便サンプルは、既存の SOP を使用した培養に依存しない微生物組成の分析、および増殖を促進する細菌分類群を特徴付けるためのその後の培養ベースのイニシアチブに使用されます (Raman et al., Science 2019, 365, eaau 4735; Gehrig et al., Science 2019; 365、eaau4732)。

血液サンプルの採取: 治療を開始する直前、および 4 週間の治療期間が完了した直後に、各子供から 5 mL の血液が採取されます。 血漿を直ちに調製し、プロテオミクス分析の前に-80C で凍結します (Gehrig et al., Science 2019, 365, eaau4732; Chen et al., N Engl J Med 2021; 384:1517-1528)。 さらに、さまざまな血液バイオマーカー（食欲と満腹感のホルモン調節因子、微量栄養素の状態、全身性炎症）の状態も、介入の前後に収集されたサンプルを使用して評価されます

サンプルサイズの推定値: 推定値は、(「参照」) キッチンで準備された食品で治療された中等度の急性栄養失調 (MAM) の 12 ～ 18 か月のバングラデシュの子供を対象とした最近の POC 研究で生成された糞便 16S rDNA データセットによって通知されます。 MDCF-2製剤。 この製剤は、これらの子供たちの微生物叢を修復し、対照のすぐに使用できる補助食品によって生成されたものよりも優れた体重増加率の改善をもたらしました（RUSF; Chen et al。、2021）. この POC 研究では、研究者は 118 人の参加者から分析された 939 の糞便サンプルの少なくとも 5% に 5 カウントを超えて存在する 209 の細菌分類群 (Amplicon Sequence Variants; ASV) を特定しました (Chen et al., 2021)。

研究者らは、0 日目 (介入前) から 4 週間の介入までの 209 の細菌分類群 ASV の存在量の変化 (デルタ) について、95% 信頼区間 (CI; 平均 ± 1.96 標準誤差) を計算しました。 POC研究のMDCF-2グループで治療を完了しました。 研究者らは、MDCF-2 グループの 5,000 サブセットの子供と RUSF グループの 5,000 サブセットの子供からの ASV データを使用してブートストラップ アプローチを使用し、存在量の平均変化が平均変化の 95% CI 内に収まる 121 の ASV を特定しました。 MDCF-2 参加者、ただし RUSF を受けた子供ではなく、グループあたり 20 人の子供のサブセット (サンプル) サイズを使用して 80% の電力 (「MDCF-2 応答 ASV」)。 したがって、腕ごとに最低20人の子供がこのPOC前の研究を完了することを目指します. ドロップアウトの可能性 (15%) を考慮すると、1 アームあたり最低 23 人の子供が採用されます。

分析計画: MDCF-2 の代替/保存安定性試験製剤と、Chen et al (2021) で説明されている参照用キッチン調製製剤によって誘発される微生物叢修復の比較可能性を評価するために、研究者は細菌 16S rDNA 遺伝子から生成された PCR アンプリコンをシーケンスします介入直前（0日目）および介入終了時（28日目）に、さまざまな研究群の参加者から収集された糞便サンプルから分離されたDNAに存在します。 ASV データは、DADA2 (Callahan et al., 2016) を使用して処理され、Chen et al. で説明されているようにフィルター処理されます。 （2021）。 上記の POC 研究に使用されたのと同じアプローチを使用して、研究者は、この研究で特定された MDCF-2 応答性 ASV のそれぞれの存在量の平均変化の 95% 信頼区間を計算します。は、参照 MDCF-2 製剤を受け取ったほか、試験製剤を受け取った参加者のこれらの ASV のそれぞれの平均変化を受け取りました。

この研究で特定された MDCF-2 応答性 ASV の 70% を超える場合、試験製剤の存在量の平均変化 (0 日目から 28 日目) がある場合、試験製剤は、参照キッチンで調製された MDCF-2 と有効性が同等であると見なされます。同じ期間にわたる参照 MDCF-2 アームの量の平均変化の 95% CI 内に収まります。 参照MDCF-2および試験製剤によって誘発された微生物群集修復の分析の別の実施形態は、同じもののショットガン配列決定によって同定されたメタゲノム集合ゲノム(MAG)の存在量に対する4週間の治療後のそれらのそれぞれの効果の比較を含む。 16S rDNA アンプリコンを生成するために使用される糞便 DNA サンプル。

探索的結果には、Chen et al. で説明されているアプローチを使用して、健康な成長、CNS の発達、および免疫機能のさまざまな側面に関連する MDCF-2 応答タンパク質を含む、血漿および糞便のプロテオームの特徴に対する試験製剤の効果が含まれます。 、2021年。