用于营养不良儿童的货架稳定 MDCF-2

研究地点：该研究将在米尔布尔的鲍尼亚巴德贫民窟社区的居民中进行，米尔布尔是该国首都达卡的 21 个行政单位之一。 米尔布尔被选为研究地点，因为它居住着贫困和中下阶层家庭，居住和卫生条件是任何拥挤的城市住区的典型特征。 此外，调查人员还在该地区建立了多个实地考察点，并在社区中开展持续的研究活动。

登记：经过培训的实地研究助理 (FRA) 将详细解释研究，回答家长提出的任何问题，并邀请家长为孩子登记参加研究。 如果家长有兴趣自愿参与研究，指定的工作人员将进行筛选和同意。 筛选将包括对上面列出的纳入和排除标准的审查。 如果受试者有资格参加，该过程将继续进行，包括以适合儿童父母识字水平的方式彻底审查书面同意书。 在签署同意书之前，参与者的父母将有机会询问有关研究的任何问题。 如果 FRA 确定参与者已证明对研究有足够的理解，则同意书将由 FRA 和孩子的父母签署。 如果父母的文化程度不足以阅读和/或签署同意书，则将在与研究无关的证人在场的情况下获得同意和指纹签名。 将向孩子的父母提供一份已签署的同意书副本。

儿童将接受全面的临床评估和实验室检查（如果需要），以排除任何器质性疾病或任何其他继发性营养不良的原因。 下面单独提供详细的纳入/排除标准。

在研究开始时，将收集有关参与者人口统计特征的信息（家庭收入、住房标准/类型、家庭结构、父母教育等）。 FRA 将通过使用精度为 2 g 的数字秤（Seca，728 型，德国）、长度（使用婴儿计，Seca，416 型，德国）和中上臂周长 (MUAC) 记录儿童的体重来收集人体测量数据，以最接近的毫米（使用非拉伸胶带）。 随后在整个研究过程中每周收集一次人体测量数据。

研究设计：该研究将持续 8 周，包括 5 个组，每个组至少需要 23 名儿童才能完成研究。 使用计算机生成的随机化方案，儿童将被随机分配到五个臂中的一个。 将努力在性别方面平衡武器。 建议母亲/主要照顾者在整个研究过程中保持孩子目前的饮食和母乳喂养习惯。 在每周收集粪便样本和抽血的 2 周“磨合”阶段后，将开始治疗。 治疗阶段将持续 4 周，在此期间，每种测试产品将在测试中心每天两次给药，间隔至少 6 小时。 实际摄取的每份量将通过从提供量中减去剩余量来计算。 将提供预先称重的餐巾纸；任何反刍、呕吐或溢出的食物都将被擦拭、称重并从提供的数量中扣除。 将使用既定的 SOP 每周收集粪便样本以进行快速冷冻保存。 第二次抽血将在 4 周干预期结束时进行。 将有一个 2 周的干预后阶段，在此期间将收集 2 个额外的粪便样本（在第 7 周和第 8 周结束时）以评估停止治疗后发生的微生物群变化。

训练有素的 FRA 将每天监测儿童是否有任何副作用/不良事件（例如 食物过敏引起的皮疹、荨麻疹或临床状态的任何显着变化）。 如果观察到任何不良事件，儿童将在达卡医院采用适当的管理措施进行治疗。

粪便样本采集：在为期 8 周的研究过程中，包括治疗前 2 周、治疗后 4 周和治疗停止后两周（11 个样本），每周从每位研究参与者处收集粪便样本/ 孩子）。 粪便样本将用于使用现有 SOP 对微生物组成进行独立于培养的分析，并用于随后基于培养的举措来表征促进生长的细菌类群（Raman 等人，Science 2019, 365, eaau 4735；Gehrig 等人，Science 2019 年；365，eaau4732）。

血样采集：在开始治疗之前和 4 周的治疗结束之后，将从每个孩子身上采集 5 mL 的血液。 如前所述（Gehrig 等人，Science 2019，365，eaau4732；Chen 等人，N Engl J Med 2021；384：1517-1528），在进行蛋白质组学分析之前，将立即制备血浆并冷冻在 -80C 下。 此外，还将使用干预前后收集的样本评估不同血液生物标志物（食欲和饱腹感的激素调节剂、微量营养素状态和全身炎症）的状态

样本量估计：该估计是根据最近一项 POC 研究生成的粪便 16S rDNA 数据集得出的，这些研究对象是 12 至 18 个月大的孟加拉国患有中度急性营养不良 (MAM) 的儿童，这些儿童接受了（“参考”）厨房准备的食物治疗MDCF-2 配方。 这种配方修复了这些儿童的微生物群，并提高了体重的增长速度，优于对照的即用型补充食品（RUSF；Chen 等人，2021 年）。 在这项 POC 研究中，研究人员确定了 209 个细菌类群（扩增子序列变异体；ASV），在 118 名参与者分析的 939 份粪便样本中，至少有 5% 的计数高于 5（Chen 等人，2021 年）。

研究人员计算了 59 名儿童在第 0 天（干预前）和干预 4 周之间 209 个细菌类群 ASV 中每一个的丰度变化（增量）的 95% 置信区间（CI；平均值 ± 1.96 标准误差）在 POC 研究的 MDCF-2 组中完成治疗。 研究人员对来自 MDCF-2 组的 5000 个儿童子集和 RUSF 组的 5000 个儿童子集的 ASV 数据使用了一种自举方法，并确定了 121 个 ASV，其丰度的平均变化落在平均变化的 95% CI 范围内MDCF-2 参与者，但不是接受 RUSF 的儿童，使用每组 20 名儿童的子集（样本）大小为 80%（“MDCF-2 响应 ASV”）。 因此，我们的目标是每只手臂至少有 20 名儿童完成这项 POC 前研究。 考虑到潜在的辍学率 (15%)，每组至少招募 23 名儿童。

分析计划：为了评估由 MDCF-2 的替代/耐贮存测试制剂和 Chen 等人（2021 年）中描述的参考厨房制备制剂引起的微生物群修复的可比性，研究人员对从细菌 16S rDNA 基因产生的 PCR 扩增子进行了测序存在于干预前（第 0 天）和干预结束时（第 28 天）从不同研究组的参与者收集的粪便样本中分离出的 DNA。 ASV 数据将使用 DADA2（Callahan 等人，2016 年）进行处理，并按照 Chen 等人所述进行过滤。 (2021)。 使用与上述 POC 研究相同的方法，研究人员将计算本研究中确定的每个 MDCF-2 响应 ASV 丰度平均变化的 95% 置信区间，在第 0 天和第 28 天之间，儿童收到参考 MDCF-2 配方，以及接受测试配方的参与者中每个 ASV 的平均变化。

如果本研究中鉴定的 MDCF-2 响应 ASVs 中 >70% 的测试配方的丰度（第 0 天到第 28 天）具有平均变化，则测试配方将被视为与参考厨房制备的 MDCF-2 具有可比性落在同一时间段内参考 MDCF-2 臂中丰度平均变化的 95% CI 范围内。 由参考 MDCF-2 和测试制剂引发的微生物群落修复分析的另一个实施例将涉及比较它们在处理 4 周后对宏基因组组装基因组 (MAG) 丰度的影响，这些基因组通过相同的鸟枪法测序鉴定用于生产 16S rDNA 扩增子的粪便 DNA 样本。

探索性结果将包括测试配方对血浆和粪便蛋白质组特征的影响，包括与健康成长、中枢神经系统发育和免疫功能的各个方面相关的 MDCF-2 反应蛋白，使用 Chen 等人描述的方法。 , 2021.