수혈 합병증의 잠재적 중재자로서 저장된 RBC의 미립자

1. 연구 설계.

   1.1. 환자 인구. U of M School of Medicine의 주 교육 병원인 Jackson Memorial Hospital(JMH)에서 매년 500건 이상의 관상 동맥 우회 수술(CABG)이 시행됩니다. 연구 코디네이터는 공동 연구자인 Dr. Ricci와 긴밀히 협력하여 작업합니다. 그의 부서에서 다른 심장 전문의와 함께 일하는 Dr. Ricci는 CABG가 예정된 모든 환자를 선별할 것이며 아래 나열된 자격 기준을 충족하는 사람들은 참여하도록 초대될 것입니다. 37개월 동안(연구 4개월에서 41개월 사이) 500명의 환자가 모집되고 처음에 두 그룹으로 무작위 배정됩니다. 한 그룹(n=250)은 기존 PRBC(세척되지 않은 PRBC)를 받고 다른 그룹(n=250)은 고갈된 PRBC를 받습니다. MP의 (세척된 PRBC). CABG의 약 50%는 수술 중, 수술 후 약 25%는 PRBC 수혈이 필요합니다.

   환자 모집단은 다음과 같은 하위 그룹으로 더 분류될 수 있습니다: 하위 그룹 1(n=100), PRBC로 수술 수혈; 하위군 2(n = 100), 세척된 PRBC로 수술 수혈; 하위 그룹 3(n = 200), 수혈 없음; 하위군 1a(n=25), 수술 및 수술 후 PRBC 수혈; 하위군 1b(n = 25), 수술 중 수혈은 하지 않지만 PRBC로 수술 후 수혈; 하위군 2a(n = 25), 세척된 PRBC로 수술 및 수술 후 수혈; 그룹 2b(n = 25), 수술 중 수혈은 하지 않았지만 세척된 PRBC로 수술 후 수혈.

   이 연구의 주요 관심사 비교는 각각 약 100명의 환자가 있는 하위 그룹 1 대 2의 비교입니다. -- 수혈이 필요하지 않은 그룹(하위 그룹 3, n ≈ 200)은 "순수 비교" 그룹 역할을 합니다. 나머지 환자는 수술 후 수혈이 필요한 환자입니다. 1a, 1b, 2a, 2b군 환자의 특성과 그 결과를 확인하고 보조 분석에 포함시킨다. 소수의 환자만이 수술 후 수혈을 한 번 이상 받아야 할 것으로 예상됩니다. 2차, 3차 등 수술 후 수혈과 관련된 데이터가 수집되어 설명 목적 및 부수적인 통계 분석에 사용됩니다.

   1.2. Washed PRBC 그룹을 위한 수혈 알고리즘 프로토콜.

   일반 고려 사항

   잠재적인 연구 참가자를 선별하고 알려진 혈소판 기능 장애 또는 응고 병증이 있는 환자를 포함하여 제외 기준을 충족하는 사람들은 시험에 적합하지 않습니다. 정보에 입각한 동의서에 서명하면 자격이 있는 후보자는 두 가지 승인된 수혈 방법(일반 PRBC 또는 세척 PRBC) 중 하나로 무작위 배정됩니다.

   정상 PRBC 그룹으로 무작위 배정된 환자의 경우 수술 전, 수술 중 및 수술 후 기간 동안 수혈을 위한 일반적인 혈액 은행 절차를 따를 것입니다.

   세척된 PRBC 그룹으로 무작위 배정된 환자의 경우 다음 일반 규칙이 적용됩니다.

   규칙 1: PRBC는 수혈 지연을 피하기 위해 수술 전에 씻어야 합니다.

   규칙 2: 수술 중 또는 수술 후에 세척된 PRBC가 더 필요한 경우 수혈 최소 1시간 전에 혈액 은행에 알려야 합니다.

   규칙 3: 안전은 절대 타협하지 않으며 관상동맥 수술 환자의 수혈 요구 사항에 적용할 수 있는 치료 표준을 보존합니다. 응급 상황에서 PRBC를 세척할 시간이 충분하지 않으면 일반 PRBC를 수혈합니다.

   1.3. 혈액 샘플링.

   마취 유도 전, 수술 완료 후 1시간, 수술 후 1일 및 7일에 모든 환자에서 혈액 샘플(구연산 Vacutainer 2개 튜브)을 채취합니다. 혈액 샘플은 다음과 같이 코딩됩니다.

   • BSa1, 마취 유도 시 채취한 샘플 • BSa2 수술 후 1시간 • BSa3 수술 후 1일 • BSa4 수술 후 7일 •

   MP 프로파일링을 위해 튜브에 남아 있는 것을 포함하여 수혈된 모든 PRBC 백의 잔여 샘플을 채취합니다.

2. 임상 연구의 주요 목적.

   이 연구는 드문 주요 수혈 합병증을 연구하도록 설계되지 않았습니다. 두 가지 유형의 PRBC에 대한 생화학적 생리학적 숙주 반응에 대한 연구가 우리의 주요 관심사입니다. 그들은 이전에 설명한 민감한 분석에 의해 평가됩니다. 비정상 검사 결과를 보이는 환자 중 극히 일부만이 임상적으로 명백한 합병증을 나타낼 것으로 예상됩니다. 임상 연구의 주요 목적은 이러한 반응을 평가하고 다음과 관련하여 위에서 설명한 하위 그룹 1, 2 및 3을 비교하는 것입니다.

   2.1. 내피 장애, 응고 촉진 및 전 염증 반응, 산화 스트레스를 포함한 무증상 생리학적 숙주 반응;

   2.2. 활력 징후의 변화, 심장 장애, 호흡 장애, 산소포화도와 같은 경미하거나 미묘한 수혈 후 반응; 추가로 심장 수술의 단기(<30일) 합병증.

   2.3. 세 번째 목표는 실험실 바이오마커와 임상 결과(경미한 수혈 반응, 단기 수술 결과) 사이의 상관관계를 평가하여 수혈 및 수술 합병증의 부작용에 내재된 메커니즘에 대한 통찰력을 얻는 것입니다. 이것은 RMP에 기인하는지 여부에 관계없이 수혈 및 수술의 합병증 위험을 가장 잘 예측하는 테스트 또는 테스트 조합에 대한 유용한 데이터를 생성합니다.

   2.4. 네 번째 목표는 수술 후 1년의 사망률을 평가하는 것입니다. 이는 전화, 이메일 또는 일반 우편 연락을 통해 환자 또는 환자의 친척에게 전달됩니다.

3. 환자 모집; 무작위화; 수술 전 및 수술 전후 관리.

   3.1. 환자의 수술 전 평가 모집. 수술 전 평가의 정상적인 부분으로 모든 심장 수술 환자는 완전한 병력 및 신체 검사, 수술 전 일상적인 실험실 검사(CBC, 혈소판 수, 화학, 혈액 응고, 지질 프로필, CRP, 혈액형 포함) 및 심장 2-D 심초음파 및 심장 도관법을 포함한 평가.

   JMH에서 CABG가 예정된 모든 환자는 적격성 검사를 받게 됩니다. 모든 환자의 의료 기록을 검토하고 다음과 같은 수술 전 정보를 평가하여 연구 데이터베이스에 입력합니다. (2) 심장 정보: NYHA 클래스 I-IV, EKG, 박출률이 포함된 심초음파; (3) 기존의 의학적 상태: 고혈압, 당뇨병, 만성 폐쇄성 폐질환, 신장 기능, 간 기능, MI의 과거력, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 혈전증.

   아래 나열된 자격 기준을 충족하는 환자는 연구에 참여하도록 초대됩니다. 연구 코디네이터는 모집 및 후속 연구의 전체 과정에서 Co-I를 도울 것입니다. 연구 등록 전에 UM-IRB 지침에 따라 사전 서면 동의를 얻습니다.

   3.2. 무작위화. 정보에 입각한 동의서에 서명하면 참가자는 처음에 포장 적혈구(PRBC) 또는 세척 포장 세포(WPRBC)를 받도록 무작위로 배정됩니다. 무작위화 일정은 블록 크기가 다양한 블록 무작위화 체계를 사용하여 Dr. Gomez가 준비합니다. 무작위 배정 일정의 사본이 연구 코디네이터와 혈액 은행에 제공됩니다.

   동적 무작위화 체계:

   수혈이 필요하지 않은 일부 환자의 영향으로 인해 두 주요 그룹 간의 잠재적인 불균형을 방지하기 위해 동적 무작위배정 체계가 설계되었습니다. 간단히 말해서, 무작위배정 일정은 세척된 또는 세척되지 않은 충전 세포(PC)를 받기 위해 예비 환자를 순차적으로 할당하도록 설계될 것입니다. 그러나 수술 중 수혈이 필요하지 않은 환자가 있는 경우 이 환자는 그룹 3(비수혈)으로 재배정되어 대기열에서 건너뛰고 다음 환자가 대기열의 해당 위치에 배정됩니다. 그 위치는 수혈을 받지 않았기 때문에 사용되지 않았습니다).

4. 실험실 평가.

개요. 수혈 후 무증상 생리학적 반응(바이오마커)은 실험실 연구에 의해 평가될 것입니다. 광범위하게 관심의 초점은 내피 장애, 응고 촉진제, 전 염증성, 혈관 활성 및 산화 스트레스의 민감한 마커에 있습니다.

4.1. 일상적인 혈액 검사에는 CBC, 혈소판, 망상 적혈구 수, 혈액 화학, C 반응성 단백질(CRP), 지질 프로필, DIC 선별 및 용혈 검사가 포함됩니다.

4..2. 플라즈마 MP. 총 MP는 FITC-표지된 렉틴, Ulex에 의해 측정됩니다. GlyPhA에 의한 RMP; CD41 및 CD42+/CD31+에 의한 PMP; 아래에 명시된 기타.

4.3. 내피 장애. (표 C.1 참조). 마커 CD62E 또는 CD31+/CD42- 및 EMP 접합체를 사용하여 내피 MP(EMP) 분석에 의해 수행됩니다.

4.4. 응고 촉진 활동: 다음은 모두 응고 촉진 활동의 측면을 반영합니다: 혈소판 활성화 마커 CD62P; CD42에 의한 혈소판 MP(PMP); AnV+인 총 MP; TF+인 총 MP; 및 MP-매개 트롬빈 생성(MP-TGA); 트롬빈-안티트롬빈 복합체(TAT 복합체).

4.5. 염증 마커. 다음은 가장 유익한 것으로 선택되었습니다. (i) 유동 세포측정법에 의한 백혈구 MP(LMP): LMP는 백혈구 활성화를 반영하기 위해, 즉 염증 마커로서 많은 조사자들에 의해 받아들여집니다.

(ii) 백혈구 하위 집합에서 CD11b 발현. 백혈구 활성화 및 염증의 민감한 마커로 널리 인정됩니다. 간단하고 민감한 분석입니다.

(iii) 혈소판-백혈구 및 EMP-백혈구 복합체는 염증의 민감한 마커로 점점 더 많이 사용되고 있습니다.

(iv) 보체(C) 활성화. 유동 세포 계측법에 의한 MP 상의 C 성분 검출. 단편 C1q 및 C3은 유동 세포측정법에 의해 MP에서 측정됩니다. MP 관련 IgG/IgM은 관련 관심 대상이며 PI의 실험실에서 FITC-염소 항인간 Ab에 의해 측정됩니다.

(v) 백혈구 산화질소(NO): 백혈구 NO는 염증의 지표로 간주되지만 산화 상태에도 반응합니다. 또한 혈장 NO 수준과 느슨하게 결합되어 있기 때문에 혈관 색조를 반영할 수 있습니다.

4.6. 기타 바이오마커. (나). 플라즈마 및 MP 결합 CD40L. 염증 및 혈전증의 마커인 CD40L은 ELISA(Bender Med Systems)로 분석됩니다.

(ii) 산화 스트레스: 분석을 단순화하는 ELISA 키트가 합리적인 비용으로 제공됩니다. 우수한 감도(35 picrograms/mL) 때문에 Assay Designs EIA에서 키트를 선택했습니다.

(iii) 혈장 및 MP에서 아세틸콜린에스테라아제(AChE) 활성.

4.7. 환자에게 수혈된 PRBC 분취량에서 MP 분석. 앞서 언급한 바와 같이 환자에게 수혈된 각 PRBC 백의 잔여 혈액을 채취하여 MP 특성(예: 총 MP, RMP, 오염 MP(PMP, LMP, EMP), 응고 촉진 활성, CD40L. 이를 통해 세척된 PRBC에서 MP의 고갈을 확인하고 수용자에게 발생할 수 있는 부작용과 관련될 수 있는 비정상적인 특성을 평가할 수 있습니다.