Hladiny vodního vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VEGF) při neovaskularizaci typu 3

Jednalo se o pilotní, prospektivní, intervenční, případ-kontrolní studii zkoumající vodné hladiny VEGF v očích s NV související s AMD léčených intravitreálním bevacizumabem.

Klasifikace neovaskularizace byla založena na její anatomické lokalizaci, jak bylo zjištěno multimodálním zobrazením využívajícím FA (fluoresceinová angiografie), ICGA (indocyaninová zeleně angiografie) a OCT (optická koherentní tomografie), jak nedávno navrhli Freund et al.

Diagnostické postupy a sledování Na začátku všichni pacienti podstoupili měření BCVA pomocí diagramu studie časné léčby diabetické retinopatie (ETDRS) ve 4 metrech, biomikroskopie fundu, FA, ICGA a sd-OCT. Všechna vyšetření byla opakována při kontrolách s výjimkou angiografických testů.

Angiografické testy a OCT skeny byly zaznamenány pomocí Spectralis sd-OCT (Spectralis SD-OCT, Heidelberg Engineering, Heidelberg, Německo).

CMT byla vypočtena po získání sekvence 145 horizontálních řezů zaznamenaných v režimu s vysokým rozlišením (1024 A-scanů/30 stupňů) a pokrývajících oblast 20 stupňů (horizontálně) × 15 stupňů (vertikálně) se vzdáleností ~30 µm mezi jednotlivými sekcemi. Při následných vyšetřeních software pro zpracování obrazu umožnil přehodnocení přesně na stejném místě.

Snímky byly poté zpracovány analytickým programem "Mapa tloušťky". Pole 1 protokolu mapové analýzy (centrální 1 mm) bylo použito pro výpočty tloušťky centrální sítnice.

Vodný odběr vzorků a injekce bevacizumabu Všichni pacienti s neovaskularizací související s AMD dostali tři intravitreální injekce 1,25 mg/0,05 ml bevacizumabu (Avastin; Genentech Inc, South San Francisco, Kalifornie, USA) na začátku, 1. a 2. měsíc.

Před injekcí byla vyvolána lokální anestezie tetrakainovými (1%) očními kapkami. Povidon-jod byl aplikován na okraje víček, řasy, conjunctiva bulbi a fornices. Po aplikaci sterilní roušky bylo zavedeno víčkové speculum.

Bezprostředně před každou intravitreální injekcí byl proveden odběr vzorků vody aspirací 0,05 až 0,1 ml vody pomocí jehly 30 gauge připojené k tuberkulinové stříkačce na temporální limbus. Všechny vzorky byly odebrány na operačním sále pod kontrolou operačního mikroskopu.

Intravitreální injekce bevacizumabu (IVB) byla poté provedena pomocí jehly 30 gauge v inferotemporálním kvadrantu ve vzdálenosti 3,5 mm až 4 mm posteriorně od limbu.

Neředěné vodné vzorky byly přeneseny do sterilních nádob a okamžitě skladovány v mrazáku -80 °C až do analýzy.

Kontrolní skupina Referenční vzorky byly získány od 14 pacientů stejného věku podstupujících operaci katarakty.

Vzorky komorové vody byly získány stejným způsobem, jaký byl popsán výše pro oči s vlhkou AMD. Neředěné vodné vzorky byly přeneseny do sterilních nádob a okamžitě skladovány v mrazáku -80 °C až do analýzy.

Test vaskulárního endoteliálního růstového faktoru Odebrané vzorky byly před zahájením testu postupně ekvilibrovány na teplotu místnosti a zředěny 1:1 ředidlem vzorků poskytnutým výrobcem.

Obsah VEGF byl stanoven na 50 ul naředěného vzorku pomocí soupravy pro lidský VEGF ELISA (EHVEGF, Pierce Biotechnology, Rockford, Illinois, USA) podle pokynů výrobce a za použití rozšířené standardní křivky zahrnující 16, 8 a 4 pg/ml standardní bod. Všechny testy byly provedeny duplicitně. Minimální detekovatelná koncentrace VEGF byla 3,5 pg/ml. Hodnoty nižší než 3,5 pg/ml byly považovány za rovné 1 pro statistickou analýzu.