영양결핍 아동을 위한 상온 보관 MDCF-2

연구 장소: 이 연구는 국가 수도인 Dhaka의 21개 행정 단위 중 하나인 Mirpur의 Baoniabad에 있는 빈민가 아래 커뮤니티 주민들을 대상으로 수행됩니다. Mirpur는 빈곤층과 중산층 가정이 거주하고 주거 및 위생 조건이 혼잡한 도시 정착지의 전형이기 때문에 연구 장소로 선택되었습니다. 또한 조사관은 해당 지역에 여러 현장 사이트를 설립했으며 지역 사회에서 지속적인 연구 활동을 하고 있습니다.

등록: 훈련된 현장 연구 조교(FRA)가 연구에 대해 자세히 설명하고, 부모의 질문에 답하고, 부모가 연구에 자녀를 등록하도록 초대합니다. 학부모(들)가 연구에 자원하는 데 관심이 있는 경우 지정된 직원이 선별 및 동의를 진행할 것입니다. 선별은 위에 나열된 포함 및 제외 기준에 대한 검토로 구성됩니다. 대상자가 참여 자격이 있는 경우, 아동의 부모의 문해력 수준에 적합한 방식으로 서면 동의서를 면밀히 검토하는 동의 절차가 진행됩니다. 동의서에 서명하기 전에 참가자의 부모는 연구에 대해 질문할 기회를 갖게 됩니다. FRA가 참가자가 연구에 대한 적절한 이해를 입증했다고 판단하면 FRA와 아동의 부모가 동의서에 서명합니다. 부모(들)가 동의서를 읽고/하거나 서명할 만큼 글을 읽을 줄 모르는 경우, 연구와 관련이 없는 증인의 입회 하에 동의 및 지문 서명을 받습니다. 자녀의 부모(들)에게는 서명된 동의서 사본이 제공됩니다.

아동은 모든 기질적 질병 또는 2차 영양실조의 다른 원인을 배제하기 위해 철저한 임상 평가 및 실험실 검사(필요한 경우)를 받게 됩니다. 자세한 포함/제외 기준은 아래에 별도로 제공됩니다.

연구가 시작될 때 참가자의 인구통계학적 특성(가족 소득, 주택 표준/유형, 가족 구조, 부모 교육 등)에 대한 정보가 수집됩니다. FRA는 2g 정밀도(Seca, 모델 728, 독일), 길이(유아계 사용, Seca, 모델 416, 독일) 및 중간 상완 둘레(MUAC)를 사용하여 아동의 체중을 기록하여 인체 측정 데이터를 수집합니다. 가장 가까운 밀리미터(비신축 테이프 사용). 인체 측정 데이터의 수집은 이후 연구 전반에 걸쳐 매주 간격으로 발생합니다.

연구 설계: 연구 기간은 8주이며 연구를 완료하는 데 필요한 팔당 최소 23명의 어린이와 함께 5개의 팔로 구성됩니다. 어린이는 컴퓨터 생성 무작위화 체계를 사용하여 다섯 팔 중 하나에 무작위로 배정됩니다. 성별과 관련하여 팔의 균형을 맞추도록 노력할 것입니다. 어머니/일차 간병인은 연구 기간 동안 자녀의 현재 식이 및 모유 수유 관행을 유지하도록 조언을 받을 것입니다. 매주 분변 샘플 수집 및 채혈과 함께 2주간의 '실행' 단계 후 치료가 시작됩니다. 치료 단계는 4주 동안 진행되며, 이 기간 동안 각 테스트 제품은 최소 6시간 간격으로 하루에 두 번 테스트 센터에서 투여됩니다. 실제로 섭취한 1인분의 양은 제공된 양에서 남은 양을 빼서 계산합니다. 미리 계량된 냅킨이 제공됩니다. 역류, 구토 또는 흘린 모든 음식은 면봉으로 닦고 무게를 재고 제공된 양에서 뺍니다. 대변 ​​샘플은 신속한 동결 보존을 위해 확립된 SOP를 사용하여 매주 수집됩니다. 4주간의 개입 기간이 끝나면 두 번째 혈액 채취가 수행됩니다. 치료 중단 후 발생하는 미생물군의 변화를 평가하기 위해 2개의 추가 배설물 샘플을 수집하는(7주 및 8주 말에) 중재 후 2주 단계가 있을 것입니다.

부작용/부작용(예: 발진, 음식 알레르기로 인한 두드러기 또는 임상 상태의 중대한 변화). 부작용이 관찰되면 다카 병원에서 적절한 관리 관행을 사용하여 어린이를 치료할 것입니다.

대변 ​​샘플 수집: 대변 샘플은 치료 전 2주, 치료 4주 및 치료 중단 후 2주 동안을 포함하여 8주 연구 과정 동안 각 연구 참여자로부터 매주 수집됩니다(11개 샘플 / 어린이). 배설물 샘플은 기존 SOP를 사용하여 미생물 구성의 배양 독립적 분석과 성장 촉진 박테리아 분류군을 특성화하기 위한 후속 배양 기반 이니셔티브에 사용됩니다(Raman et al., Science 2019, 365, eaau 4735; Gehrig et al., Science 2019;365, eaau4732).

혈액 샘플 수집: 치료를 시작하기 직전과 4주 치료가 완료된 직후에 각 어린이로부터 5mL의 혈액을 수집합니다. 혈장은 이전에 기술된 바와 같이 프로테오믹스 분석 전에 즉시 준비되고 -80C에서 동결됩니다(Gehrig et al., Science 2019, 365, eaau4732; Chen et al., N Engl J Med 2021; 384:1517-1528). 또한 다양한 혈액 바이오마커(식욕 및 포만감의 호르몬 조절제, 미량 영양소 상태 및 전신 염증)의 상태도 개입 전후에 수집된 샘플을 사용하여 평가됩니다.

샘플 크기 추정치: 추정치는 중등도 급성 영양실조(MAM)가 있는 12~18개월 된 방글라데시 어린이를 대상으로 한 최근 POC 연구에서 생성된 분변 16S rDNA 데이터 세트에 의해 알려졌습니다. MDCF-2 제제. 이 제제는 이러한 어린이의 미생물군을 복구하고 대조군 Ready-to-Use 보충 식품(RUSF; Chen et al., 2021)에 의해 생성된 것보다 월등한 연못 성장 속도의 개선을 가져왔습니다. 이 POC 연구에서 조사관은 118명의 참가자로부터 분석된 939개의 배설물 샘플 중 최소 5%에서 5개 이상에 존재하는 209개의 박테리아 분류군(Amplicon Sequence Variants; ASV)을 식별했습니다(Chen et al., 2021).

조사관은 59명의 어린이에 대한 개입 0일(사전 개입)과 개입 4주 사이에 209개의 박테리아 분류군 ASV 각각의 풍부도 변화(델타)에 대해 95% 신뢰 구간(CI; 평균 ± 1.96 표준 오차)을 계산했습니다. POC 연구의 MDCF-2 그룹에서 치료를 완료했습니다. 조사관은 MDCF-2 그룹 어린이의 5000개 하위 집합과 RUSF 그룹 어린이의 5000개 하위 집합의 ASV 데이터로 부트스트래핑 접근 방식을 사용하여 평균 변화량이 평균 변화의 95% CI 내에 속하는 121개의 ASV를 식별했습니다. MDCF-2 참가자이지만 그룹당 20명의 어린이의 하위 집합(샘플) 크기("MDCF-2 반응 ASV")를 사용하여 80%의 힘으로 RUSF를 받은 어린이는 아닙니다. 따라서 팔당 최소 20명의 어린이가 이 사전 POC 연구를 완료하는 것을 목표로 할 것입니다. 탈락 가능성(15%)을 고려하여 팔당 최소 23명의 어린이를 모집합니다.

분석 계획: MDCF-2의 대체/상온 안정성 테스트 제형과 Chen et al(2021)에 설명된 참조 주방 준비 제형에 의해 도출된 미생물군 복구의 비교 가능성을 평가하기 위해 조사관은 박테리아 16S rDNA 유전자에서 생성된 PCR 앰플리콘을 시퀀싱합니다. 개입 직전(0일)과 개입 종료(28일)에 다른 연구 부문의 참가자로부터 수집한 배설물 샘플에서 분리한 DNA에 존재합니다. ASV 데이터는 DADA2(Callahan et al., 2016)를 사용하여 처리되고 Chen et al. (2021). 위의 POC 연구에 사용된 것과 동일한 접근 방식을 사용하여 조사관은 이 연구에서 확인된 각 MDCF-2 반응 ASV의 존재비 평균 변화의 95% 신뢰 구간을 0일에서 28일 사이에 계산합니다. 참조 MDCF-2 공식뿐만 아니라 테스트 공식을 받는 참가자의 이러한 각 ASV에 대한 평균 변화를 받았습니다.

본 연구에서 확인된 MDCF-2 반응성 ASV의 >70%가 시험 제형에 대한 존재비의 평균 변화(0일에서 28일)를 갖는 경우, 시험 제형은 참조 주방에서 준비된 MDCF-2와 효능이 유사한 것으로 간주됩니다. 동일한 기간 동안 참조 MDCF-2 암에서 존재비의 평균 변화의 95% CI 내에 해당합니다. 참조 MDCF-2 및 시험 제제에 의해 유도된 미생물 군집 복구 분석의 또 다른 실시예는 동일한 것의 샷건 시퀀싱에 의해 확인된 다량의 메타게놈 조립 게놈(MAG)에 대한 처리 4주 후 각각의 효과의 비교를 포함할 것이다. 16S rDNA 앰플리콘을 생산하는 데 사용되는 분변 DNA 샘플.

탐색적 결과에는 Chen et al. , 2021.