Detecção de Células Tumorais Circulantes (CTCs) em Pacientes com Câncer de Mama Submetidas a Criocirurgia Combinada com Tratamento DC-CIK

1 dia antes e 2 dias após a criocirurgia com ou sem tratamento com DC-CIK, aproximadamente 17 mL de ácido etilenodiamino tetraacético (EDTA) - sangue foi coletado por punção venosa de pacientes com câncer de mama e voluntários saudáveis. O sangue dos voluntários sadios será utilizado para avaliação da sensibilidade e especificidade e como controle negativo das células. Para evitar a contaminação com células da pele, 2 mL de sangue serão descartados antes da coleta das amostras do estudo. Resumidamente, as células mononucleadas serão separadas do sangue sobre Ficoll-Paque por 20 min com 1800g a 4℃. As células da interface serão removidas e lavadas, e os glóbulos vermelhos (RBCs) serão removidos usando um tampão de lise seguido de uma lavagem repetida. As células mononucleares serão contadas e alíquotas por RT-PCR e citometria de fluxo multiparamétrica com base em no mínimo 2-3×106 células para cada metodologia. O pellet celular será ressuspenso em solução salina tamponada com fosfato para citometria de fluxo multiparamétrica e em reagente Trizol para RT-PCR. Objetivo: A identificação de CTCs pode levar a um melhor diagnóstico e prognóstico e pode ajudar a escolher uma terapia adequada.