Teste sorológico de alto rendimento da plataforma de anticorpos para coortes de adultos (DEVHISE)

Orthomyxoviridae, flaviviridae e coronaviridae são famílias virais das quais um agente pandêmico/epidêmico deverá emergir nos próximos anos. Em particular, os vírus influenza aviários altamente patogênicos do subtipo H5N1 e MERS-CoV são vírus respiratórios que são conhecidos por causar infecções esporádicas em humanos em vastas áreas do mundo onde essas infecções são endêmicas em animais. Esses patógenos estão na lista de alta prioridade da Organização Mundial da Saúde, devido ao seu potencial de aumentar sua aptidão nos seres humanos, sua capacidade de reafirmar/recombinar com outros agentes respiratórios e o potencial imprevisível de obter habilidades de transmissão humano a humano. O zika e outros flavivírus zoonóticos exóticos, como dengue, vírus Usutu ou Mayaro, não são patógenos respiratórios, mas as temperaturas crescentes associadas às mudanças climáticas estão tornando a região européia um espaço ecológico mais favorável para a introdução e manutenção desses vírus.

O desenvolvimento de uma plataforma sorológica de alto rendimento para triagem em massa é um elemento fundamental no aumento da preparação para cenários pandêmicos. No caso de grandes seressuradores de emergência, a inovação nas técnicas de amostragem é um aspecto muitas vezes negligenciado, mas relevante, para facilitar a inscrição de indivíduos em populações adultas e pediátricas. A punção venosa é considerada o padrão -ouro para amostrar sangue. No entanto, esse método inclui várias desvantagens importantes: o grande volume que é coletado (excedendo 1 mL), sua invasividade, a necessidade de um ambiente estéril e o pessoal especializado para executá -lo e o risco potencial de exposição a patógenos, que exige um grande esforço na preparação da amostra e nas condições de envio (afetando os custos) (revisado em Bossi et al.

Como resultado, a partir de 1963 com manchas de sangue seco (DBSS), foram propostos métodos de micro -amostragem sanguínea, ou seja, a coleta de pequenos volumes (≤150 μl) de sangue capilar derivado geralmente através de uma picada no dedo, foram propostos. A amostragem capilar é um procedimento padrão para testes de triagem neonatal e pacientes diabéticos, enquanto a punção venosa é a abordagem padrão da amostragem de sangue e, em particular, para aqueles orientados para a triagem de anticorpos contra doenças infecciosas. As técnicas de dedo e salto raramente foram adotadas para a titulação de anticorpos neutralizantes devido ao volume limitado de soros disponíveis e ao complicado processo de laboratório necessário para recuperar anticorpos (ou seja, perfurar os DBSs, eluindo os pontos da noite para o dia, etc.).

Os dispositivos de micro-amostragem, conhecidos como micro-amostragem de ponta volumétrica (VTM), representam uma abordagem nova para amostragem e auto-amostragem. Essas ferramentas servem ao mesmo objetivo que o DBS (ou seja, papéis de filtro), que tem sido comumente usado para a hematologia neonatal, mas com a vantagem da facilidade de automação e a padronização dos volumes da amostra. Além disso, o VTM pode ser particularmente benéfico em centros não especializados e ambientes domésticos onde a função venosa não é possível e onde os impedimentos logísticos desafiam o armazenamento de amostras.

O VTM é um método que permite uma quantificação correta da amostra. O hematócrito, juntamente com outros parâmetros, como umidade e condições de secagem, influenciam o tamanho do ponto, a homogeneidade do ponto e a recuperação de extração de analitos em DBS, tornando -o inadequado para procedimentos que requerem quantificação de analitos (revisados ​​em Thangavelu et al. 2023). Além disso, as propriedades do papel de filtro, um componente fundamental do DBS, podem introduzir mais viés, influenciando "a capacidade máxima de carregamento, a propagabilidade do sangue, os efeitos cromatográficos, a estabilidade e a recuperação do analito". (revisado em Thangavelu et al. 2023).

Durante emergências epidêmicas, os laboratórios raramente atendem a solicitações de alto volume para a detecção e titulação de anticorpos neutralizantes devido a restrições técnicas e logísticas. Portanto, é necessário ampliar as capacidades dos laboratórios para atender a essas solicitações. No caso de um cubo para pesquisas sorológicas, a ampliação das técnicas existentes requer desenvolvimentos no campo da automação (ou seja, o uso de estações de trabalho de manuseio líquido) e a transição de um ensaio sorológico com base na placa padrão de 96 poços para uma tecnologia de placas de 384 poços. Trabalhar com o formato 384 não apenas atende à necessidade de expansão da capacidade, mas também permite uma redução no volume mínimo de trabalho da amostra. Essa redução dos volumes de trabalho seria um elemento positivo para aumentar a sensibilidade dos ensaios realizados em amostras coletadas através da VTM (isto é, evitando etapas de eluição para atender aos volumes de trabalho mais altos). Além disso, volumes mais baixos de sangue implicam minimizar o sofrimento associado a longas restrições de pacientes pediátricos (isto é, uma gota de sangue em vez de dois ou três).

Há um corpo limitado de literatura sobre o uso do VTM como alternativa ao DBS para a coleta de sangue capilar. O VTM foi comparado principalmente às amostras de soro obtidas por punção venosa em relação ao desempenho das análises de perfil hemato-bioquímico e metabólico. Apenas um estudo comparou o desempenho de um ensaio de neutralização que direciona anticorpos contra o vírus sincicial respiratório (RSV) usando amostras obtidas por fuga venosa ou com VTM, descobrindo que o VTM era um dispositivo adequado para coletar e armazenar amostras de sangue para ensaios de neutralização viral (Terstappen et al.. 2023).

Utilizando um ensaio de neutralização do sistema de expressão lentiviral, o ROPER e os co-autores provaram em 2023 que o DBS em papel de filtro forneceu resultados semelhantes aos soros correspondentes ao paciente na avaliação da presença de anticorpos neutralizantes contra SARS-CoV-2. No entanto, foram observados problemas de sensibilidade em conexão com a variabilidade do tamanho do recorte de manchas sanguíneas. Em 2021, o Sancilio e os co-autores confiaram em um teste de neutralização de vírus substituto (SVNT) que quantificou a inibição da interação entre SARS-CoV-2 se a enzima de conversão de angiotensina humana de sosselos de 1,508.

Entre diferentes métodos de micro -amamplicação sanguínea, "o dispositivo Mitra, que compreende um amostrador de plástico preso a uma ponta de polímero hidrofílico proprietário com base na micro -amostragem de absorção volumétrica patenteada da MITRA (VAMS®) de que a tecnologia de Blowing de Blower a mais do que os volumes de sangue" (Thangavelu et al. 2023) se destaca por volumos mais altos. Os dispositivos Mitra são compatíveis com 96-Autoracks e sistemas automatizados de manuseio líquido, tornando-os excepcionalmente indicados para métodos de alto rendimento. De acordo com a revisão de Kok e Fillet (2018), "[um] estudo entre laboratório mostrou que a tecnologia VAMS permite a coleta de um volume de sangue preciso e preciso, independentemente do hematócrito". Como outros dispositivos de micro-amostragem, o Mitra VAMS permite a auto-amostra e é minimamente invasivo. No entanto, além dessas vantagens, esses dispositivos possuem outros: em comparação com a maioria dos outros dispositivos de micro -amostragem, é possível coletar maiores volumes sanguíneos; E, como observado acima, eles são excepcionalmente compatíveis com processos de alto rendimento. Esses traços os tornam candidatos notáveis ​​à preparação e resposta da pandemia. De fato, os VAMs de Mitra têm sido utilizados para procedimentos que visam detectar e titular anticorpos contra SARS-CoV-2 (por exemplo, Johnson et al. 2022; Whitcombe et al., 2020; Wang et al. 2020; Klumpp-Thomas et al. 2021).

Este estudo tem como objetivo se desenvolver nos ensaios de neutralização de alto rendimento IZSVE 384 para vírus respiratórios emergentes e reemergentes com potencial pandêmico para aumentar a capacidade de preparação nos níveis regional e nacional. Esta plataforma de diagnóstico incluirá a validação dos dispositivos Mitra VAMS para coletar amostras de sangue para o procedimento de diagnóstico.

Objetivo Primário: Valide o uso na prática diagnóstica de dispositivos de micro-amostragem (Mitra VAMs) para a detecção de anticorpos neutralizantes para doenças infecciosas virais da natureza epidêmica em um cenário do mundo real para populações adultas.

Objetivo secundário: Desenvolva uma plataforma sorológica de alto rendimento para a detecção de anticorpos neutralizantes contra cepas de influenza aviária associadas ao potencial pandêmico (H5N1, H3N8, H9N2, etc), vírus Mers-Cov e Zika.

O estudo clínico será realizado como um estudo transversal.

Este estudo será transversal. Isso nos permitirá avaliar o desempenho diagnóstico do ensaio em uma configuração do mundo real e identificar possíveis variáveis ​​de confusão. Para validar o dispositivo de micro -amostragem, matricularemos 62 pacientes adultos que serão submetidos a funções venosa para fins de diagnóstico de rotina ou exames médicos de rotina pelo médico ocupacional. Por esse motivo, os procedimentos de punção venosa não devem ser considerados como uma intervenção. Neste estudo, a intervenção consistirá apenas em amostragem capilar com uma lancet (isto é, picada de dedos). Essa comparação se concentrará na titulação de anticorpos contra vírus endêmicos como a influenza tipo A (isto é, cepas de influenza sazonal, como PDMH1N1 ou H3N2) e SARS-COV-2. O mesmo ensaio sorológico será desenvolvido para titular anticorpos neutralizantes contra patógenos emergentes, como os vírus da influenza aviária dos subtipos H3 e H5, vírus zika e Mers-Cov.

O estudo faz parte do projeto Verdi (SARS-Cov2 Variants em coortes de gravidez e pediatria) financiado pela União Europeia.