レジスタンス運動後の筋肉回復に対するPEAの効果

研究デザイン プロトコルには、非エリート男性アスリート (トレーニング負荷 > 週 5 時間、n=14) が登録される、二重盲検、プラセボ対照、クロスオーバー試験デザインが伴います。 参加者は、PEA またはプラセボを無作為に受け取る 2 つの実験セッションを受けます。 2 つのセッションは、エキセントリックなエクササイズの試合から完全に回復できるように、3 週間のウォッシュ アウト期間で区切られています。 被験者内計画を使用する科学的根拠は、被験者間計画と比較してデータの変動性が低く、統計的検出力が高いという仮定に基づいています。 さらに、二重盲検プラセボ対照試験を使用して、治療バイアスとプラセボ効果を防ぎます。

参加者は無作為に割り当てられ、PEA または外観が一致するプラセボ サプリメントを 1 日 2 回、合計 6 日間受けます。 補充開始の 3 日前 (D-3)、ベースライン測定値が収集されます。その間、参加者は絶食と休息の状態で実験室に報告し、知覚された筋肉痛をビジュアル アナログ スケール (VAS) でマークします。 次に、血液サンプルと筋肉生検が収集され、その後、最大等尺性、偏心および同心随意収縮とジャンプの高さ (カウンター ムーブメント ジャンプとスクワット ジャンプ) が評価されます。 さらに、参加者は、前月の睡眠の質と量を評価するために、ピッツバーグ睡眠の質指数 (PSQI) を完成させます。 ベースライン測定値 (D0) の収集の 3 日後、参加者は休息と断食の状態で実験室に戻ります。 絶食時の血液サンプルを採取した後、彼らは軽い標準化された朝食（〜500kcal、炭水化物60％、タンパク質20％、脂肪20％）で最初のサプリメントを受け取ります. その後、知覚された筋肉痛を評価し、セント メアリー病院のアンケートに記入します (前夜の睡眠の質と量を評価するため)。 サプリメント摂取の 1 時間後、参加者は膝伸筋の 10 回のエキセントリック収縮の 24 セットからなる片側エキセントリック エクササイズ (EE) 試合を行います。 EE の 24、48、72、120 時間後に、最大随意収縮とジャンプの高さの測定を繰り返します。 さらに、EE の 24、48、72、96、120 時間後に血液サンプルを採取し、EE の 48 時間後に筋肉生検を採取します。 さらに、参加者は、知覚された筋肉痛を評価し、食事日記を完成させ、実験プロトコルの全期間にわたって、セント メアリー病院のアンケート (毎日) に記入します。

スクリーニング 志願者は、参加基準および除外基準に基づいて研究に参加する資格を評価するためにスクリーニングされます。 スクリーニング中、体重は0.1kgの精度でデジタル天秤を使用して測定され、身長は1cmの精度で測定されます。 さらに、参加者の一般的な健康状態を評価するために、医療アンケートが取得されます。 志願者がスクリーニング結果、および除外基準に従って適格であると見なされた場合、その志願者は研究に含まれます。

習熟 介入試験中の学習効果を防ぐために、すべての参加者は、試験開始の少なくとも 1 週間前に試験装置に慣れます。 参加者は、以下で詳細に説明するように、3 つの最大下アイソメトリック、エキセントリック、コンセントリック随意収縮、および 3 つのカウンター ムーブメント ジャンプとスクワット ジャンプを実行するように求められます (12 ページの段落 76.3 を参照)。 参加者は、動きの適切なテクニックについて指導を受け、常にスタッフによって監督されています。 習熟中に、等速動力計の個々の設定が決定され、その後のすべての測定で使用されます。 さらに、参加者は食事日記を完成させる方法についても指示されます。

無作為化: 参加者は、最初のセッション中に補助グループ (PEA またはプラセボ) の 1 つに無作為に割り当てられます。 3週間のウォッシュアウト期間の後、参加者は他のサプリメントグループにクロスオーバーされます. 無作為化は、実験手順のいずれにも関与していない私たちの研究室内の研究者によって実行されます。 そのため、参加者と測定を行う研究者は、参加者が異なるサプリメントを受け取る順序を認識していません. ランダム化シーケンスは、オンライン ツール (RANDOM.ORG - 整数セット ジェネレーター) を使用して、現在の研究に関与していない研究グループのメンバーによって生成されます。 身元隠蔽コードは、現在の研究に関与していない研究グループの同じメンバーの安全な管理下にある無作為化リストで使用されます。

盲検化: バイアスを避けるために、治験責任医師/治験スタッフ/参加者に対して、次のように治療群を盲検化します: サプリメントは、サプリメントの外観、匂いおよび/または触感がわからないように製造、包装、およびラベル付けされます。プラセボと区別できます。 サプリメントは、実験手順や分析のいずれにも関与していない研究グループのメンバーによって参加者に配信されます。 さらに、盲目を維持するために、サプリメントとプラセボは同じ投与経路とプロセスに従います.

盲検解除: すべての参加者が試験を完了し、すべてのウェットラボ分析が完了すると、データベースがロックされ、収集された試験データの盲検が解除され、試験データの統計分析が可能になります。 PI は、データ分析を完了した後、指定された研究者にすべての参加者の非盲検治療情報を提供します。

盲検試験で緊急事態が発生した場合、治験責任医師は、参加者の割り当てられた治療の早期の盲検解除が正当化されるかどうかを判断する唯一の責任を負います。 そのような決定を下す際には、参加者の安全を常に第一に考慮しなければなりません。 必要に応じて、盲検を解除した日付と理由を記録する必要があります。

筋肉を損傷するエキセントリック エクササイズ (EE) プロトコル 参加者は、100W のサイクル エルゴメーターで 5 分間のウォームアップを行います。 その後、体幹を安定させるために上半身を椅子に固定し、右脚をレバー アームに固定するアイソキネティック ダイナモメーターで行います。 EE プロトコルは、-30⁰/s の角速度および 180⁰ から 60⁰ (180⁰ は完全な伸展を指す) の可動域での膝伸筋の 10 回の等速性片側偏心収縮の 24 セットで構成されます。 セット間に60秒の休憩を挟みます。 参加者は、動きのエキセントリック フェーズ中にレバー アームの下向きの回転に最大限抵抗するよう口頭で奨励されます。 運動の同心円状の段階では、抵抗は適用されません。 この風変わりな運動プロトコルは、以前の研究で示されているように、筋肉の損傷を効果的に誘発することが示されました。

サプリメント 参加者は、無作為化された順序で 2 つの別々の機会に PEA とプラセボのサプリメントを受け取ります。 PEA サプリメントには 350 mg の Levagen+ (315 mg の PEA と 35 mg の賦形剤) が含まれており、プラセボ サプリメントには 350 mg のマルトデキストリンが含まれています。 Levagen+ は、90% のパルミトイルエタノールアミドと、10% のココナッツ オイル (分画)、ポリグリセロール ポリリシノール酸、柑橘油、オリーブ オイル、レシチン、酢酸 dl-アルファ トコフェロール、二酸化ケイ素の混合物で構成され、PEA のバイオアベイラビリティを向上させます。 PEA とプラセボの両方のサプリメントは、外観や味に違いがないことを保証するために、シースルーのハード カプセルにパッケージ化されています。 参加者は、ベースライン測定値の収集後から 6 日間連続して、1 日 2 回 (朝と就寝前の 1 時間) サプリメントを摂取するように指示されています。

身体活動と食事管理 参加者は、習慣的な活動パターンを維持するよう求められます (例: 自転車で教室まで）。 ただし、実験セッション中および実験セッション開始の72時間前に、中程度から激しい運動を行わないように指示されています。 さらに、筋生検採取の 24 時間前は、いかなる種類の運動も許可されません。

参加者は、標準化された食事 (1200 kcal; 180 g CHO、33 g 脂肪、45 g タンパク質) を EE の前の晩と筋生検収集の前の晩に受け取ります。 試験日は、参加者が絶食状態でラボに報告する必要があり、すべての測定が完了すると朝食 (500 kcal) が提供されます。 EE 開始の 1 時間前に同じ朝食が提供されます。 さらに、参加者は、条件間の食事の変動の可能性を確認するために、ベースライン測定後から毎日食事日記を作成します。 食事分析は、食事の記録と主要栄養素および微量栄養素の組成の分析のための web プラットフォームを使用して実行されます (https://mijn.voedingscentrum.nl/nl/eetmeter/)。 参加者は、実験セッション中にアルコール飲料やカフェイン入り飲料を摂取することはできません。

血液サンプル 腕の静脈から血液 (2x10 mL) を採取し (Venoject システム)、直ちに遠心分離によって血漿または血清を分離します。 血漿および血清サンプルは、異なる 1 mL アリコートで配布され、後日生化学的アッセイに使用するまで-20°C で保存されます。 ベースライン、EE の直前、EE の 24、48、72、96、および 120 時間後に絶食状態で血液サンプルを採取します。

血漿サンプルは、CK (筋肉損傷のマーカー)、IL-6、および TNFalpha (両方とも全身性炎症のマーカー) について、適切な特異的酵素免疫測定法 (ELISA) によって分析されます。 PEA 濃度は、タンデム質量分析を備えた高速液体クロマトグラフィーによって評価されます。 一次分析が実施された後に関連性があると判断された場合、血液サンプルに関する追加の分析が実施される場合があります。 すべての分析が実行された後、残りのサンプルは、永久に破棄される前にさらに 3 年間保管されます。

筋肉生検 筋肉生検は、絶食状態の利き足からベースラインおよび EE の 48 時間後に収集されます。 したがって、被験者ごとに合計 4 つの生検が研究全体で行われます。 生検は経験豊富な医師（Dr. Ruud Van Thienen) から m. 前述のように、直径 5 mm の Bergström 針を使用して、訓練を受けた脚の外側広筋を測定します (29)。 要するに、局所麻酔 (リドカイン、1ml) の下で皮膚とその下の筋膜に小さな切開 (~5mm) を行い、針が筋肉腹にスムーズに浸透するようにします。 針が筋肉腹内に配置されると、チューブとシリンジが針の上端に取り付けられ、筋肉が針に引き込まれる真空を作成するために使用されます. この時点で、針の内側部分の滑らかなねじれの下向きの動きが組織を切り裂き、筋肉サンプルを取得します。 組織 (筋肉の ~ 150-300 mg) を切断した後、液体窒素で凍結する前に、サンプルを視覚的な血液と結合組織から解放します。 皮膚を通して行われた切開は、接着ストリップ (steristrips) を使用して閉じられ、防水石膏で包帯が巻かれます。 参加者は、石膏を外す前に 5 日間着用します。 この 5 日間、参加者はシャワーを浴びることができますが、石膏を浸したり浸したりしないように指示されます (つまり、 悪いか泳ぐ）。 参加者は、筋肉生検の手順で 5 mm 程度の小さな傷跡が残るという事実について警告されますが、これは 1 ～ 2 年後にはほとんど見えなくなる可能性があります。 さらに、局所麻酔により、処置中に痛みを感じることはありませんが、筋肉の機械的センサーは敏感なままです。 そのため、参加者は圧迫感を感じるかもしれませんが、痛みは感じません。 施術後、1～2日は筋肉が硬くなることがあります。

筋肉の生検は、筋肉の炎症、ストレス、再生、同化作用のパラメーターについて、当社の研究室 (運動生理学研究所、KU Leuven) 内で生化学的に分析されます。

膝伸筋の最大随意収縮 (MVC) 訓練された脚の等尺性、偏心性および同心性膝伸展トルクは、等速性ダイナモメーター (cfr. (28)) ベースライン時および EE 後 24、48、72、および 120 時間。 要するに、参加者は体幹を安定させるために上半身を椅子に固定し、訓練した脚をレバー アームに固定して座ります。 等尺性随意収縮が最大になるように、膝関節は 90 度の角度で配置されます。 参加者は、膝の伸筋を最大限に収縮させ、3 秒間保持するように指示されます。 最大偏心および同心随意収縮は、角速度 30⁰/s および 180-60⁰ の可動範囲で測定されます (180⁰ は完全伸展を指します)。 各動作は 3 回実行され、試行間に 60 秒の休憩が入ります。 試行間に得られた最大ピーク トルク値が分析に使用されます。

カウンター ムーブメント ジャンプ 参加者は、EE のベースラインと 24、48、72、および 120 時間後に、フォース プラットフォーム (SMARTJUMP、フュージョン スポーツ、ノッティンガム、英国) でカウンター ムーブメント ジャンプ (CMJ) を実行します。 参加者は、腰の幅に足を置いて直立姿勢 (膝角度 180°) を取るように求められ、その後、スクワット位置 (膝角度 90°) への下向きの動きを開始した後、最大の高さまで垂直にジャンプします。 参加者は、両手を腰に置き、ジャンプ中ずっと体を直立させておくように指示されます。 CMJ は試行間に 60 秒の休憩を挟んで 3 回実行されます。 記録された最高のジャンプが分析に使用されます。

スクワット ジャンプ 参加者は、ベースラインと EE の 24、48、72、120 時間後にフォース プラットフォームでスクワット ジャンプ (SJ) を実行します。 参加者は、しゃがんだ姿勢 (膝の角度 90 度) から開始し、垂直にジャンプして最大の高さまで 3 秒間保持するよう求められます。 参加者は、両手を腰に置き、ジャンプ中ずっと体を直立させておくように指示されます。 SJ は 60 秒の休憩を挟んで 3 回行う。 記録された最高のジャンプが分析に使用されます。

筋肉痛 トレーニングを受けた脚の筋肉痛を、ベースライン、EE の直前、および EE の 24、48、72、96、および 120 時間後に、ビジュアル アナログ スケール (VAS) を使用して評価します。 参加者は、手を腰に当てて 3 秒間スクワットの姿勢を保ち、左端が「痛みなし」を表し、右端が「痛みなし」を表す 100 mm の線で表される目盛で知覚された筋肉痛をマークするように求められます。 「極度の痛み」を表します。

睡眠の質と量 ベースラインで、参加者の習慣的な睡眠衛生は、ピッツバーグ睡眠の質指数を使用して評価されます。 さらに、参加者はセント メアリー病院のアンケートに毎日記入し、ベースライン測定の前夜から始めて、前夜の睡眠の質と量を評価します。 St. Mary's Hospital アンケートは、被験者の前夜の睡眠を評価するための信頼できるツールであることが示されました。