Detektering av cirkulerande tumörceller (CTC) hos patienter med bröstcancer som genomgår kryokirurgi kombinerat med DC-CIK-behandling

1 dag före och 2 dagar efter kryokirurgi med eller utan DC-CIK-behandling, togs cirka 17 ml etylendiamintetraättiksyra (EDTA)-blod genom venpunktion från patienter med bröstcancer och friska frivilliga. Blodet från de friska frivilliga kommer att användas för att utvärdera känsligheten och specificiteten och som negativa kontrollceller. För att undvika kontaminering med hudceller kommer 2 mL blod att kasseras innan studieproverna tas. Kortfattat kommer de mononukleära cellerna att separeras från blodet över Ficoll-Paque i 20 minuter med 1800g vid 4℃. Gränssnittscellerna kommer att tas bort och tvättas, och de röda blodkropparna (RBC) kommer att tas bort med hjälp av en lysbuffert följt av en upprepad tvätt. De mononukleära cellerna kommer att räknas och alikvoteras för RT-PCR och multiparameterflödescytometri på basis av minst 2-3×106 celler för varje metod. Cellpelleten kommer att återsuspenderas i fosfatbuffrad saltlösning för multiparameterflödescytometri och i Trizol-reagens för RT-PCR. Mål: Identifiering av CTC kan leda till bättre diagnos och prognos och kan hjälpa till att välja en adekvat behandling.