成人コホート向けの抗体プラットフォームのハイスループット血清学的検査 (DEVHISE)

Orthomyxoviridae、Flaviviridae、およびCoronaviridaeは、今後数年間でパンデミック/流行剤が出現すると予想されるウイルス科です。 特に、H5N1サブタイプとMERS-COVの高病原性鳥インフルエンザウイルスは、動物の感染症が動物で風土病である世界の広大な地域で、人間の散発性感染を引き起こすことが知られている呼吸器ウイルスです。 これらの病原体は、人間へのフィットネスを高める可能性、他の呼吸器と再協力/再結合する能力、および人間から人間への伝播能力を獲得する予測不可能な可能性を考慮して、世界保健機関の優先度リストに載っています。 ジカやデング熱、USUTU、またはマヤロウイルスなどの他のエキゾチックな獣化生態栄養吸虫性フラビウイルスは呼吸病原体ではありませんが、気候変動に関連する温度の上昇により、ヨーロッパ地域はこれらのウイルスの導入と維持のためのより有利な生態学的空間になります。

大量スクリーニングのための血清学的なハイスループットプラットフォームの開発は、パンデミックシナリオの準備を高めるための基本的な要素です。 大規模な緊急セロシュサービーの場合、サンプリング技術の革新は、成人と小児集団の両方の被験者の登録を促進するためにしばしば無視されているが関連する側面です。 venipunctureは、血液をサンプリングするためのゴールドスタンダードと見なされます。 それにもかかわらず、この方法にはいくつかの重要な欠点が含まれています：収集される大きなボリューム（1 mLを超える）、その侵襲性、それを実行するための専門的な人員の必要性、および病原体への曝露の潜在的なリスク（コストに影響を与える）（コストに影響を与える）（Bossi etal。2024でレビュー）。

その結果、1963年に乾燥した血液スポット（DBS）、血液微小回音法、つまり、通常指と指の刺し傷を通じて導出される毛細血管の血液の少量（≤150μL）の収集が提案されています。 毛細血管サンプリングは、新生児スクリーニング検査と糖尿病患者の標準的な手順であり、静脈瘤は血液サンプリングへの標準的なアプローチであり、特に感染症に対する抗体のスクリーニングを指向したものです。 指とかかとの刺した技術は、利用可能な血清の量が限られているため、中和抗体の滴定と抗体を回収するために必要な扱いにくい実験室プロセスにめったに採用されていません（すなわち、DBSSの穿刺、一晩の脱出など）。

体積チップマイクロサンプリング（VTM）として知られるマイクロサンプリングデバイスは、サンプリングとセルフサンプリングへの新しいアプローチを表しています。 これらのツールは、新生児血液学に一般的に使用されているが、自動化の容易さとサンプルボリュームの標準化の利点があるDBS（つまり、フィルターペーパー）と同じ目的を果たします。 さらに、VTMは、ベニプルティックが不可能であり、物流障害がサンプルの保管に挑戦するリモートの非専門センターや国内環境で特に有益です。

VTMは、サンプルの正しい定量化を可能にする方法です。 ヘマトクリットは、湿度や乾燥条件などの他のパラメーターとともに、DBSの分析物のスポットサイズ、スポットの均一性、および抽出回収に影響を与え、分析対象物の定量化を必要とする手順には不十分になります（Thangavelu etal。2023でレビュー）。 さらに、DBSの基本的なコンポーネントである濾紙の特性は、「最大負荷能力、血液拡散性、クロマトグラフィー効果、分析物の安定性、回復」に影響を与えることにより、さらなるバイアスを導入できます。 （Thangavelu etal。2023でレビュー）。

流行の緊急事態の間、研究所は、技術的および物流上の制約による中和抗体の検出と滴定の大量の要求をめったに満たすことはめったにありません。 したがって、このような要求を満たすために、研究所の能力を拡大する必要があります。 血清学的調査のハブの場合、既存の手法を拡大するには、自動化の分野（すなわち、液体処理ワークステーションの使用）の開発と、標準の96ウェルプレートに基づく384ウェルプレート技術への血清学的アッセイからの移行が必要です。 384形式での作業は、容量のスケールアップの必要性を満たすだけでなく、サンプルの最小限の作業量を減らすこともできます。 このような作業量の減少は、VTMを介して収集されたサンプルで実行されるアッセイの感度を高めるための正の要素です（つまり、より高い作業量を満たすために溶出措置を回避します）。 さらに、血液の量が少ないことは、小児患者の長い拘束に関連する苦痛を最小限に抑えることを意味します（つまり、2つまたは3つではなく1滴の血液）。

毛細血管の収集のためのDBSの代替としてのVTMの使用に関する文献は限られています。 VTMは、主に、ヘマトバイオ化学および代謝プロファイリング分析の性能に関してVenipunctureによって得られた血清サンプルと比較されています。 1つの研究のみが、静脈積みまたはVTMで得られたサンプルを使用して、呼吸器合胞体ウイルス（RSV）に対する抗体を標的とする中和アッセイのパフォーマンスを比較して、VTMがウイルス中和アッセイのために血液サンプルを収集および貯蔵するのに適切なデバイスであることを発見しました（Terstappen et al。、2023）。

レンチウイルス発現システム中和アッセイを使用して、Roperと共著者は2023年に、ろ紙のDBSがSARS-COV-2に対する中和抗体の存在を評価する際に患者が一致した血清に同様の結果をもたらすことを証明しました。 それにもかかわらず、血液スポットのカットアウトサイズのばらつきに関連して、感度の問題が観察されました。 2021年、Sancilioと共著者は、SARS-COV-2とヒトアンジオテンシン融解酵素2受容体タンパク質の間の相互作用の阻害を定量化し、SARS-COV-2 PCR陽性および陰性サンプルからの併用性サンプルの併用標本の併用性相関が並行していたことを実証したことを実証し、サルゲートウイルス中和試験（SVNT）に依存しました。

さまざまな血液マイクロサンプリング方法の中で、「MITRAデバイス。これは、MITRAの特許取得済みの体積吸収マイクロサンプリング（VAMS®）テクノロジーに基づいた独自の親水性ポリマーチップに接続されたプラスチックサンプラーを含む」（Thangavelu etal。2023）は、それが他のvtmをコレクションにするために、より高等容量を伴うため、より高等な体積を与えるために存在するためです。 MITRAデバイスは、96枚のautorackと自動液体処理システムと互換性があり、高スループット方法に非常に示されています。 Kok and Fillet's Review（2018）によると、「[a]クロスラボリー研究は、VAMS技術がヘマトクリットに関係なく正確で正確な血液量の収集を可能にすることを示した」。 他のマイクロサンプリングデバイスと同様に、MITRA VAMはセルフサンプリングを可能にし、最小限の侵襲的です。 ただし、これらの利点を超えて、これらのデバイスにはさらなるデバイスがあります。他のほとんどのマイクロサンプリングデバイスと比較して、より多くの血液量を収集できます。そして、上記のように、それらはハイスループットプロセスと非常に互換性があります。 これらの特性により、パンデミックの準備と反応の顕著な候補者になります。 実際、MITRA VAMは、SARS-COV-2に対する抗体の検出と滴定を目的とした手順に使用されています（例：Johnson etal。2022; Whitcombe et al。、2020; Wang etal。2020; Klumpp-Thomas etal。2021）。

この研究の目的は、地域レベルと国家レベルの両方での準備能力を高めるためのパンデミックの可能性を伴う呼吸ウイルスの出現と再出現のためのIZSVE 384-Formatハイスループット中和アッセイで開発することを目的としています。 この診断プラットフォームには、診断手順のために血液サンプルを収集するためのMITRA VAMSデバイスの検証が含まれます。

主な目的：成人集団の実世界のシナリオにおける流行性のウイルス性感染性疾患の中和抗体の検出のためのマイクロサンプリング装置（MITRA VAM）の診断診療での使用を検証します。

二次目標：パンデミックポテンシャル（H5N1、H3N8、H9N2など）、MERS-COVおよびZikaウイルスに関連する鳥インフルエンザ株に対する中和抗体の検出のためのハイスループット血清学的プラットフォームを開発します。

臨床研究は、横断的研究として実施されます。

この研究は横断的です。 これにより、実際の設定でアッセイの診断パフォーマンスを評価し、潜在的な交絡変数を特定できます。 マイクロサンプリングデバイスを検証するために、日常的な診断目的または職業医師による定期的な健康診断のいずれかのために静脈障害にさらされる62人の成人患者を登録します。 このため、静脈瘤手順は介入と見なされるべきではありません。 この研究では、介入はランセット（つまり、指刺されたもの）を使用した毛細管のサンプリングでのみ構成されます。 この比較は、インフルエンザA型（すなわち、PDMH1N1やH3N2などの季節インフルエンザ株）やSARS-COV-2などの風土病ウイルスに対する抗体の滴定に焦点を当てます。 H3およびH5サブタイプ、Zikaウイルス、およびMERS-COVの鳥インフルエンザウイルスなどの新興病原体に対する中和抗体を滴定するために、同じ血清学的アッセイが開発されます。

この研究は、欧州連合が資金提供したヴェルディ（妊娠および小児科コホートのSARS-Cov2バリアント評価）プロジェクトの一部です。