Efecto de la PEA en la Recuperación Muscular Después del Ejercicio de Resistencia

Diseño del estudio El protocolo implica un diseño de ensayo cruzado, doble ciego, controlado con placebo, en el que se inscriben atletas masculinos que no son de élite (carga de entrenamiento > 5 h/semana, n = 14). Los participantes se someten a 2 sesiones experimentales en las que reciben PEA o placebo en un orden aleatorio. Las dos sesiones están separadas por un período de lavado de 3 semanas para permitir una recuperación completa de la serie de ejercicios excéntricos. La justificación científica para usar un diseño dentro de los sujetos se basa en la suposición de una variabilidad de datos reducida y un mayor poder estadístico en comparación con un diseño entre sujetos. Además, se usa un ensayo doble ciego controlado con placebo para prevenir el sesgo del tratamiento y los efectos del placebo.

Los participantes se asignan al azar para recibir PEA o suplementos de placebo de apariencia similar dos veces al día durante un total de 6 días. Tres días antes del inicio de la suplementación (D-3), se recopilan mediciones de referencia durante las cuales los participantes se presentan en el laboratorio en ayunas y descansados ​​y marcan su dolor muscular percibido en una escala analógica visual (VAS). A continuación, se recogen muestras de sangre y biopsias musculares, después de lo cual se evalúan las contracciones voluntarias máximas isométricas, excéntricas y concéntricas y la altura del salto (Contramovimiento de salto y Squat Jump). Además, los participantes completan el Índice de Calidad del Sueño de Pittsburgh (PSQI) para evaluar la calidad y cantidad del sueño del mes anterior. Tres días después de la recolección de las medidas de referencia (D0), los participantes regresan al laboratorio en estado de reposo y ayuno. Después de la recolección de una muestra de sangre en ayunas, reciben su primer suplemento con un desayuno ligero estandarizado (~500 kcal, 60% carbohidratos, 20% proteínas, 20% grasas). Luego, califican su dolor muscular percibido y completan el cuestionario del Hospital St. Mary's (para evaluar la calidad y cantidad de sueño de la noche anterior). Una hora después de la ingesta del suplemento, los participantes realizan una serie de ejercicios excéntricos (EE) unilaterales que consisten en 24 series de 10 contracciones excéntricas de los extensores de la rodilla. Las mediciones de las contracciones voluntarias máximas y la altura del salto se repiten 24, 48, 72 y 120 h después de EE. Además, se recogen muestras de sangre 24, 48, 72, 96 y 120 h después de la EE, y biopsias musculares 48 h después de la EE. Además, los participantes califican su dolor muscular percibido, completan un diario de alimentos y completan el cuestionario del Hospital St. Mary's (diariamente), durante toda la duración del protocolo experimental.

Selección Los voluntarios son seleccionados para evaluar su elegibilidad para participar en el estudio según los criterios de admisión y exclusión. Durante el examen, la masa corporal se mide con una balanza digital con una precisión de 0,1 kg y la altura corporal se mide con una precisión de 1 cm. Además, se obtiene un cuestionario médico para evaluar el estado de salud general de los participantes. Cuando los voluntarios se consideran elegibles de acuerdo con los resultados de la selección y los criterios de inclusión y exclusión, se incluyen en el estudio.

Familiarización Para evitar cualquier efecto de aprendizaje durante el ensayo de intervención, todos los participantes se familiarizan con el equipo de prueba al menos una semana antes del inicio del ensayo. Se invita a los participantes a realizar 3 contracciones voluntarias submáximas isométricas, excéntricas y concéntricas y 3 saltos con contramovimiento y sentadillas con salto como se describe en detalle a continuación (ver párrafo 76.3 en la página 12). Los participantes reciben instrucciones sobre la técnica adecuada de los movimientos y son supervisados ​​por un miembro del personal en todo momento. Durante la familiarización, se determinan los ajustes individuales en el dinamómetro isocinético y se utilizarán en todas las mediciones posteriores. Además, se instruye a los participantes sobre cómo completar sus diarios de alimentos.

Aleatorización: los participantes se asignan aleatoriamente a uno de los grupos complementarios (PEA o placebo) durante la primera sesión. Después de un período de lavado de 3 semanas, los participantes pasan al otro grupo de suplementos. La aleatorización la realiza un investigador de nuestro laboratorio que no participa en ninguno de los procedimientos experimentales. Como tal, tanto los participantes como los investigadores que realizan las mediciones desconocen el orden en que los participantes reciben los diferentes suplementos. La secuencia de aleatorización será generada por un miembro del grupo de investigación que no esté involucrado en el estudio actual utilizando una herramienta en línea (RANDOM.ORG - Generador de conjuntos enteros). Los códigos de ocultación de identidad se utilizan en la lista de aleatorización que está bajo la custodia segura del mismo miembro del grupo de investigación que no está involucrado en el estudio actual.

Cegamiento: Para evitar sesgos, los brazos de tratamiento serán cegados a los investigadores/personal del ensayo/participantes, de la siguiente manera: el suplemento se fabricará, empaquetará y etiquetará de tal manera que la apariencia visual, el olor y/o el tacto del suplemento puede distinguirse del placebo. Los suplementos son entregados a los participantes por un miembro del grupo de investigación que no está involucrado en ninguno de los procedimientos o análisis experimentales. Además, para mantener la ceguera, el suplemento y el placebo seguirán la misma ruta y proceso de administración.

Desbloqueo: después de que todos los participantes hayan completado el ensayo y se hayan completado todos los análisis de laboratorio húmedo, la base de datos se bloqueará y los datos recopilados del ensayo se desbloquearán para permitir el análisis estadístico de los datos del ensayo. El IP proporcionará a los investigadores designados la información de tratamiento no cegada para todos los participantes después de completar el análisis de datos.

En caso de una emergencia en un Ensayo cegado, el Investigador tiene la responsabilidad exclusiva de determinar si se justifica la anulación prematura del cegamiento de la asignación de tratamiento de un participante. La seguridad de los participantes siempre debe ser la primera consideración al tomar tal determinación. Se debe registrar la fecha y el motivo del desenmascaramiento, según corresponda.

Protocolo de ejercicio excéntrico (EE) que daña los músculos Los participantes realizan un calentamiento de 5 minutos en el cicloergómetro a 100W. Posteriormente, se realizan en el dinamómetro isocinético donde se amarra la parte superior del cuerpo a la silla para estabilizar el tronco y se amarra la pierna derecha al brazo de palanca. El protocolo EE consta de 24 series de 10 contracciones excéntricas unilaterales isocinéticas de los extensores de la rodilla a una velocidad angular de -30⁰/s y un rango de movimiento de 180⁰ a 60⁰ (donde 180⁰ se refiere a la extensión completa). Entre series, se proporcionan 60 segundos de descanso. Se alienta verbalmente a los participantes a resistir al máximo la rotación hacia abajo del brazo de palanca durante la fase excéntrica del movimiento. No se aplica resistencia durante la fase concéntrica del movimiento. Este protocolo de ejercicio excéntrico demostró inducir efectivamente el daño muscular como se indica en estudios previos.

Suplementos Los participantes reciben suplementos de PEA y placebo en dos ocasiones separadas en un orden aleatorio. Los suplementos de PEA contienen 350 mg de Levagen+ (315 mg de PEA y 35 mg de excipientes) y los suplementos de placebo contienen 350 mg de maltodextrina. Levagen+ consiste en un 90 % de palmitoiletanolamida y en un 10 % de una mezcla de aceite de coco (fraccionado), polirricinoleato de poliglicerol, aceite de cítricos, aceite de oliva, lecitina, acetato de dl-alfa tocoferilo y dióxido de silicio para mejorar la biodisponibilidad de la PEA. Tanto los suplementos de PEA como los de placebo están empacados en cápsulas duras no transparentes para asegurar que no haya diferencias en apariencia o sabor. Se indica a los participantes que ingieran su suplemento dos veces al día (por la mañana y una hora antes de acostarse) durante 6 días consecutivos a partir de la recopilación de las medidas de referencia.

Actividad física y control de la dieta Se pide a los participantes que mantengan sus patrones de actividad habituales (p. ir en bicicleta a clase). Sin embargo, se les indica que no realicen ningún ejercicio de moderado a extenuante durante y 72 horas antes del inicio de la sesión experimental. Además, no se permite ningún tipo de ejercicio 24h antes de la toma de biopsias musculares.

Los participantes reciben una comida estandarizada (1200 kcal; 180 g de CHO, 33 g de grasa, 45 g de proteína) la noche anterior a la EE, así como la noche anterior a la toma de la biopsia muscular. En los días de prueba, cuando los participantes deben presentarse en el laboratorio en ayunas, se proporciona un desayuno (500 kcal) al finalizar todas las mediciones. El mismo desayuno se proporciona 1 hora antes del inicio de EE. Además, los participantes completan un diario de alimentos diariamente, comenzando después de las mediciones de referencia, para verificar la posible variación dietética entre las condiciones. Los análisis dietéticos se realizan utilizando una plataforma web para el registro dietético y el análisis de la composición de macronutrientes y micronutrientes (https://mijn.voedingscentrum.nl/nl/eetmeter/). Los participantes no pueden consumir bebidas alcohólicas o con cafeína durante las sesiones experimentales.

Muestras de sangre Se extrae sangre (2 x 10 ml) de una vena del brazo (sistema Venoject) y el plasma o el suero se separan inmediatamente mediante centrifugación. Las muestras de plasma y suero se distribuyen en diferentes alícuotas de 1 ml y se almacenan a -20 °C hasta su uso para ensayos bioquímicos en una fecha posterior. Las muestras de sangre se recogen al inicio del estudio, inmediatamente antes de la EE y 24, 48, 72, 96 y 120 h después de la EE en ayunas.

Las muestras de plasma se analizan mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) específico apropiado para CK (marcador de daño muscular), IL-6 y TNFalfa (ambos marcadores de inflamación sistémica). Las concentraciones de PEA se evalúan mediante cromatografía líquida de alta resolución con espectrometría de masas en tándem. Se pueden realizar ensayos adicionales en muestras de sangre si se considera relevante después de que se hayan realizado los análisis primarios. Después de que se hayan realizado todos los análisis, cualquier muestra residual se almacena durante un período adicional de 3 años antes de ser destruida de forma permanente.

Biopsias musculares Las biopsias musculares se obtienen al inicio y 48 horas después de la EE de la pierna dominante en ayunas. Por lo tanto, se toman un total de 4 biopsias por sujeto a lo largo del estudio. Las biopsias son tomadas por un médico experimentado (Dr. Ruud Van Thienen) del m. vastus lateralis de la pierna entrenada usando una aguja Bergström de 5 mm de diámetro como se describió previamente (29). En resumen, se realiza una pequeña incisión (~5 mm) a través de la piel y la fascia subyacente bajo anestesia local (lidocaína, 1 ml) para facilitar la penetración suave de la aguja en el vientre del músculo. Una vez que la aguja se coloca dentro del vientre del músculo, se unen un tubo y una jeringa a la extremidad superior de la aguja que se usa para crear un vacío por el cual el músculo se introduce en la aguja. En este punto, un suave movimiento giratorio hacia abajo de la parte interna de la aguja corta el tejido para obtener la muestra de músculo. Después de cortar el tejido (~150-300 mg de músculo), las muestras se liberan de sangre visible y tejido conjuntivo antes de congelarlas en nitrógeno líquido. La incisión que se hizo a través de la piel se cerrará con tiras adhesivas (steristrips) y se vendará con un apósito impermeable. Los participantes usarán el yeso durante 5 días antes de que se les permita quitárselo. Durante estos 5 días, los participantes pueden ducharse, pero se les indicará que no sumerjan ni sumerjan el yeso (es decir, tomar un mal o nadar). Se advertirá a los participantes sobre el hecho de que el procedimiento de biopsia muscular deja una pequeña cicatriz de ~5 mm que muy probablemente será invisible después de uno o dos años. Además, la anestesia local asegura que no haya sensación de dolor durante el procedimiento, pero los sensores mecánicos en los músculos permanecen sensibles. Como tal, los participantes pueden experimentar la sensación de presión pero no de dolor. Después del procedimiento, el músculo puede sentirse rígido durante uno o dos días.

Las biopsias musculares se analizan bioquímicamente en nuestro laboratorio (laboratorio de investigación de fisiología del ejercicio, KU Leuven) para determinar los parámetros de inflamación muscular, estrés, regeneración y anabolismo.

Contracción voluntaria máxima (MVC) de los extensores de la rodilla El par extensor de la rodilla isométrico, excéntrico y concéntrico de la pierna entrenada se mide utilizando un dinamómetro isocinético (cfr. (28)) al inicio del estudio y 24, 48, 72 y 120 h después de la EE. En resumen, los participantes se sientan con la parte superior del cuerpo atada a la silla para estabilizar el tronco y la pierna entrenada atada al brazo de palanca. Para el pico de contracción voluntaria isométrica máxima, la articulación de la rodilla se coloca en un ángulo de 90⁰. Los participantes reciben instrucciones de contraer al máximo los extensores de la rodilla y mantenerlos durante 3 segundos. La contracción voluntaria excéntrica y concéntrica máxima se mide a una velocidad angular de 30⁰/s y un rango de movimiento entre 180-60⁰ (donde 180⁰ se refiere a la extensión completa). Cada movimiento se realiza tres veces con 60 segundos de descanso entre intentos. El valor de par máximo máximo obtenido entre intentos se utiliza para el análisis.

Salto con contramovimiento Los participantes realizan un salto con contramovimiento (CMJ) en una plataforma de fuerza (SMARTJUMP, Fusion sport, Nottingham, Reino Unido) al inicio y 24, 48, 72 y 120 h después de EE. Se les pide a los participantes que adopten una posición erguida (ángulo de rodilla de 180⁰) con los pies al ancho de la cadera antes de iniciar un movimiento hacia abajo a la posición de cuclillas (ángulo de rodilla de 90⁰) después de lo cual saltan verticalmente para alcanzar la altura máxima. Se instruye a los participantes para que coloquen las manos en las caderas y mantengan el cuerpo erguido durante el salto. El CMJ se realiza tres veces con 60 segundos de descanso entre intentos. El salto más alto registrado se utiliza para el análisis.

Salto en cuclillas Los participantes realizan un salto en cuclillas (SJ) en una plataforma de fuerza en la línea de base y 24, 48, 72 y 120 h después de EE. Se les pide a los participantes que comiencen en una posición de cuclillas (ángulo de la rodilla de 90⁰) y que la mantengan durante 3 segundos antes de saltar verticalmente a la altura máxima. Se instruye a los participantes para que coloquen las manos en las caderas y mantengan el cuerpo erguido durante el salto. SJ se realiza tres veces con 60 segundos de descanso entre intentos. El salto más alto registrado se utiliza para el análisis.

Dolor muscular El dolor muscular de la pierna entrenada se evalúa al inicio del estudio, inmediatamente antes de la EE y 24, 48, 72, 96 y 120 h después de la EE utilizando una escala analógica visual (VAS). Se les pide a los participantes que mantengan una posición en cuclillas durante 3 segundos con las manos en las caderas y que marquen el dolor muscular percibido en una escala que está representada por una línea de 100 mm de la cual el extremo izquierdo representa "sin dolor" mientras que el extremo derecho representa 'dolor extremo'.

Calidad y cantidad del sueño Al inicio del estudio, la higiene habitual del sueño de los participantes se evalúa mediante el Índice de Calidad del Sueño de Pittsburgh. Además, los participantes completan el cuestionario del St. Mary's Hospital diariamente para evaluar la calidad y la cantidad de sueño de la noche anterior, comenzando la noche anterior a las mediciones de referencia. El cuestionario del St. Mary's Hospital demostró ser una herramienta confiable para evaluar el sueño de la noche anterior de un sujeto.