Serologische Tests der Antikörperplattform für Erwachsene Kohorten mit hohem Durchsatz (DEVHISE)

Orthomyxoviridae, Flaviviridae und Coronaviridae sind virale Familien, aus denen in den kommenden Jahren ein Pandemie/Epidemie -Mittel zu erwarten ist. Insbesondere hochpathogene Vogel-Influenzaviren des H5N1-Subtyps und MERS-CoV sind Atemwegsviren, von denen bekannt ist, dass sie sporadische Infektionen beim Menschen in weiten Bereichen der Welt verursachen, in denen diese Infektionen bei Tieren endemisch sind. Diese Krankheitserreger stehen auf der Liste mit hoher Priorität der Weltgesundheitsorganisation angesichts ihres Potenzials, ihre Fitness beim Menschen zu erhöhen, ihre Fähigkeit, sich mit anderen Atemmaklern zu verwirklichen, und das unvorhersehbare Potenzial, Übertragungsfähigkeiten von Menschen zu Menschen zu gewinnen. Zika und andere exotische zoonotische Flaviviren wie Dengue-, Usutu- oder Mayaro -Viren sind keine Atempathogene, sondern die mit dem Klimawandel verbundenen steigenden Temperaturen machen die europäische Region zu einem günstigeren ökologischen Raum für die Einführung und Aufrechterhaltung dieser Viren.

Die Entwicklung einer serologischen Hochdurchsatzplattform für das Massen-Screening ist ein grundlegendes Element für die zunehmende Bereitschaft für pandemische Szenarien. Bei großen Notfallserosurveys ist Innovationen in den Stichprobentechniken häufig vernachlässigt, aber relevanter Aspekt, um die Aufnahme von Probanden sowohl in erwachsenen als auch in pädiatrischen Bevölkerungsgruppen zu erleichtern. Die Venenpunktion gilt als Goldstandard für die Probenahme von Blut. Diese Methode enthält jedoch mehrere wichtige Nachteile: das große Volumen, das gesammelt wird (über 1 ml), deren Invasivität, die Notwendigkeit einer sterilen Umgebung sowie spezialisiertes Personal zur Durchführung von IT -Durchführung und das potenzielle Risiko einer Exposition gegenüber Krankheitserregern, die große Anstrengungen in der Vorbereitung und den Versandbedingungen erfordern (überprüftes Gebrauch) (überprüft in Bossi et al. 2024).

Infolgedessen wurden ab 1963 mit trockenen Blutflecken (DBS) Blutmikrosampling -Methoden vorgeschlagen, dh die Ansammlung kleiner Volumina (≤150 & mgr; l) von Kapillarblut, die normalerweise durch einen Fingerstich stammt, vorgeschlagen. Kapillarprobenahme ist ein Standardverfahren für Neugeborenen -Screening -Tests und Diabetiker, während Venenpunktion der Standardansatz zur Blutprobenahme und insbesondere für diejenigen ist, die sich an das Screening von Antikörpern gegen Infektionskrankheiten ausgerichtet haben. Die Finger- und Fersen-Prick-Techniken wurden aufgrund des begrenzten Volumens der verfügbaren Seren und dem umständlichen Laborprozess, die zur Wiederherstellung von Antikörpern (d. H. Durchstechen von DBS, die Spots über Nacht usw.) erforderlich sind, selten für die Titration neutralisierender Antikörper angewendet.

Mikrosampling-Geräte, die als volumetrische Tipps-Mikrosampling (VTM) bezeichnet werden, stellen einen neuartigen Ansatz für Probenahme und Selbstabtastung dar. Diese Werkzeuge erfüllen den gleichen Zweck wie die DBs (d. H. Filterpapiere), die üblicherweise für die Hämatologie der Neugeborenen verwendet wurden, jedoch mit dem Vorteil der einfachen Automatisierung und der Standardisierung von Probenvolumina. Darüber hinaus kann VTM in entfernten nicht spezialisierten Zentren und inländischen Umgebungen, in denen Venenpunktion nicht möglich ist und in denen logistische Hindernisse die Lagerung von Proben in Frage stellen, besonders vorteilhaft sein.

VTM ist eine Methode, die eine korrekte Quantifizierung der Probe ermöglicht. Hämatokrit beeinflussen zusammen mit anderen Parametern wie Luftfeuchtigkeit und Trocknungsbedingungen die Punktgröße, die Fleckhomogenität und die Gewinnung von Analyten in DBS, was sie für Verfahren unzureichend macht, die eine Quantifizierung von Analyten erfordern (überprüft in Thangavelu et al. 2023). Darüber hinaus können Filterpapiereigenschaften, ein grundlegender Bestandteil von DBS, weitere Verzerrungen durchführen, indem sie "die maximale Belastungskapazität, die Blutverbreitung, die chromatographischen Effekte, die Analytstabilität und die Erholung" beeinflussen. (Übersicht in Thangavelu et al. 2023).

In epidemischen Notfällen erfüllen die Laboratorien aufgrund technischer und logistischer Einschränkungen selten hochvolumige Anfragen zur Erkennung und Titration neutralisierender Antikörper. Daher müssen die Kapazitäten der Laboratorien vergrößert werden, um solche Anfragen zu erfüllen. Bei einem Hub für serologische Umfragen erfordert die Skalierung der vorhandenen Techniken Entwicklungen im Bereich Automatisierung (d. H. Die Verwendung von Workstationen mit flüssigem Handling) und den Übergang von einem serologischen Assay basierend auf der Standardplatte mit 96 Well zu einer 384-Well-Plattentechnologie. Das Arbeiten mit dem 384-Format erfüllt nicht nur die Notwendigkeit des Kapazitätsmaßstabs, sondern ermöglicht auch eine Verringerung des minimalen Arbeitsvolumens der Probe. Eine solche Verringerung der Arbeitsvolumina wäre ein positives Element, um die Empfindlichkeit von Assays zu erhöhen, die an Proben durchgeführt werden, die durch VTM gesammelt wurden (d. H. Die Vermeidung von Elutionsschritten, um höhere Arbeitsvolumina zu erfüllen). Darüber hinaus implizieren niedrigere Blutmengen, die die Belastung minimieren, die mit langwierigen Einschränkungen von pädiatrischen Patienten verbunden ist (d. H. Einen Blutabfall anstelle von zwei oder drei).

Es gibt eine begrenzte Literatur zur Verwendung von VTM als Alternative zu DBS für die Sammlung von Kapillarblut. VTM wurde hauptsächlich mit Serumproben verglichen, die durch Venenpunktion in Bezug auf die Leistung von Hemato-biochemischen und metabolischen Profilierungsanalysen erhalten wurden. Nur eine Studie verglich die Leistung eines Neutralisationstests, der gegen Antikörper gegen das respiratorische Syncytialvirus (RSV) unter Verwendung von Proben unter Verwendung von Venpunktionen oder mit VTM abzielte, und stellte fest, dass VTM ein angemessenes Gerät zum Sammeln und Speichern von Blutproben für virale Neutralisationsstests war (Terstappen et al., 2023).

Unter Verwendung eines lentiviralen Expressionssystem-Neutralisationstests bewiesen Roper und Co-Autoren im Jahr 2023, dass DBS auf Filterpapier ähnliche Ergebnisse wie bei Patienten übereinstimmte Seren bei der Beurteilung des Vorhandenseins neutralisierender Antikörper gegen SARS-COV-2 lieferte. Trotzdem wurden im Zusammenhang mit der Variabilität der Blutfleckgröße Empfindlichkeitsprobleme beobachtet. Im Jahr 2021 stützten sich Sancilio und Co-Autoren auf einen Ersatz-Virus-Neutralisationstest (SVNT), der die Hemmung der Wechselwirkung zwischen SARS-CoV-2 S und humanem Angiotensin-konvertieren Enzym 2-Rezeptor-Protein zeigte, dass die Reaktionen von SARS-COV-2-PCR-positiven und negativen Proben eine Übereinstimmung mit einer Übereinstimmung mit einer Überkordelung der SARS-COV-2 PCR-Proben hatten.

Unter verschiedenen Blutmikrosampling -Methoden "Das Mitra -Gerät, das einen Kunststoff -Probenehmer umfasst, der an einer proprietären hydrophilen Polymerspitze basiert, basierend auf der patentierten volumetrischen Absorption von Mitra (VAMS®) -Technologie (Thangavelu et al. 2023), die es ermöglichen, dass ein höheres VTM -VTM -EDEL -HERWEISE ermöglicht wird, weil es mit einem höheren VTM -VTM -VTM -VTM -VTM -VTM -VTM -VTM -VTM -VTM -VTM -VTM -VOLUMETE -Volumes zu ermöglichen. Mitra-Geräte sind mit 96 Autoracks und automatisierten Flüssigkeitsbehandlungssystemen kompatibel, wodurch sie für Hochdurchsatzmethoden außergewöhnlich angegeben sind. Laut Kok und Fillets Rezension (2018) "zeigten die CREDRAFORATIONS-Studie [A], dass die VAMS-Technologie die Sammlung eines genauen und präzisen Blutvolumens unabhängig vom Hämatokrit ermöglicht." Wie andere Mikrosampling-Geräte ermöglicht Mitra VAMS Selbstabtastung und ist minimal invasiv. Über diese Vorteile hinaus haben diese Geräte jedoch weitere: Im Vergleich zu den meisten anderen Mikrosampling -Geräten kann man größere Blutvolumina sammeln; Und wie oben erwähnt, sind sie außergewöhnlich kompatibel mit Hochdurchsatzprozessen. Diese Eigenschaften machen sie bemerkenswerte Kandidaten für die Pandemie -Vorbereitung und -reaktion. In der Tat wurden Mitra-Vams für Verfahren verwendet, die darauf abzielen, Antikörper gegen SARS-CoV-2 zu erkennen und zu titrieren (z. B. Johnson et al. 2022; Whitcombe et al., 2020; Wang et al. 2020; Klumpp-Thomas et al. 2021).

Diese Studie zielt darauf ab, sich bei IZSVE 384-Format-Hochdurchsatz-Neutralisations-Assays für aufkommende und wieder aufzutrende Atemwegsviren mit Pandemiepotential zur Erhöhung der Vorbereitungskapazität auf regionaler und nationaler Ebene. Diese diagnostische Plattform umfasst die Validierung von Mitra Vams -Geräten für das Sammeln von Blutproben für das diagnostische Verfahren.

Hauptziel: Validieren Sie die Verwendung in der diagnostischen Praxis von Mikrosampling-Geräten (Mitra VAMs) zum Nachweis neutralisierender Antikörper gegen virale Infektionskrankheiten der epidemischen Natur in einem realen Szenario für erwachsene Populationen.

Sekundäres Ziel: Entwickeln Sie eine serologische Plattform mit hohem Durchsatz zum Nachweis von neutralisierenden Antikörpern gegen Oviäre Influenza-Stämme, die mit dem Pandemiepotential (H5N1, H3N8, H9N2 usw.), MERS-CoV und Zika-Virus assoziiert sind.

Die klinische Studie wird als Querschnittsstudie durchgeführt.

Diese Studie wird Querschnitt sein. Dadurch können wir die diagnostische Leistung des Assays in einer realen Umgebung bewerten und potenzielle Störvariablen identifizieren. Um das Mikro -Sampling -Gerät zu validieren, werden wir 62 erwachsene Patienten einschreiben, die entweder für routinemäßige diagnostische Zwecke oder zur routinemäßigen medizinischen Untersuchung durch den Ergotorätiker einer Venenpunktion unterzogen werden. Aus diesem Grund sollten Venenpunktionsverfahren nicht als Intervention angesehen werden. In dieser Studie besteht die Intervention nur aus Kapillarprobenahme mit einem Lancet (d. H. Fingerstich). Dieser Vergleich konzentriert sich auf die Titration von Antikörpern gegen endemische Viren wie Influenza Typ A (d. H. Saisonale Influenza-Stämme wie PDMH1N1 oder H3N2) und SARS-COV-2. Der gleiche serologische Assay wird entwickelt, um die neutralisierenden Antikörper gegen aufstrebende Krankheitserreger wie die Vogel-Influenzaviren der H3- und H5-Subtypen, das Zika-Virus und MERS-CoV zu titrieren.

Die Studie ist Teil des von der Europäischen Union finanzierten Projekts Verdi (SARS-CoV2-Varianten-Bewertung in der Schwangerschafts- und Pädiatriekohorten).