MDCF-2 длительного хранения для детей с недостаточностью питания

Место проведения исследования: Исследование будет проводиться среди жителей трущоб Баониабад в Мирпуре, одной из 21 административной единицы столицы страны, Дакки. Мирпур выбран в качестве объекта исследования, поскольку он населен бедными семьями и семьями низшего среднего достатка, жилищно-бытовые и санитарно-бытовые условия типичны для любого густонаселенного городского поселения. Кроме того, следователи установили несколько полевых участков в этом районе и продолжают исследовательскую деятельность в сообществе.

Зачисление: Обученный ассистент полевых исследований (FRA) подробно расскажет об исследовании, ответит на любые вопросы родителей и предложит родителям записать ребенка в исследование. Если родитель(и) заинтересован(ы) в добровольном участии в исследовании, назначенный персонал проведет скрининг и даст согласие. Скрининг будет состоять из обзора критериев включения и исключения, перечисленных выше. Если субъект имеет право на участие, процесс переходит к согласию, состоящему из тщательного изучения письменной формы согласия в порядке, соответствующем уровню грамотности родителей ребенка. Перед подписанием формы согласия родители участников будут иметь возможность задать любые вопросы об исследовании. Если FRA установит, что участники продемонстрировали адекватное понимание исследования, форма согласия будет подписана FRA и родителем (родителями) ребенка. Если родитель(и) недостаточно грамотны, чтобы прочитать и/или подписать форму согласия, согласие и подпись отпечатка пальца будут получены в присутствии свидетеля, не связанного с исследованием. Родителю(ям) ребенка будет предоставлена ​​копия подписанной формы согласия.

Детям будет проведено тщательное клиническое обследование и лабораторные анализы (при необходимости) для исключения каких-либо органических заболеваний или любых других причин вторичного недоедания. Подробные критерии включения/исключения представлены отдельно ниже.

В начале исследования будет собрана информация о демографических характеристиках участников (доход семьи, стандарт/тип жилья, состав семьи, образование родителей и т. д.). FRA будут собирать данные антропометрии, регистрируя вес ребенка с помощью цифровых весов с точностью до 2 г (Seca, модель 728, Германия), длину тела (с помощью инфантометра, Seca, модель 416, Германия) и окружность середины плеча (MUAC) для до ближайшего миллиметра (используя нерастягивающуюся ленту). Сбор антропометрических данных впоследствии будет происходить с недельными интервалами на протяжении всего исследования.

Дизайн исследования: исследование продлится 8 недель и будет состоять из 5 групп, при этом для завершения исследования необходимо минимум 23 ребенка в каждой группе. Дети будут случайным образом распределены в одну из пяти групп с использованием компьютерной схемы рандомизации. Будут предприняты усилия, чтобы сбалансировать руки в отношении пола. Матерям/основным опекунам будет рекомендовано поддерживать текущую практику питания и грудного вскармливания своего ребенка на протяжении всего исследования. После двухнедельного вводного этапа с еженедельным сбором образцов кала и забором крови будет начато лечение. Фаза лечения будет длиться 4 недели, в течение которых каждый тестируемый продукт будет вводиться в испытательный центр два раза в день с интервалом не менее 6 часов. Количество каждой фактически съеденной порции будет рассчитано путем вычитания остатка из предложенного количества. Будут предоставлены предварительно взвешенные салфетки; любая еда, которую отрыгнули, вырвали или пролили, будет взята мазком, взвешена и вычтена из предложенного количества. Образцы кала будут собираться еженедельно с использованием установленных СОП для быстрой криоконсервации. Второй забор крови будет выполнен в конце 4-недельного периода вмешательства. Будет 2-недельная фаза после вмешательства, в течение которой будут взяты 2 дополнительных образца кала (в конце 7 и 8 недель) для оценки изменений в микробиоте, которые происходят после прекращения лечения.

Дети будут ежедневно контролироваться обученными FRA на предмет любых побочных эффектов/нежелательных явлений (например, сыпь, крапивница из-за пищевой аллергии или любые существенные изменения клинического состояния). Если наблюдаются какие-либо нежелательные явления, детей будут лечить с использованием соответствующих методов лечения в больнице Дакки.

Сбор образцов кала: Образцы кала будут собираться еженедельно у каждого участника исследования в течение 8-недельного исследования, в том числе в течение 2 недель до лечения, четырех недель лечения и двух недель после прекращения лечения (11 образцов). / ребенок). Образцы фекалий будут использоваться для независимого от культивирования анализа микробного состава с использованием существующих СОП, а также для последующих инициатив, основанных на культивировании, для характеристики таксонов бактерий, способствующих росту (Raman et al., Science 2019, 365, eaau 4735; Gehrig et al., Science 2019; 365, eaau4732).

Сбор образцов крови: 5 мл крови будет взято у каждого ребенка непосредственно перед началом лечения и сразу после завершения 4-недельного периода лечения. Плазму готовят немедленно и замораживают при -80°C перед протеомным анализом, как описано ранее (Gehrig et al., Science 2019, 365, eaau4732; Chen et al., N Engl J Med 2021; 384:1517-1528). Кроме того, с использованием образцов, собранных до и после вмешательства, также будет оцениваться состояние различных биомаркеров крови (гормональные регуляторы аппетита и сытости, статус питательных микроэлементов и системное воспаление).

Оценка размера выборки: Оценка основывается на наборах данных рДНК 16S в кале, полученных в ходе недавнего исследования POC у бангладешских детей в возрасте от 12 до 18 месяцев с умеренным острым недоеданием (MAM), которые лечились («эталонным») приготовленным на кухне Состав MDCF-2. Этот состав восстанавливал микробиоту этих детей и вызывал улучшение скорости физического роста, которое было выше, чем у контрольной готовой к употреблению дополнительной пищи (RUSF; Chen et al., 2021). В этом исследовании POC исследователи идентифицировали 209 бактериальных таксонов (варианты последовательности ампликона; ASV), которые присутствовали более чем в 5 количествах по крайней мере в 5% из 939 проанализированных образцов фекалий от 118 участников (Chen et al., 2021).

Исследователи рассчитали 95% доверительные интервалы (ДИ; среднее ± 1,96 стандартная ошибка) для изменения (дельта) численности каждого из 209 бактериальных таксонов ASV между 0-м днем ​​(до вмешательства) и 4 неделями вмешательства для 59 детей, которые завершили лечение в группе MDCF-2 исследования POC. Исследователи использовали подход начальной загрузки с данными ASV от 5000 подмножеств детей из группы MDCF-2 и 5000 подмножеств детей из группы RUSF и определили 121 ASV, средние изменения численности которых попали в 95% ДИ средних изменений для Участники MDCF-2, но не дети, получившие RUSF, с мощностью 80% с использованием подмножества (выборки) размером 20 детей в группе («ASV, реагирующие на MDCF-2»). Таким образом, мы будем стремиться к тому, чтобы это исследование, предшествующее POC, завершили как минимум 20 детей в каждой группе. Принимая во внимание потенциальный отсев (15%), в каждую группу будет набрано не менее 23 детей.

План анализа: чтобы оценить сопоставимость восстановления микробиоты, вызванного альтернативными/стабильными при хранении тестовыми составами MDCF-2, и эталонным приготовленным на кухне составом, описанным в Chen et al (2021), исследователи секвенируют ПЦР-ампликоны, полученные из бактериальных генов 16S рДНК. присутствует в ДНК, выделенной из образцов фекалий, собранных у участников различных групп исследования непосредственно перед вмешательством (день 0) и в конце вмешательства (день 28). Данные ASV будут обрабатываться с использованием DADA2 (Callahan et al., 2016) и фильтроваться, как описано в Chen et al. (2021). Используя тот же подход, который использовался для исследования POC выше, исследователи рассчитают 95% доверительные интервалы среднего изменения численности каждого из MDCF-2-чувствительных ASV, выявленных в этом исследовании, между 0 и 28 днями у детей, которые получали эталонный состав MDCF-2, а также среднее изменение для каждого из этих ASV у участников, получавших тестируемые составы.

Тестовый состав будет считаться сравнимым по эффективности с эталонным MDCF-2, приготовленным на кухне, если >70% реагирующих на MDCF-2 ASV, выявленных в этом исследовании, имеют средние изменения численности (с 0-го по 28-й день) для тестируемого состава. которые попадают в 95% ДИ их средних изменений численности в эталонной группе MDCF-2 за тот же период времени. Другой вариант анализа восстановления микробного сообщества, вызванного эталонным MDCF-2 и тестируемыми составами, будет включать сравнение их соответствующих эффектов после 4 недель лечения на обилие геномов, собранных в метагеном (MAG), идентифицированных с помощью дробового секвенирования одного и того же. Образцы фекальной ДНК, используемые для получения ампликонов 16S рДНК.

Исследовательские результаты будут включать влияние тестируемых составов на характеристики протеомов плазмы и фекалий, включая белки, реагирующие на MDCF-2, которые связаны с различными аспектами здорового роста, развития ЦНС и иммунной функции, с использованием подходов, описанных в Chen et al. , 2021.