Prueba serológica de alto rendimiento de la plataforma de anticuerpos para cohortes para adultos (DEVHISE)

Orthomyxoviridae, Flaviviridae y Coronaviridae son familias virales de las cuales se espera que surja un agente de pandemia/epidemia en los próximos años. En particular, los virus de la influenza aviar altamente patógenos del subtipo H5N1 y MERS-CoV son virus respiratorios que se sabe que causan infecciones esporádicas en humanos en vastas áreas del mundo donde estas infecciones son endémicas en los animales. Estos patógenos están en la lista de alta prioridad de la Organización Mundial de la Salud, dado su potencial para aumentar su estado físico en los humanos, su capacidad para volver a armar/recombinar con otros agentes respiratorios y el potencial impredecible para obtener habilidades de transmisión de humanos a humanos. El Zika y otros flavivirus zoonóticos exóticos como el dengue, Usutu o los virus de Mayaro no son patógenos respiratorios, pero las temperaturas crecientes asociadas con el cambio climático están haciendo de la región europea un espacio ecológico más favorable para la introducción y el mantenimiento de estos virus.

El desarrollo de una plataforma serológica de alto rendimiento para la detección de masas es un elemento fundamental para aumentar la preparación para los escenarios de pandemia. En el caso de grandes serosurvas de emergencia, la innovación en las técnicas de muestreo es un aspecto a menudo descuidado pero relevante para facilitar la inscripción de sujetos en poblaciones de adultos y pediátricos. La venipunción se considera el estándar de oro para el muestreo de sangre. No obstante, este método incluye varios inconvenientes importantes: el gran volumen que se recopila (superior a 1 ml), su invasividad, la necesidad de un entorno estéril, así como personal especializado para realizarlo, y el riesgo potencial de exposición a los patógenos, lo que exige un gran esfuerzo en la preparación de muestras y las condiciones de envío (que afectan los costos) (revisado en Bossi et al. 2024).

Como resultado, a partir de 1963 con manchas sanguíneas secas (DBSS), métodos de micros muestreadores de sangre, es decir, la recolección de pequeños volúmenes (≤150 μl) de sangre capilar derivada generalmente a través de un pinchazo de dedos. El muestreo capilar es un procedimiento estándar para las pruebas de detección neonatal y los pacientes diabéticos, mientras que la venipunción es el enfoque estándar del muestreo de sangre y, en particular, para aquellos orientados a la detección de anticuerpos contra enfermedades infecciosas. Las técnicas del dedo y el talón raramente se han adoptado para la titulación de anticuerpos neutralizantes debido al volumen limitado de sueros disponibles y el engorroso proceso de laboratorio requerido para recuperar anticuerpos (es decir, perforar DBSS, eluir las manchas de la noche a la mañana, etc.).

Los dispositivos de micros muestreadores, conocidos como micros muestreadores de punta volumétrica (VTM), representan un enfoque novedoso para el muestreo y el auto-muestreo. Estas herramientas tienen el mismo propósito que el DBS (es decir, los documentos de filtro), que se ha utilizado comúnmente para la hematología neonatal, pero con la ventaja de la facilidad de automatización y la estandarización de los volúmenes de muestra. Además, VTM puede ser particularmente beneficioso en los centros remotos no especializados y los entornos domésticos donde no es posible la punción venosa y donde los impedimentos logísticos desafían el almacenamiento de muestras.

VTM es un método que permite una cuantificación correcta de la muestra. El hematocrito, junto con otros parámetros, como las condiciones de humedad y secado, influyen en el tamaño de la mancha, la homogeneidad del punto y la recuperación de la extracción de los analitos en DBS, lo que lo hace inadecuado para los procedimientos que requieren cuantificación de analitos (revisados ​​en Thangavelu et al. 2023). Además, las propiedades del papel de filtro, un componente fundamental de DBS, pueden introducir un sesgo adicional al influir en "la capacidad de carga máxima, la propagación de la sangre, los efectos cromatográficos, la estabilidad del analito y la recuperación". (revisado en Thangavelu et al. 2023).

Durante las emergencias de la epidemia, los laboratorios rara vez cumplen con las solicitudes de alto volumen para la detección y la titulación de anticuerpos neutralizantes debido a restricciones técnicas y logísticas. Por lo tanto, existe la necesidad de ampliar las capacidades de los laboratorios para satisfacer tales solicitudes. En el caso de un centro para encuestas serológicas, la ampliación de las técnicas existentes requiere desarrollos en el campo de la automatización (es decir, el uso de estaciones de trabajo de manejo de líquidos) y la transición de un ensayo serológico basado en la placa estándar de 96 pocillos a una tecnología de placa de 384 pocillos. Trabajar con el formato 384 no solo satisface la necesidad de escala de capacidad, sino que también permite una reducción en el volumen de trabajo mínimo de la muestra. Tal reducción de los volúmenes de trabajo sería un elemento positivo para aumentar la sensibilidad de los ensayos realizados en las muestras recolectadas a través de VTM (es decir, evitar pasos de elución para cumplir con los volúmenes de trabajo más altos). Además, los volúmenes más bajos de sangre implican minimizar la angustia asociada con largas restricciones de pacientes pediátricos (es decir, una gota de sangre en lugar de dos o tres).

Hay un cuerpo limitado de literatura sobre el uso de VTM como alternativa a los DBS para la recolección de sangre capilar. VTM se ha comparado principalmente con las muestras de suero obtenidas por venipunción con respecto al rendimiento de los análisis de perfiles hemato-bioquímicos y metabólicos. Solo un estudio comparó el rendimiento de un ensayo de neutralización dirigido a anticuerpos contra el virus sincitial respiratorio (RSV) utilizando muestras obtenidas por Venipunce o con VTM, encontrando que VTM era un dispositivo adecuado para recolectar y almacenar las muestras de sangre para ensayos de neutralización viral (Terstappen et al., 2023).

Utilizando un ensayo de neutralización del sistema de expresión lentiviral, Roper y coautores demostraron en 2023 que los DBS en el papel de filtro entregaron resultados similares a los sueros emparejados con el paciente para evaluar la presencia de anticuerpos neutralizantes contra SARS-CoV-2. No obstante, se observaron problemas de sensibilidad en relación con la variabilidad del tamaño de recorte de puntos de sangre. En 2021, Sancilio y los coautores se basaron en una prueba de neutralización de virus sustitutas (SVNT) que cuantificó la inhibición de la interacción entre SARS-CoV-2 S y la enzima humana convertidora de angiotensina en la proteína del receptor 2 del 99% de la sertura de la sertura del 999% de emparejado con emparejado.

Entre los diferentes métodos de micros de muestreo sanguíneo, "el dispositivo Mitra, que comprende una muestra de plástico unida a una punta de polímero hidrofílico patentado basado en el microsamplio volumétrico patentado de MITRA (VAMS®) Tecnología" (Thangavelu et al. 2023) se destaca porque permite que sean más volúmenes de sangre que se recopilan a otros VtmedMedMedmed. Los dispositivos MITRA son compatibles con 96 eutoracks y sistemas automatizados de manejo de líquidos, lo que los hace excepcionalmente indicados para métodos de alto rendimiento. Según la revisión de Kok y Fillet (2018), "[un] estudio de laboratorio cruzado mostró que la tecnología VAMS permite la recolección de un volumen sanguíneo preciso y preciso independientemente del hematocrito". Al igual que otros dispositivos de micros muestreadores, Mitra VAMS permite el auto-muestreo y es mínimamente invasivo. Sin embargo, más allá de estas ventajas, estos dispositivos tienen otros más: en comparación con la mayoría de los otros dispositivos de micros muestreadores, se pueden recolectar mayores volúmenes de sangre; y, como se señaló anteriormente, son excepcionalmente compatibles con los procesos de alto rendimiento. Estos rasgos los convierten en candidatos notables para la preparación y respuesta de la pandemia. De hecho, los VAM de Mitra se han utilizado para procedimientos con el objetivo de detectar y titular anticuerpos contra SARS-CoV-2 (por ejemplo, Johnson et al. 2022; Whitcombe et al., 2020; Wang et al. 2020; Klumpp-Thomas et al. 2021).

Este estudio tiene como objetivo desarrollar en ensayos de neutralización de alto rendimiento de 384 formatos para los virus respiratorios emergentes y reemergentes con potencial pandémico para aumentar la capacidad de preparación a nivel regional y nacional. Esta plataforma de diagnóstico incluirá la validación de dispositivos Mitra VAMS para recolectar muestras de sangre para el procedimiento de diagnóstico.

Objetivo primario: valida el uso en la práctica de diagnóstico de los dispositivos de micros muestreadores (VAM MITRA) para la detección de anticuerpos neutralizantes para enfermedades infecciosas virales de la naturaleza epidémica en un escenario del mundo real para poblaciones adultas.

Objetivo secundario: Desarrolle una plataforma serológica de alto rendimiento para la detección de anticuerpos neutralizantes contra cepas de influenza aviar asociadas con el potencial pandémico (H5N1, H3N8, H9N2, etc.), el virus MERS-CoV y Zika.

El estudio clínico se realizará como un estudio transversal.

Este estudio será transversal. Nos permitirá evaluar el rendimiento diagnóstico del ensayo en un entorno del mundo real e identificar posibles variables de confusión. Para validar el dispositivo de micros muestreadores, inscribiremos a 62 pacientes adultos que serán sometidos a venipunción con fines de diagnóstico de rutina o exámenes médicos de rutina por parte del médico ocupacional. Por esta razón, los procedimientos de administración venosa no deben considerarse como una intervención. En este estudio, la intervención consistirá solo en muestreo capilar con un lanceta (es decir, pinchazo de dedo). Esta comparación se centrará en la titulación de anticuerpos contra virus endémicos como la influenza tipo A (es decir, cepas de influenza estacionales, como PDMH1N1 o H3N2) y SARS-CoV-2. El mismo ensayo serológico se desarrollará para valorar los anticuerpos neutralizantes contra los patógenos emergentes como los virus de la influenza aviar de los subtipos H3 y H5, el virus del Zika y Mers-Cov.

El estudio es parte del proyecto Verdi (evaluación de variantes SARS-CoV2 en las cohortes de embarazo y pediatría) financiado por la Unión Europea.