Efeito da PEA na recuperação muscular após o exercício de resistência

Desenho do estudo O protocolo envolve um desenho de estudo cruzado, duplo-cego, controlado por placebo, no qual atletas masculinos não de elite (carga de treinamento >5h/semana, n=14) são inscritos. Os participantes passam por 2 sessões experimentais nas quais recebem PEA ou placebo em ordem aleatória. As duas sessões são separadas por um período de wash out de 3 semanas para permitir uma recuperação completa da sessão de exercícios excêntricos. A justificativa científica para usar um delineamento intra-sujeitos é baseada na suposição de variabilidade de dados reduzida e maior poder estatístico em comparação com um delineamento entre-sujeitos. Além disso, um estudo duplo-cego controlado por placebo é usado para evitar viés de tratamento e efeitos placebo.

Os participantes são alocados aleatoriamente para receber PEA ou suplementos de placebo de aparência semelhante duas vezes ao dia por um total de 6 dias. Três dias antes do início da suplementação (D-3), as medições de linha de base são coletadas durante as quais os participantes se reportam ao laboratório em jejum e repouso e marcam sua dor muscular percebida em uma escala visual analógica (VAS). Em seguida, são coletadas amostras de sangue e biópsias musculares, após as quais são avaliadas as contrações voluntárias isométricas, excêntricas e concêntricas máximas e a altura do salto (Counter Movement Jump e Squat Jump). Além disso, os participantes completam o Índice de Qualidade do Sono de Pittsburgh (PSQI) para avaliar a qualidade e a quantidade de sono do mês anterior. Três dias após a coleta das medidas basais (D0), os participantes retornam ao laboratório em estado de repouso e jejum. Após a coleta de uma amostra de sangue em jejum, eles recebem seu primeiro suplemento com um café da manhã leve e padronizado (~ 500 kcal, 60% de carboidratos, 20% de proteína, 20% de gordura). Em seguida, eles avaliam a dor muscular percebida e preenchem o questionário do St. Mary's Hospital (para avaliar a qualidade e a quantidade de sono da noite anterior). Uma hora após a ingestão do suplemento, os participantes realizam uma sessão de exercício excêntrico (EE) unilateral que consiste em 24 séries de 10 contrações excêntricas dos extensores do joelho. Medições de contrações voluntárias máximas e altura do salto são repetidas 24, 48, 72 e 120h após o EE. Além disso, amostras de sangue são coletadas 24, 48, 72, 96 e 120h após o EE, e biópsias musculares são coletadas 48h após o EE. Além disso, os participantes avaliaram sua dor muscular percebida, completaram um diário alimentar e preencheram o questionário do St. Mary's Hospital (diariamente), durante toda a duração do protocolo experimental.

Triagem Os voluntários são avaliados para avaliar sua elegibilidade para participar do estudo com base em critérios de inclusão e exclusão. Durante a triagem, a massa corporal é medida com uma balança digital com precisão de 0,1 kg e a altura corporal é medida com precisão de 1 cm. Além disso, um questionário médico é obtido para avaliar a saúde geral dos participantes. Quando os voluntários são considerados elegíveis de acordo com os resultados da triagem e os critérios de inclusão e exclusão, eles são incluídos no estudo.

Familiarização Para evitar qualquer efeito de aprendizagem durante o ensaio de intervenção, todos os participantes são familiarizados com o equipamento de teste pelo menos uma semana antes do início do ensaio. Os participantes são convidados a realizar 3 contrações voluntárias isométricas, excêntricas e concêntricas submáximas e 3 saltos de movimento contrário e saltos de agachamento conforme descrito em detalhes abaixo (consulte o parágrafo 76.3 na página 12). Os participantes são instruídos sobre a técnica adequada dos movimentos e são supervisionados por um membro da equipe o tempo todo. Durante a familiarização, as configurações individuais no dinamômetro isocinético são determinadas e serão usadas em todas as medições subsequentes. Além disso, os participantes são instruídos sobre como preencher seus diários alimentares.

Randomização: Os participantes são alocados aleatoriamente para um dos grupos suplementares (PEA ou placebo) durante a primeira sessão. Após um período de eliminação de 3 semanas, os participantes são transferidos para o outro grupo de suplementos. A randomização é realizada por um pesquisador dentro de nosso laboratório que não está envolvido em nenhum dos procedimentos experimentais. Como tal, os participantes, bem como os pesquisadores que realizam as medições, desconhecem a ordem em que os participantes recebem os diferentes suplementos. A sequência de randomização será gerada por um membro do grupo de pesquisa que não está envolvido no estudo atual usando uma ferramenta online (RANDOM.ORG - Integer Set Generator). Códigos de ocultação de identidade são usados ​​na lista de randomização que está sob custódia do mesmo membro do grupo de pesquisa que não está envolvido no presente estudo.

Cegueira: Para evitar viés, os braços de tratamento serão cegos para os Investigadores/equipe do ensaio/participantes, como segue: o suplemento será fabricado, embalado e rotulado de forma que a aparência visual, nem o cheiro e/ou toque do suplemento pode ser distinguido do placebo. Os suplementos são entregues aos participantes por um membro do grupo de pesquisa que não está envolvido em nenhum dos procedimentos experimentais ou análises. Além disso, para manter o cego, o suplemento e o placebo seguirão a mesma via e processo de administração.

Revelação: Depois que todos os participantes concluírem o estudo e todas as análises de laboratório úmido forem concluídas, o banco de dados será bloqueado e os dados do estudo coletados serão revelados para permitir a análise estatística dos dados do estudo. O PI fornecerá aos pesquisadores designados as informações de tratamento não cegas para todos os participantes após a conclusão da análise de dados.

No caso de uma emergência em um Estudo cego, o Investigador tem a responsabilidade exclusiva de determinar se o cancelamento prematuro da designação de tratamento de um participante é justificado. A segurança do participante deve sempre ser a primeira consideração ao fazer tal determinação. A data e o motivo da revelação devem ser registrados, conforme aplicável.

Protocolo de exercício excêntrico (EE) lesivo muscular Os participantes realizam um aquecimento de 5 minutos no cicloergômetro a 100W. Em seguida, eles ocorrem no dinamômetro isocinético, onde a parte superior do corpo é amarrada à cadeira para estabilizar o tronco e a perna direita é amarrada ao braço de alavanca. O protocolo EE consiste em 24 séries de 10 contrações excêntricas unilaterais isocinéticas dos extensores do joelho a uma velocidade angular de -30⁰/s e uma amplitude de movimento de 180⁰ a 60⁰ (onde 180⁰ se refere à extensão total). Entre as séries, são fornecidos 60 segundos de descanso. Os participantes são verbalmente encorajados a resistir ao máximo à rotação para baixo do braço de alavanca durante a fase excêntrica do movimento. Nenhuma resistência é aplicada durante a fase concêntrica do movimento. Este protocolo de exercício excêntrico demonstrou induzir danos musculares de forma eficaz, conforme indicado em estudos anteriores.

Suplementos Os participantes recebem PEA e suplementos de placebo em duas ocasiões separadas em ordem aleatória. Os suplementos de PEA contêm 350 mg de Levagen+ (315 mg de PEA e 35 mg de excipientes) e os suplementos de placebo contêm 350 mg de maltodextrina. Levagen+ consiste em 90% de palmitoiletanolamida e em 10% de uma mistura de óleo de coco (fracionado), polirricinoleato de poliglicerol, óleo cítrico, azeite de oliva, lecitina, acetato de dl-alfa tocoferol e dióxido de silício para melhorar a biodisponibilidade da PEA. Os suplementos PEA e placebo são embalados em cápsulas não transparentes para garantir que não haja diferenças na aparência ou no sabor. Os participantes são instruídos a ingerir seu suplemento duas vezes ao dia (de manhã e uma hora antes de dormir) por 6 dias consecutivos, começando após a coleta das medidas basais.

Atividade física e controle alimentar Pede-se aos participantes que mantenham seus padrões habituais de atividade (ex. ir de bicicleta para a aula). No entanto, eles são instruídos a não realizar nenhum exercício moderado a extenuante durante e 72h antes do início da sessão experimental. Além disso, nenhum tipo de exercício é permitido 24h antes da coleta das biópsias musculares.

Os participantes recebem uma refeição padronizada (1200 kcal; 180 g de CHO, 33 g de gordura, 45 g de proteína) na noite anterior ao EE, bem como na noite anterior à coleta da biópsia muscular. Nos dias de teste, quando os participantes devem se apresentar ao laboratório em jejum, um café da manhã (500 kcal) é fornecido após a conclusão de todas as medições. O mesmo café da manhã é servido 1 hora antes do início da EE. Além disso, os participantes completam um diário alimentar diariamente, começando após as medições iniciais, a fim de verificar possíveis variações alimentares entre as condições. As análises dietéticas são realizadas usando uma plataforma web para registro dietético e análise da composição de macronutrientes e micronutrientes (https://mijn.voedingscentrum.nl/nl/eetmeter/). Os participantes não estão autorizados a consumir bebidas alcoólicas ou com cafeína durante as sessões experimentais.

Amostras de sangue O sangue (2x10 mL) é coletado de uma veia do braço (sistema Venoject) e o plasma ou soro é imediatamente separado por centrifugação. As amostras de plasma e soro são distribuídas em diferentes alíquotas de 1 mL e armazenadas a -20°C até o uso para ensaios bioquímicos em uma data posterior. As amostras de sangue são coletadas na linha de base, imediatamente antes do EE e 24, 48, 72, 96 e 120h após o EE em jejum.

As amostras de plasma são analisadas por Ensaio de Imunoabsorção Enzimática (ELISA) específico apropriado para CK (marcador de dano muscular), IL-6 e TNFalfa (ambos marcadores de inflamação sistêmica). As concentrações de PEA são avaliadas por cromatografia líquida de alta eficiência com espectrometria de massa em tandem. Ensaios adicionais em amostras de sangue podem ser realizados se julgados relevantes após a realização das análises primárias. Após todas as análises terem sido realizadas, qualquer amostra residual é armazenada por um período adicional de 3 anos antes de ser permanentemente destruída.

Biópsias musculares As biópsias musculares são coletadas na linha de base e 48h após EE da perna dominante em estado de jejum. Portanto, um total de 4 biópsias por indivíduo é feito ao longo do estudo. As biópsias são feitas por um médico experiente (Dr. Ruud Van Thienen) do m. vasto lateral da perna treinada usando uma agulha de Bergström com diâmetro de 5 mm conforme descrito anteriormente (29). Resumindo, uma pequena incisão (~ 5 mm) é feita na pele e na fáscia subjacente sob anestesia local (lidocaína, 1 ml) para facilitar a penetração suave da agulha no ventre muscular. Uma vez que a agulha é colocada dentro do ventre muscular, um tubo e uma seringa são conectados à extremidade superior da agulha, que é usada para criar um vácuo pelo qual o músculo é puxado para dentro da agulha. Nesse ponto, um movimento suave de torção para baixo da parte interna da agulha corta o tecido para obter a amostra do músculo. Após o corte do tecido (~ 150-300 mg de músculo), as amostras são liberadas de qualquer sangue visual e tecido conjuntivo antes de serem congeladas em nitrogênio líquido. A incisão que foi feita na pele será fechada com fitas adesivas (steristrips) e enfaixada com esparadrapo à prova d'água. Os participantes usarão o gesso por 5 dias antes de serem autorizados a retirá-lo. Durante esses 5 dias, os participantes podem tomar banho, mas serão instruídos a não imergir ou mergulhar o gesso (ou seja, tomar banho ou nadar). Os participantes serão avisados ​​sobre o fato de que o procedimento de biópsia muscular deixa uma pequena cicatriz de aproximadamente 5 mm que provavelmente ficará invisível após um ou dois anos. Além disso, a anestesia local garante que não haja sensação de dor durante o procedimento, mas os sensores mecânicos nos músculos permanecem sensíveis. Como tal, os participantes podem sentir a sensação de pressão, mas não de dor. Após o procedimento, o músculo pode ficar rígido por um ou dois dias.

As biópsias musculares são analisadas bioquimicamente em nosso laboratório (laboratório de pesquisa em Fisiologia do Exercício, KU Leuven) para parâmetros de inflamação muscular, estresse, regeneração e anabolismo.

Contração voluntária máxima (CVM) dos extensores do joelho O torque isométrico, excêntrico e concêntrico dos extensores do joelho da perna treinada é medido usando um dinamômetro isocinético (cfr. (28)) no início e 24, 48, 72 e 120h após o EE. Resumindo, os participantes estão sentados com a parte superior do corpo amarrada à cadeira para estabilizar o tronco e a perna treinada amarrada ao braço de alavanca. Para o pico de contração voluntária isométrica máxima, a articulação do joelho é colocada em um ângulo de 90⁰. Os participantes são instruídos a contrair ao máximo os extensores do joelho e mantê-los por 3 segundos. A contração voluntária excêntrica e concêntrica máxima é medida a uma velocidade angular de 30⁰/s e uma amplitude de movimento entre 180-60⁰ (onde 180⁰ se refere à extensão total). Cada movimento é executado três vezes com 60 segundos de descanso entre as tentativas. O valor máximo de pico de torque obtido entre as tentativas é usado para análise.

Salto com movimento contrário Os participantes executam um salto com movimento contrário (CMJ) em uma plataforma de força (SMARTJUMP, Fusion sport, Nottingham, Reino Unido) na linha de base e 24, 48, 72 e 120h após o EE. Os participantes são solicitados a assumir uma posição ereta (ângulo do joelho de 180⁰) com os pés na largura do quadril antes de iniciar um movimento descendente para a posição de agachamento (ângulo do joelho de 90⁰), após o qual eles saltam verticalmente para a altura máxima. Os participantes são instruídos a colocar as mãos nos quadris e manter o corpo ereto durante todo o salto. O CMJ é executado três vezes com 60 segundos de descanso entre as tentativas. O salto mais alto registrado é usado para análise.

Salto agachado Os participantes realizam um salto agachado (SJ) em uma plataforma de força na linha de base e 24, 48, 72 e 120h após o EE. Os participantes são solicitados a começar em uma posição de agachamento (ângulo do joelho de 90⁰) e mantê-la por 3 segundos antes de saltar verticalmente para a altura máxima. Os participantes são instruídos a colocar as mãos nos quadris e manter o corpo ereto durante todo o salto. O SJ é executado três vezes com 60 segundos de descanso entre as tentativas. O salto mais alto registrado é usado para análise.

Dor muscular A dor muscular da perna treinada é avaliada na linha de base, imediatamente antes do EE e 24, 48, 72, 96 e 120h após o EE usando uma escala visual analógica (VAS). Os participantes são solicitados a manter uma posição de agachamento por 3 segundos com as mãos nos quadris e marcar sua percepção de dor muscular em uma escala representada por uma linha de 100 mm, na qual a extrema esquerda representa "sem dor" enquanto a extrema direita representa 'dor extrema'.

Qualidade e quantidade do sono Na linha de base, a higiene habitual do sono dos participantes é avaliada usando o Índice de Qualidade do Sono de Pittsburgh. Além disso, os participantes completam o questionário do St. Mary's Hospital diariamente para avaliar a qualidade e a quantidade de sono da noite anterior, começando na noite anterior às medições da linha de base. O questionário do St. Mary's Hospital mostrou ser uma ferramenta confiável para avaliar o sono da noite anterior de um sujeito.