Skladovatelný MDCF-2 pro děti s podvýživou

Místo studie: Studie bude provedena mezi obyvateli chudinské komunity v Baoniabad of Mirpur, jedné z 21 administrativních jednotek hlavního města země, Dháky. Mirpur je vybrán jako studijní místo, protože je obýván chudými rodinami a rodinami nižší střední třídy, obytné a hygienické podmínky jsou typické pro každé přetížené městské osídlení. Kromě toho vyšetřovatelé založili několik terénních lokalit v oblasti a pokračují výzkumné aktivity v komunitě.

Zápis: Vyškolený asistent pro terénní výzkum (FRA) podrobně vysvětlí studii, zodpoví případné dotazy rodičů a vyzve rodiče, aby dítě do studie zapsali. Pokud má rodič (rodiče) zájem zúčastnit se studie jako dobrovolník, určený personál přistoupí ke screeningu a dá souhlas. Screening bude sestávat z přezkoumání výše uvedených kritérií pro zařazení a vyloučení. Pokud je subjekt způsobilý k účasti, proces postoupí k udělení souhlasu, který spočívá v důkladném přezkoumání formuláře písemného souhlasu způsobem vhodným pro úroveň gramotnosti rodičů dítěte. Před podpisem formuláře souhlasu budou mít rodiče účastníků možnost položit jakékoli dotazy týkající se studie. Pokud FRA rozhodne, že účastníci prokázali dostatečné porozumění studii, formulář souhlasu podepíše FRA a rodič (rodiče) dítěte. Pokud rodič (rodiče) nejsou dostatečně gramotní, aby si mohli přečíst a/nebo podepsat formulář souhlasu, souhlas a podpis otiskem palce bude získán za přítomnosti svědka, který není spojen se studií. Rodič (rodiče) dítěte obdrží kopii podepsaného souhlasu.

Děti podstoupí důkladné klinické vyšetření a laboratorní testy (v případě potřeby), aby se vyloučila jakákoli organická onemocnění nebo jakékoli jiné příčiny sekundární podvýživy. Podrobná kritéria pro zařazení/vyloučení jsou uvedena samostatně níže.

Na začátku studie budou shromážděny informace o demografických charakteristikách účastníků (příjem rodiny, standard/typ bydlení, struktura rodiny, vzdělání rodičů atd.). FRA budou shromažďovat antropometrická data zaznamenáváním hmotnosti dítěte pomocí digitální váhy s přesností na 2 g (Seca, model 728, Německo), délky (pomocí infantometru, Seca, model 416, Německo) a obvodu střední části paže (MUAC). nejbližší milimetr (pomocí nepružné pásky). Sběr antropometrických dat bude následně probíhat v týdenních intervalech v průběhu studie.

Návrh studie: Studie bude trvat 8 týdnů a bude zahrnovat 5 ramen, přičemž k dokončení studie je potřeba minimálně 23 dětí na rameno. Děti budou náhodně rozděleny do jednoho z pěti ramen pomocí počítačem generovaného randomizačního schématu. Bude vyvinuto úsilí o vyvážení paží s ohledem na pohlaví. Matkám/primárním pečovatelům bude doporučeno, aby během studie zachovaly stávající dietní a kojicí postupy svého dítěte. Po 2týdenní „záběhové“ fázi s týdenním odběrem vzorku stolice a odběrem krve bude zahájena léčba. Léčebná fáze bude trvat 4 týdny, přičemž během této doby bude každý testovaný produkt podáván v testovacím centru dvakrát denně s odstupem nejméně 6 hodin. Množství každé skutečně požité porce bude vypočítáno odečtením zbývajícího množství od nabízeného množství. Budou poskytnuty předem zvážené ubrousky; jakékoli jídlo, které je vyvráceno, vyzvraceno nebo rozlité, bude otřeno, zváženo a odečteno od nabízeného množství. Vzorky stolice budou odebírány týdně za použití zavedených SOP pro rychlou kryokonzervaci. Druhý odběr krve bude proveden na konci 4týdenní intervenční periody. Bude následovat 2 týdny po intervenci, během níž budou odebrány 2 další vzorky stolice (na konci 7. a 8. týdne) k posouzení změn v mikrobiotě, ke kterým dojde po ukončení léčby.

Děti budou denně sledovány vyškolenými FRA s ohledem na jakékoli vedlejší účinky/nežádoucí účinky (např. vyrážka, kopřivka v důsledku potravinové alergie nebo jakékoli významné změny klinického stavu). Pokud budou pozorovány jakékoli nežádoucí účinky, budou děti léčeny pomocí vhodných postupů řízení v nemocnici Dhaka.

Odběr vzorků stolice: Vzorky stolice budou odebírány každý týden od každého účastníka studie v průběhu 8týdenní studie, včetně během 2 týdnů před léčbou, čtyř týdnů léčby a dvou týdnů po ukončení léčby (11 vzorků / dítě). Vzorky stolice budou použity pro analýzu mikrobiálního složení nezávislou na kultuře pomocí stávajících SOP a pro následné iniciativy založené na kultuře k charakterizaci bakteriálních taxonů podporujících růst (Raman et al., Science 2019, 365, eaau 4735; Gehrig et al., Science 2019; 365, eaau4732).

Odběr krve: Každému dítěti bude odebráno 5 ml krve bezprostředně před zahájením léčby a těsně po ukončení 4týdenního období léčby. Plazma bude připravena okamžitě a zmražena při -80 °C před proteomickou analýzou, jak bylo popsáno dříve (Gehrig a kol., Science 2019, 365, eaau4732; Chen a kol., N Engl J Med 2021; 384:1517-1528). Kromě toho bude také hodnocen stav různých krevních biomarkerů (hormonální regulátory chuti k jídlu a sytosti, stav mikroživin a systémový zánět) pomocí vzorků odebraných před a po intervenci.

Odhad velikosti vzorku: Odhad vychází z datových souborů fekálních 16S rDNA vytvořených v nedávné studii POC u 12 až 18měsíčních bangladéšských dětí se středně těžkou akutní podvýživou (MAM), které byly léčeny ("referenční") v kuchyni. Formulace MDCF-2. Tato formulace opravila mikroflóru těchto dětí a přinesla zlepšení v rychlosti hloubkového růstu, které bylo lepší než u kontrolního doplňkového krmiva Ready-to-use (RUSF; Chen et al., 2021). V této studii POC vyšetřovatelé identifikovali 209 bakteriálních taxonů (Amplikonové sekvenční varianty; ASV), které byly přítomny nad 5 počty v alespoň 5 % z 939 vzorků stolice analyzovaných od 118 účastníků (Chen et al., 2021).

Vyšetřovatelé vypočítali 95% intervaly spolehlivosti (CI; průměr ± 1,96 standardní chyby) pro změnu (delta) v množství každého z 209 bakteriálních taxonů ASV mezi dnem 0 (před intervencí) a 4 týdny intervence pro 59 dětí, které dokončili léčbu ve skupině MDCF-2 studie POC. Výzkumníci použili bootstrappingový přístup s daty ASV od 5 000 podskupin dětí ze skupiny MDCF-2 a 5 000 podskupin dětí ze skupiny RUSF a identifikovali 121 ASV, jejichž průměrné změny v abundanci spadaly do 95% CI průměrných změn pro Účastníci MDCF-2, ale ne u dětí, které dostaly RUSF, s 80% silou při použití podmnožiny (vzorku) velikosti 20 dětí na skupinu („MDCF-2-responzivní ASV“). Proto se budeme snažit, aby tuto studii před POC dokončilo minimálně 20 dětí na rameno. Vezmeme-li v úvahu potenciální předčasné ukončení studia (15 %), bude přijato minimálně 23 dětí na rameno.

Plán analýzy: Aby bylo možné posoudit srovnatelnost opravy mikrobioty vyvolané alternativními/stabilními testovacími formulacemi MDCF-2 a referenční formulací připravenou v kuchyni popsanou v Chen et al (2021), sekvenují výzkumníci PCR amplikony generované z bakteriálních genů 16S rDNA. přítomné v DNA izolované ze vzorků stolice odebraných od účastníků v různých ramenech studie bezprostředně před intervencí (den 0) a na konci intervence (den 28). Data ASV budou zpracována pomocí DADA2 (Callahan et al., 2016) a filtrována, jak je popsáno v Chen et al. (2021). Za použití stejného přístupu použitého pro POC studii výše, výzkumníci vypočítají 95% intervaly spolehlivosti průměrné změny v četnosti každého z MDCF-2-responzivních ASV identifikovaných v této studii, mezi dnem 0 a dnem 28, u dětí, které obdrželi referenční přípravek MDCF-2, stejně jako průměrnou změnu pro každý z těchto ASV u účastníků, kteří dostávali testované přípravky.

Testovaná formulace bude považována za srovnatelnou v účinnosti s referenčním v kuchyni připraveným MDCF-2, pokud >70 % ASV reagujících na MDCF-2 identifikovaných v této studii má průměrné změny v četnosti (den 0 až den 28) pro testovanou formulaci které spadají do 95% CI jejich průměrných změn v abundanci v referenčním rameni MDCF-2 za stejné časové období. Další provedení analýzy opravy mikrobiální komunity vyvolané referenčním MDCF-2 a testovacími formulacemi bude zahrnovat srovnání jejich příslušných účinků po 4 týdnech léčby na množství genomů sestavených v metagenomech (MAG) identifikovaných sekvenováním pomocí brokovnice téhož. vzorky fekální DNA používané k výrobě amplikonů 16S rDNA.

Výsledky průzkumu budou zahrnovat účinky testovaných formulací na vlastnosti plazmových a fekálních proteomů, včetně proteinů reagujících na MDCF-2, které jsou spojeny s různými aspekty zdravého růstu, vývoje CNS a imunitních funkcí, za použití přístupů popsaných v Chen et al. , 2021.